本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍上調(diào)TIP30表達(dá)抑制低劑量索拉非尼的促肝癌轉(zhuǎn)移作用

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【摘要】：目的:低劑量的索拉非尼可以抑制肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的生長,但可促進(jìn)其轉(zhuǎn)移的發(fā)生。本研究目的為明確二甲雙胍能否增強(qiáng)低劑量索拉非尼治療肝細(xì)胞肝癌的療效并逆轉(zhuǎn)其促轉(zhuǎn)移的效果,并探討其相關(guān)的分子作用機(jī)制。內(nèi)容:研究二甲雙胍和低劑量索拉非尼兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用,對于治療肝癌細(xì)胞系MHCC97H建立的裸鼠原位瘤模型的療效,觀察腫塊大小、肺轉(zhuǎn)移情況以及荷瘤裸鼠的生存期;利用肝癌細(xì)胞系進(jìn)行相關(guān)的細(xì)胞學(xué)實驗,檢測二甲雙胍、索拉非尼以及兩者聯(lián)合應(yīng)用后相關(guān)蛋白的變化以及細(xì)胞的增殖與侵襲能力的變化,進(jìn)一步研究可能的分子作用機(jī)制。方法:1)在裸鼠皮下種植肝癌細(xì)胞MHCC97H使其成瘤,四周后,將皮下瘤塊剪成約1mm3的小腫塊,而后原位接種到裸鼠的肝臟上,建立裸鼠原位瘤模型。每天分別給予二甲雙胍(200 mg/kg)、索拉非尼(30 mg/kg)以及或二者聯(lián)合使用進(jìn)行灌胃治療,治療4周后觀察裸鼠原位瘤大小、肺轉(zhuǎn)移的情況以及荷瘤裸鼠的生存期。2)進(jìn)行肝癌細(xì)胞系MHCC97H體外實驗研究,應(yīng)用Western blotting、Transwell以及CCK-8等實驗技術(shù),觀察二甲雙胍(5 m M或者10m M)、索拉非尼(5mM)以及兩者聯(lián)合應(yīng)用后肝癌細(xì)胞系MHCC97H中TIP30、p-AMPK以及TXN(Thioredoxin)蛋白的表達(dá)情況,同時檢測細(xì)胞的增殖及侵襲能力變化,以便進(jìn)一步探討相關(guān)的分子作用機(jī)制。結(jié)果:1)體內(nèi)實驗表明,索拉非尼和二甲雙胍聯(lián)合治療可以延長肝臟原位荷瘤裸鼠的中位生存期,減小原位腫瘤的體積并且減少腫瘤肺轉(zhuǎn)移。2)在體外實驗中,聯(lián)合應(yīng)用索拉非尼和二甲雙胍處理肝癌細(xì)胞系MHCC97H后發(fā)現(xiàn),二甲雙胍可通過激活A(yù)MPK通路來增加肝癌細(xì)胞中TIP30蛋白的表達(dá),索拉非尼抑制TIP30蛋白的表達(dá),而聯(lián)合用藥后,肝癌細(xì)胞中TIP30蛋白的表達(dá)量顯著恢復(fù)。腫瘤轉(zhuǎn)移正相關(guān)的TXN的蛋白表達(dá)量在聯(lián)合用藥后顯著降低,且受到TIP30負(fù)性調(diào)控。索拉非尼和二甲雙胍聯(lián)合應(yīng)用后肝癌細(xì)胞MHCC97H的增殖能力與侵襲能力均受到了明顯抑制。結(jié)論:二甲雙胍可以增強(qiáng)低劑量索拉非尼治療肝細(xì)胞癌的療效并逆轉(zhuǎn)其促轉(zhuǎn)移的效果,其主要的作用機(jī)制可能是通過激活A(yù)MPK通路來上調(diào)TIP30蛋白的表達(dá),進(jìn)而負(fù)性調(diào)控TXN的表達(dá)來抑制腫瘤的生長能力與轉(zhuǎn)移能力。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞肝癌 二甲雙胍 索拉非尼 TIP30 硫氧還蛋白
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11
• 研究目的、方法11-13
• 對象和方法13-31
• 1.1 實驗材料13-16
• 1.1.1 細(xì)胞系13
• 1.1.2 實驗動物13
• 1.1.3 主要實驗試劑13-15
• 1.1.4 實驗試劑盒15
• 1.1.5 主要儀器設(shè)備15-16
• 1.1.6 主要實驗分析作圖軟件16
• 1.2 實驗方法16-31
• 1.2.1 主要實驗試劑和溶液的配制16-19
• 1.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇19
• 1.2.3 細(xì)胞傳代19-20
• 1.2.4 細(xì)胞凍存20
• 1.2.5 細(xì)胞計數(shù)20
• 1.2.6 利用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染20-21
• 1.2.7 細(xì)胞蛋白的提取21-22
• 1.2.8 組織蛋白的提取22
• 1.2.9 蛋白濃度測定22-23
• 1.2.10 聚丙烯酰胺凝膠電泳23-24
• 1.2.11 濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜24-25
• 1.2.12 PVDF膜的封閉、抗體孵育及曝光25-26
• 1.2.13 Transwell侵襲實驗26-28
• 1.2.14 動物模型建立與處理方式28-29
• 1.2.15 統(tǒng)計學(xué)分析29
• 1.2.16 倫理認(rèn)證29-31
• 結(jié)果31-39
• 2.1 索拉非尼和二甲雙胍聯(lián)合應(yīng)用可以延長原位荷瘤裸鼠的中位生存期,減小原位腫瘤的體積和減弱肺轉(zhuǎn)移能力31-33
• 2.2 二甲雙胍通過激活A(yù)MPK途徑增加TIP30的表達(dá)33-34
• 2.3 索拉非尼聯(lián)合二甲雙胍通過提高M(jìn)HCC97H細(xì)胞系中TIP30蛋白的表達(dá)，，進(jìn)而抑制其增殖與侵襲能力34-36
• 2.4 TXN在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用，同時受到TIP30的負(fù)性調(diào)控36-39
• 討論39-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明46-47
• 綜述 索拉非尼與二甲雙胍在腫瘤防治中的作用47-63
• 綜述參考文獻(xiàn)54-63
• 致謝63-65
• 個人簡歷65

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本文編號：1127706