發(fā)布時間：2017-11-03 08:24

  本文關(guān)鍵詞：LPS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用及機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 胃癌 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 脂多糖 Sonic Hedgehog NF-κB

【摘要】：目的探討LPS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用及機(jī)制,為胃癌治療提供新思路。方法LPS作用于人胃癌細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化、Western blot和Real-time PCR技術(shù)檢測EMT相關(guān)分子的表達(dá)、劃痕-愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力。Western blot和Real-time PCR技術(shù)檢測LPS誘導(dǎo)前后Shh信號通路相關(guān)分子(Shh、Ptch1、Gli2)的表達(dá)水平;采用Shh信號通路特異性抑制劑環(huán)巴胺聯(lián)合LPS作用于人胃癌細(xì)胞,觀察抑制Shh信號通路對LPS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞EMT、遷移和侵襲能力的影響。利用NF-κB信號通路特異性抑制劑BAY11-7028,觀察抑制NF-κB信號通路對LPS誘導(dǎo)Shh信號通路活化的影響,以確定LPS是否通過NF-κB信號通路調(diào)控Shh信號通路。結(jié)果10μg/m L LPS作用于人胃癌細(xì)胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,AGS細(xì)胞形態(tài)由鵝卵石樣變?yōu)殚L梭形,HGC-27和SGC-7901細(xì)胞形態(tài)無明顯改變;Real-time PCR結(jié)果顯示,10μg/m L LPS作用于人胃癌細(xì)胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌細(xì)胞的上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-cadherin m RNA表達(dá)較對照組降低,間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物N-cadherin m RNA表達(dá)較對照組升高,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Western blot結(jié)果顯示10μg/m L LPS作用于人胃癌細(xì)胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌細(xì)胞的上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-cadherin蛋白表達(dá)較對照組顯著升高,間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物N-cadherin蛋白表達(dá)較對照組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);劃痕-愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,10μg/m L LPS作用于人胃癌細(xì)胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力較對照組顯著增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。10μg/m L LPS作用于人胃癌細(xì)胞AGS、HGC-27和SGC-790148 h后,Shh信號通路相關(guān)分子Shh、Gli2、Ptch1 m RNA和蛋白表達(dá)水平較對照組顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。10μM環(huán)巴胺和10μg/m L LPS聯(lián)合作用于人胃癌細(xì)胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌細(xì)胞Shh信號通路相關(guān)分子Shh、Gli2、Ptch1 m RNA和蛋白表達(dá)水平較LPS組顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);三株人胃癌細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-cadherin蛋白表達(dá)較LPS組顯著升高,間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物N-cadherin、Slug和Vimentin蛋白表達(dá)較LPS組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);三株人胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力較LPS組亦顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。10μg/m L LPS作用于人胃癌細(xì)胞SGC-7901 48 h后,NF-κB p65蛋白表達(dá)較對照組顯著升高,IκBα蛋白表達(dá)顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。10μM BAY11-7028和10μg/m L LPS聯(lián)合作用于人胃癌細(xì)胞SGC-7901 48 h后,Shh信號通路相關(guān)分子Shh、Gli2、Ptch1的m RNA和蛋白表達(dá)水平較LPS組顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論LPS可以誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT,促進(jìn)人胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。LPS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT的機(jī)制可能與激活NF-κB/Shh信號通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 脂多糖 Sonic Hedgehog NF-κB
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-16
• 第一部分 LPS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞EMT16-35
• 1 實(shí)驗(yàn)材料16-20
• 1.1 細(xì)胞系16
• 1.2 主要試劑16-18
• 1.3 主要儀器18
• 1.4 主要試劑配制18-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-27
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)20-21
• 2.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察21
• 2.3 劃痕-愈合實(shí)驗(yàn)21
• 2.4 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)21-22
• 2.5 MTS法檢測LPS對人胃癌細(xì)胞增殖的影響22
• 2.6 實(shí)時熒光定量PCR22-24
• 2.7 Western blot檢測蛋白的表達(dá)24-27
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27
• 3 結(jié)果27-32
• 3.1 LPS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變27-28
• 3.2 LPS誘導(dǎo)E-cadherin和N-cadherin表達(dá)變化28-29
• 3.3 LPS促進(jìn)人胃癌細(xì)胞遷移29-32
• 3.4 LPS促進(jìn)人胃癌細(xì)胞侵襲32
• 4 討論32-35
• 第二部分 Shh信號通路介導(dǎo)LPS誘導(dǎo)的人胃癌細(xì)胞EMT35-45
• 1 實(shí)驗(yàn)材料35-36
• 1.1 細(xì)胞系35
• 1.2 主要試劑35-36
• 1.3 主要儀器36
• 1.4 主要試劑配制36
• 2 實(shí)驗(yàn)方法36-37
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)36
• 2.2 實(shí)時熒光定量PCR36
• 2.3 Western blot法檢測蛋白的表達(dá)36
• 2.4 劃痕-愈合實(shí)驗(yàn)36
• 2.5 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)36
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析36-37
• 3 結(jié)果37-42
• 3.1 LPS激活人胃癌細(xì)胞Shh信號通路37-38
• 3.2 Cyclopamine抑制LPS激活Shh信號通路38-40
• 3.3 Cyclopamine對EMT標(biāo)志分子表達(dá)的影響40-41
• 3.4 Cyclopamine抑制LPS誘導(dǎo)的人胃癌細(xì)胞遷移增強(qiáng)41-42
• 3.5 Cyclopamine抑制LPS誘導(dǎo)的人胃癌細(xì)胞侵襲增強(qiáng)42
• 4 討論42-45
• 第三部分 NF-kB信號通路在LPS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞Shh信號活化中的作用45-50
• 1 實(shí)驗(yàn)材料45-46
• 1.1 細(xì)胞系45
• 1.2 主要試劑45-46
• 1.3 主要儀器46
• 2 實(shí)驗(yàn)方法46
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)46
• 2.2 實(shí)時熒光定量PCR46
• 2.3 Western blot法檢測蛋白的表達(dá)46
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析46
• 3 結(jié)果46-49
• 3.1 LPS激活人胃癌細(xì)胞NF-κB信號通路46-47
• 3.2 LPS通過NF-KB信號通路激活人胃癌細(xì)胞Shh信號通路47-49
• 4 討論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 附錄一 英文縮寫詞表54-55
• 附錄二 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文專利及參加科研情況55-56
• 致謝56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 曹景利;朱學(xué)良;;上皮細(xì)胞極性的建立和維持[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2010年02期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳茜子;Hedgehog信號通路促進(jìn)卵巢癌上皮間質(zhì)化[D];華中科技大學(xué);2012年

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本文編號：1135399