本文關(guān)鍵詞：TTF1-NP誘導(dǎo)人肝癌HepG-2細(xì)胞自噬的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： TTF1-NP HepG-2 細(xì)胞自噬 PI3K/Akt/mTOR JNK

【摘要】：目的 探討5,2',4'-三羥基-6,7,5'-三甲氧基黃酮(TTF1-NP)對(duì)人肝癌HepG-2自噬的影響及其相關(guān)的作用機(jī)制方法通過(guò)MTT法檢測(cè)不同濃度(15-240μM)的TTF1-NP作用不同時(shí)間(12 h,24 h,48h)后對(duì)HepG-2細(xì)胞存活率的影響；利用透射電子顯微鏡(transmission electron microscope, TEM)觀察細(xì)胞中自噬體的形成；Western Blot檢測(cè)TTF1-NP在不同濃度和不同時(shí)間下作用HepG-2細(xì)胞后自噬標(biāo)志蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表達(dá),及PI3K/Akt/mTOR通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR和MAPK/JNK通路中p-JNK的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果1.MTT法細(xì)胞活力檢測(cè)：TTF1-NP能夠降低HepG-2細(xì)胞的存活率,并且隨著藥物濃度和作用時(shí)間的增加,抑制增殖作用越明顯,且呈現(xiàn)一定的濃度-時(shí)間依賴(lài)性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.透射電子顯微鏡檢測(cè)：TTF1-NP作用后,HepG-2細(xì)胞中有典型雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體及單層膜的自噬溶酶體出現(xiàn),提示TTF1-NP誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞自噬的產(chǎn)生。3.自噬標(biāo)志蛋白檢測(cè)：利用Western Blot對(duì)LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白檢測(cè)得出,對(duì)照組中,兩種蛋白表達(dá)水平較低,隨著藥物濃度及作用時(shí)間的增加,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表達(dá)水平逐漸增加,自噬水平升高。4. PI3K/Akt/mTOR通路蛋白檢測(cè)：Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示,對(duì)照組細(xì)胞p-Akt, p-mTOR表達(dá)水平較高,隨著TTF1-NP藥物濃度和作用時(shí)間增加,二者的表達(dá)逐漸降低；加入PI3K/Akt/mTOR通路激動(dòng)劑insulin后,與對(duì)照組相比,insulin+對(duì)照組中的p-Akt, p-mTOR表達(dá)升高(P0.05); TTF1-NP+insulin組中p-Akt, p-mTOR較TTF1-NP組表達(dá)升高(P0.01), LC3-Ⅱ表達(dá)降低(P＜0.01),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5. MAPK/JNK通路蛋白檢測(cè)：Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),p-JNK隨著TTF1-NP藥物濃度和作用時(shí)間的增加表達(dá)逐漸升高。加入JNK抑制劑SP600125后,TTF1-NP+SP600125組中的p-JNK, LC3-Ⅱ的蛋白水平較TTF1-NP組降低,差異顯著,而與對(duì)照組相比,二組中的兩蛋白顯著升高(P0.01)。結(jié)論TTF1-NP可以誘導(dǎo)人肝癌HepG-2自噬。TTF1-NP誘導(dǎo)人肝癌HepG-2細(xì)胞自噬的作用機(jī)制可能與抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路及激活MAPK/JNK信號(hào)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：TTF1-NP HepG-2 細(xì)胞自噬 PI3K/Akt/mTOR JNK
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 中英文縮略詞9-12
• 第一章 引言12-16
• 第二章 材料16-18
• 2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)藥物16
• 2.3 實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 2.4 實(shí)驗(yàn)儀器17-18
• 第三章 方法18-24
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)18
• 3.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力18
• 3.3 透射電子顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察細(xì)胞自噬18-20
• 3.4 Western Blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)20-22
• 3.5 數(shù)據(jù)處理與分析22-24
• 第四章 結(jié)果24-30
• 4.1 MTT法對(duì)細(xì)胞存活率檢測(cè)結(jié)果24
• 4.2 透射電子顯微鏡對(duì)自噬的形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果24-25
• 4.3 Western Blot對(duì)自噬標(biāo)志蛋白檢測(cè)結(jié)果25-26
• 4.4 TTF1-NP誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞自噬的作用機(jī)制26-30
• 第五章 討論30-35
• 第六章 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 致謝41

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