發(fā)布時間：2017-11-04 13:21

  本文關(guān)鍵詞：HOTAIR在CD133陽性胃癌細胞中的表達及其作用的研究

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【摘要】：目的研究長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA, LncRNA)HOTAIR在胃癌CD133 P日性細胞中的表達及其作用。方法免疫磁珠分選(Magnetic cell sorting,MACS)分選胃癌KATO-Ⅲ細胞中CDl33陽性和CD133陰性細胞,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(Reverse transcription polymerize chain reaction,RT-PCR)檢測其中HOTAIR和CD 133 mRNA的表達差異；小干擾RNA技術(shù)(Small interfering RNA, siRNA)干擾CD133陽性KATO-Ⅲ細胞中HOTAIR的表達,RT-PCR檢測RNA干擾效率及干擾HOTAIR對CD133及EMT(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相關(guān)因子mRNA表達的影響,Transwell檢測干擾HOTAIR對細胞的遷移及侵襲能力的影響。結(jié)果免疫磁珠分選(MACS)分選后,CD133陽性KATO-Ⅲ細胞中CD 133 mRNA的表達(0.6056±0.0163)明顯高于CD133陰性組CD133 mRNA的表達(0.4337±0.0115,p=0.000)及未分選組C D133 mRNA的表達(0.4451±0.0175,p=0.000)。CD133陽性KATO-Ⅲ細胞中HOTAIR mRNA的表達(0.7143±0.0480)明顯高于CD133陰性組HOTAIR mRNA的表達(0.4978±0.0133,p=0.000)及未分選組HOTAIR mRNA的表達(0.6169±0.0084,p=0.006)。RNA干擾技術(shù)(siRNA)干擾CDl33陽性KATO-Ⅲ細胞中HOTAIR基因表達后,干擾組(siH)HOTAIR ml RNA的表達(0.3555+0.0110)明顯低于陰性干擾組(NC)HOTAIR mRNA的表達(0.6326±0.0212,p=0.000)及未干擾組(Ctrl)HOTAIR mRNA的表達(0.6620±0.0162, p=0.000)。RNA干擾技術(shù)(siRNA)干擾CD133陽性KATO-Ⅲ細胞中HOTAIR基因表達后,干擾組(siH)CD133 mRNA的表達(0.4396±0.0181)明顯低于陰性干擾組(NC)CD133 mRNA的表達(0.6221±0.0145,p=0.000)及未干擾組(Ctrl)CD133 mRNA的表達(0.6342±0.0089,p=0.000)。RNA干擾技術(shù)(siRNA)干擾CD133陽性KATO-Ⅲ細胞中HOTAIR基因表達后,干擾組(siH)E-cadherin mRNA的表達(0.8262±0.0044)明顯高于陰性干擾組(NC)E-cadherin mRNA的表達(0.6377±0.0160,p=0.000)及未干擾組(Ctrl)E-cadherin mRNA的表達(0.6281±0.0076,p=0.000),干擾組(siH)N-cadherinmRNA的表達(0.3426±0.0181),明顯低于陰性干擾組(NC)N-cadherin mRNA的表達(0.6394±0.0070,p=0.000)及未干擾組(Ctrl)N-cadherin mRNA的表達(0.6287±0.0167,p=0,000)。Transwell遷移實驗發(fā)現(xiàn),RNA干擾CD133陽性KATO-Ⅲ細胞中HOTAIR的表達后,干擾組(siH)穿膜細胞數(shù)(26.6667±2.5167),顯著低于陰性干擾組(NC)穿膜細胞數(shù)(68±15.6204,p=0.003)及未干擾組(Ctrl)穿膜細胞數(shù)(69±10.1489,p=0.003)。Transwell侵襲實驗發(fā)現(xiàn),RNA干擾CD133陽性KATO-Ⅲ細胞中HOTAIR的表達后,干擾組(siH)穿膜細胞數(shù)(16.666±3.2146),顯著低于陰性干擾組(NC)穿膜細胞數(shù)(36.6667±1.5275,p=0.002)及未干擾組(Ctrl)穿膜細胞數(shù)(37.0000±7.0000,p=0.002).結(jié)論HOTAIR在CD133陽性KATO-Ⅲ胃癌細胞中的表達高于CD133陰性細胞,干擾HOTAIR表達可降低CD133陽性KATO-Ⅲ胃癌細胞中CD133mRNA的表達,抑制胃癌細胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),抑制胃癌細胞的遷移及侵襲。
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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本文編號：1139602