本文關鍵詞：IL-17F在胃癌組織中的表達及其對胃癌細胞生物學特性的影響

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【摘要】：目的:檢測IL-17F在胃癌中的表達,探討IL-17F促進胃癌進展的作用機制。方法:1采用RT-PCR和western-blot方法分別檢測IL-17Fm RNA和蛋白在胃癌患者癌組織和癌旁對照組織中的表達,分析其與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關系。2采用MTT法,檢測不同濃度外源性IL-17F(1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、200ng/ml)對SGC7901細胞的增殖活性的影響。3用RT-PCR和western-blot方法檢測IL-17F si RNA基因沉默后SGC-7901細胞中IL-17F的m RNA和蛋白表達情況。4采用western-blot分別檢測:沉默IL-17R基因后,IL-17F作用SGC7901細胞后空載體轉染組、轉染組中細胞STAT3的表達情況;阻斷TPL2活性后,IL-17F作用SGC7901細胞后,細胞STAT3表達的情況。5采用細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗分別檢測,IL-17R基因沉默前后和TPL2抑制劑TKI處理前后,IL-17F對SGC7901細胞遷移能力和侵襲能力的影響。6采用ELISA法檢測,IL-17R基因沉默前后和TPL2抑制劑TKI處理前后,IL-17F對SGC7901細胞分泌IL-6、IL-8和VEGF的影響。結果:1 RT-PCR實驗結果顯示,與癌旁對照組織相比,胃癌組織內IL-17F、VEGF和IL-6 m RNA表達顯著增高(0.6286±0.2448 vs 0.1553±0.0286、0.2965±0.0527vs 0.1438±0.0295、0.4555±0.1897 vs 0.2357±0.0695)并且IL-17F m RNA表達水平與VEGF和IL-6 m RNA表達水平明顯相關(P0.01)。2 Western-blot實驗結果顯示,與癌旁對照組織相比,胃癌組織內IL-17F蛋白表達顯著增高(0.3861±0.1978 vs 0.1347±0.0563)(P0.05)。3直線相關分析結果顯示,胃癌組織內IL-17F m RNA和蛋白表達水平與患者TNM分期明顯相關,而與患者的性別、年齡和腫瘤大小無相關性。4 MTT實驗結果顯示,不同濃度(1ng/ml,10ng/ml,100ng/ml,200ng/ml)IL-17F作用24h,對SGC7901細胞的體外增殖活性無明顯影響,差異無統(tǒng)計學意義。5 IL-17R si RNA基因轉染后,SGC7901細胞IL-17R表達將IL-17R si RNA重組質粒轉染SGC7901細胞后,檢測IL-17R表達,結果顯示,與轉染空載體組相比,轉染IL-17R si RNA質粒的SGC7901細胞中表達水平明顯降低6沉默IL-17R基因后IL-17F對SGC7901細胞遷移能力的影響將IL-17R si RNA重組質粒轉染SGC7901細胞后,檢測IL-17F對細胞遷移能力的影響,結果顯示,與轉染空載體組相比,轉染IL-17R si RNA的SGC7901細胞經(jīng)IL-17F處理后,向劃痕中間遷移的距離明顯縮小,差異有統(tǒng)計學意義。7沉默IL-17R基因后IL-17F對SGC7901細胞侵襲能力的影響將IL-17R si RNA重組質粒轉染SGC7901細胞后,檢測IL-17F對細胞侵襲能力的影響,結果顯示,與轉染空載體組相比,轉染IL-17R si RNA的SGC7901細胞經(jīng)IL-17F處理后,穿膜細胞數(shù)明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義。8沉默IL-17R基因后IL-17F對SGC7901細胞STAT3表達的影響將IL-17R si RNA重組質粒轉染SGC7901細胞后,檢測IL-17F對細胞STAT3表達的影響,結果顯示,與轉染空載體組相比,轉染IL-17R si RNA的SGC7901細胞經(jīng)IL-17F處理后,磷酸化STAT3蛋白表達水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義。9沉默IL-17R基因后IL-17F對SGC7901細胞分泌細胞因子的影響將IL-17R si RNA重組質粒轉染SGC7901細胞后,檢測IL-17F對SGC7901細胞分泌細胞因子的影響,結果顯示,與轉染空載體組相比,轉染IL-17R si RNA的SGC7901細胞經(jīng)IL-17F處理后,SGC7901細胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-8、VEGF的分泌水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義。10阻斷TPL2活性后,IL-17F對SGC7901細胞遷移能力的影響。采用10μmol/LTKI處理SGC7901細胞后,細胞劃痕實驗檢測IL-17F對SGC7901細胞遷移能力的影響,結果顯示,與對照組相比,TKI處理組細胞經(jīng)IL-17F作用后向劃痕中央遷移的距離明顯縮小。(560.8±13.274vs836±12.227),差異有統(tǒng)計學意義。11阻斷TPL2活性后IL-17F對SGC7901細胞侵襲能力的影響采用10μmol/LTKI處理SGC7901細胞后,transwell實驗檢測IL-17F對SGC7901細胞侵襲能力的影響,結果顯示,與對照組相比,TKI處理組細胞經(jīng)IL-17F作用后SGC7901細胞穿膜細胞數(shù)明顯減少(117±11.8321vs222.4±28.8756),差異有統(tǒng)計學意義。12阻斷TPL2活性后IL-17F對SGC7901細胞STAT3表達的影響采用10μmol/LTKI處理SGC7901細胞后,western-blot實驗檢測IL-17F對SGC7901細胞STAT3表達的影響,結果顯示,與對照組相比,TKI處理組細胞經(jīng)IL-17F作用后,磷酸化STAT3表達水平明顯降低。13阻斷TPL2活性后IL-17F對SGC7901細胞分泌細胞因子的影響采用10μmol/LTKI處理SGC7901細胞后,ELISA實驗檢測IL-17F對SGC7901細胞分泌細胞因子的影響,結果顯示,與對照組相比,TKI處理組細胞經(jīng)IL-17F作用后,SGC7901細胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-8和VEGF的分泌水平(分別為171.9±9.5vs129.8±9.35,324.5±11.82vs301.3±12.37,448.1±13.55vs400±9.63pg/ml)顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義。結論:1胃癌組織內IL-17F表達量增高并與患者TNM分期相關,提示IL-17F可能促進胃癌的進展。2胃癌組織中IL-17F表達量增高與VEGF和IL-6表達量增高明顯相關,提示IL-17F可能通過上調IL-6和VEGF的表達促進胃癌的進展。3外源性IL-17F可能通過細胞表面的IL-17R作用于TPL2-STAT3信號通路,誘導胃癌細胞遷移、侵襲和分泌IL-6、IL-8和VEGF,促進胃癌的進展。
【關鍵詞】：胃癌 IL-17F IL-17R STAT3 侵襲 遷移
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫12-13
• 引言13-15
• 第一部分IL-17F在胃癌組織中的表達15-33
• 前言15
• 材料與方法15-21
• 結果21-22
• 附圖22-25
• 附表25-27
• 討論27-28
• 小結28
• 參考文獻28-33
• 第二部分IL-17F對胃癌細胞生物學特性的影響及其機制研究33-61
• 前言33
• 材料與方法33-42
• 結果42-45
• 附圖45-55
• 附表55-57
• 討論57-59
• 小結59
• 參考文獻59-61
• 結論61-62
• 綜述IL-17F的信號傳導機制及其與疾病的關系62-71
• 參考文獻66-71
• 致謝71-72
• 個人簡歷72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 彭波;李華;王育斌;;結直腸癌患者癌組織中IL-17A和IL-17F的表達及意義[J];武漢大學學報(醫(yī)學版);2013年03期

2 張平;張蓉;周小勇;;IL-17F在銀屑病皮損中的表達及意義[J];中國皮膚性病學雜志;2010年01期

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本文編號：1129329