本文關(guān)鍵詞：乳腺癌細(xì)胞內(nèi)Mfn2基因沉默的表觀遺傳學(xué)機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 乳腺癌 MCF-7細(xì)胞 Mfn2基因 DNA甲基化 5-氮雜-2’-脫氧胞苷 甲基化特異性PCR

【摘要】：目的本研究通過解析Mfn2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)對其表達(dá)水平及細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,旨在探討在人乳腺癌細(xì)胞中Mfn2基因沉默的表觀遺傳學(xué)機(jī)制,為乳腺癌發(fā)病機(jī)制的理解及Mfn2基因作為乳腺癌治療新靶點(diǎn)提供表觀遺傳學(xué)依據(jù)。方法1實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR)法檢測人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞和正常乳腺細(xì)胞系HBL-100細(xì)胞,及乳腺癌及癌旁組織中Mfn2 m RNA的表達(dá)水平;2采用甲基化特異性PCR(MSPCR)法檢測MCF-7細(xì)胞和HBL-100細(xì)胞,及乳腺癌及癌旁組織中Mfn2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài);3不同濃度甲基化酶抑制劑5-aza-Cd R處理MCF-7細(xì)胞5天后,MSPCR法檢測Mfn2基因啟動子區(qū)甲基化的變化情況;RT-q PCR法檢測Mfn2 m RNA表達(dá)水平的變化情況;細(xì)胞免疫化學(xué)染色法和western blot法檢測Mfn2蛋白的表達(dá)水平變化情況;4不同濃度5-aza-Cd R處理MCF-7細(xì)胞1-5天內(nèi),MTT法檢測MCF-7細(xì)胞生長增殖的變化情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測MCF-7細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的變化情況;倒置顯微鏡下觀察MCF-7細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果1與HBL-100細(xì)胞相比,MCF-7細(xì)胞中Mfn2 m RNA呈低水平表達(dá),兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與對應(yīng)的癌旁組織相比,7例乳腺癌組織中Mfn2 m RNA表達(dá)水平均較低,兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);2與HBL-100細(xì)胞相比,MCF-7細(xì)胞中Mfn2基因啟動子區(qū)呈高甲基化狀態(tài);7例癌旁組織中1例發(fā)生了甲基化,甲基化率為14.3%,7例乳腺癌組織中有6例發(fā)生了甲基化,甲基化率為85.7%,與癌旁組織的甲基化率相比有顯著性差異(P0.05);3經(jīng)5-aza-Cd R處理的MCF-7細(xì)胞內(nèi)Mfn2基因啟動子區(qū)甲基化水平降低,且呈濃度依賴趨勢;經(jīng)5-aza-Cd R處理的MCF-7細(xì)胞內(nèi)Mfn2 m RNA和蛋白水平增高,亦呈濃度依賴趨勢;4經(jīng)5-aza-Cd R處理的MCF-7細(xì)胞,細(xì)胞的生長受到抑制;細(xì)胞周期阻滯在G2/M期;細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯變化,細(xì)胞變圓、伸出偽足,甚至出現(xiàn)空泡、凋亡。這些生物學(xué)特性的改變呈濃度和時(shí)間依賴趨勢。結(jié)論Mfn2基因啟動子區(qū)的甲基化可能是其在乳腺癌細(xì)胞內(nèi)沉默的重要表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制。去甲基化處理可促進(jìn)Mfn2的轉(zhuǎn)錄,提高m RNA和蛋白水平,進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞增殖。本實(shí)驗(yàn)為將Mfn2作為治療乳腺癌的新靶點(diǎn)提供了表觀遺傳學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 MCF-7細(xì)胞 Mfn2基因 DNA甲基化 5-氮雜-2’-脫氧胞苷 甲基化特異性PCR
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-12
• 引言12-14
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究14-58
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-21
• 1.1.1 細(xì)胞株14
• 1.1.2 組織標(biāo)本14
• 1.1.3 主要試劑14-16
• 1.1.4 主要儀器設(shè)備16
• 1.1.5 主要試劑配制16-21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-41
• 1.2.1 MCF-7 細(xì)胞和HBL-100細(xì)胞Mfn2 mRNA水平檢測21-25
• 1.2.2 乳腺癌和癌旁組織Mfn2 mRNA水平檢測25-26
• 1.2.3 MCF-7 細(xì)胞和HBL-100細(xì)胞Mfn2基因甲基化狀態(tài)檢測26-31
• 1.2.4 乳腺癌和癌旁組織Mfn2基因甲基化狀態(tài)檢測31-32
• 1.2.5 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞Mfn2基因甲基化的影響32-34
• 1.2.6 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞Mfn2 mRNA表達(dá)水平的影響34-35
• 1.2.7 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞Mfn2蛋白表達(dá)水平的影響35-39
• 1.2.8 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞生物學(xué)特性的影響39-41
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-51
• 1.3.1 MCF-7 和HBL-100細(xì)胞中Mfn2 mRNA表達(dá)水平41-42
• 1.3.2 乳腺癌和癌旁組織中Mfn2 mRNA表達(dá)水平42-43
• 1.3.3 MCF-7 和HBL-100細(xì)胞中Mfn2基因甲基化狀態(tài)43
• 1.3.4 乳腺癌和癌旁組織中Mfn2基因甲基化狀態(tài)43-44
• 1.3.5 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞中Mfn2啟動子區(qū)甲基化的影響44-45
• 1.3.6 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞中Mfn2 mRNA表達(dá)的影響45-47
• 1.3.7 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞中Mfn2蛋白表達(dá)的影響47-49
• 1.3.8 MTT法檢測 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞增殖的影響49
• 1.3.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞周期的影響49-51
• 1.3.10 5-aza-CdR對MCF-7 細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的影響51
• 1.4 實(shí)驗(yàn)討論51-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 第2章 綜述 DNA甲基化與乳腺癌關(guān)系的研究進(jìn)展58-73
• 2.1 DNA甲基化58-59
• 2.2 DNA甲基化和乳腺癌相關(guān)基因59-65
• 2.2.1 ER基因59
• 2.2.2 PR基因59-60
• 2.2.3 p16基因60-61
• 2.2.4 APC基因61
• 2.2.5 RASSF1A基因61
• 2.2.6 BRCA1基因61-62
• 2.2.7 ATM基因62-63
• 2.2.8 CDH1基因63
• 2.2.9 NOEY2基因63
• 2.2.10 TIMP3基因63-64
• 2.2.11 WWOX基因64
• 2.2.12 1433R基因64-65
• 2.3 DNA甲基化對乳腺癌的臨床意義65-67
• 2.3.1 DNA甲基化和乳腺癌診斷65-66
• 2.3.2 DNA甲基化和乳腺癌治療66
• 2.3.3 DNA甲基化和乳腺癌預(yù)后66-67
• 參考文獻(xiàn)67-73
• 結(jié)論73-74
• 致謝74-75
• 導(dǎo)師簡介75-78
• 作者簡介78-79
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集79

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