發(fā)布時(shí)間：2017-10-30 00:16

  本文關(guān)鍵詞：人重組IL-17D上調(diào)上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞sMICA的機(jī)制

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【摘要】：目的:通過(guò)檢測(cè)不同濃度的人重組IL-17D對(duì)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的體外生長(zhǎng)的作用,檢測(cè)細(xì)胞上清液中可溶性MHCI類鏈相關(guān)蛋白A(MHC class I-related protein A,s MICA)分子表達(dá)的變化和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP9)、NF-κB活化形式P-p65及未活化的p65的表達(dá)情況,初步探討白介素-17D(serum Interleukin-17D,IL-17D)對(duì)SKOV3細(xì)胞s MICA的調(diào)控作用及機(jī)制。為研究上皮性卵巢癌的免疫逃逸及診療提供依據(jù)。方法:1體外培養(yǎng)人卵巢漿液性乳頭狀腺癌細(xì)胞SKOV3,37℃,5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)傳代培養(yǎng)并凍存,于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。2選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV3細(xì)胞,以每孔1×106/ml密度接種于六孔培養(yǎng)板中,以不同溶度(10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)的人重組IL-17D共培養(yǎng)24h后,并設(shè)空白對(duì)照組。收集細(xì)胞上清液,并于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。3用ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞上清液中s MICA的表達(dá)。4提取SKOV3的RNA,利用real-time PCR在RNA水平檢測(cè)MMP9的表達(dá)情況。5以50 ng/m L的Rh IL-17D作用SKOV3細(xì)胞24 h后,用Western blot方法檢測(cè)MMP9、NF-κB活化形式P-p65和未活化的p65的表達(dá)。6檢測(cè)SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)及SKOV3+Rh IL-17D(50ng/m L)+NF-κB的抑制劑helenalin組中MMP9的表達(dá)。結(jié)果:1 Rh IL-17D對(duì)SKOV3細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響:在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入不同濃度的Rh IL-17D作用24 h,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),發(fā)現(xiàn)50ng/ml濃度時(shí)促進(jìn)細(xì)胞增長(zhǎng)最明顯。2 ELISA方法結(jié)果顯示,Rh IL-17D對(duì)卵巢癌細(xì)胞上清s MICA含量的影響:各組細(xì)胞上清液中s MICA的表達(dá)水平用?X±s表示,SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)組s MICA的水平(176.91±6.04)pg/ml明顯高于0、10、100組(162.09±11.28)pg/ml,(165.91±8.12)pg/ml,(166.64±10.00)pg/ml,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Rh IL-17D對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞上清中s MICA的表達(dá)增加呈溶度依賴性,以50ng/ml時(shí)增加最明顯(F=5.359,P0.05)。3實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)MMP-9 m RNA表達(dá),MMP-9的相對(duì)表達(dá)量用2-△△CT表示,結(jié)果用?X±s表示,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Rh IL-17D可以增加SKOV3細(xì)胞MMP-9 m RNA表達(dá)。SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)組MMP9的相對(duì)表達(dá)量約是SKOV3組的170倍,兩者相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4 Rh IL-17D對(duì)卵巢癌細(xì)胞MMP9及P-p65表達(dá)的影響:Western blot分別檢測(cè)總蛋白MMP9、p65及核蛋白P-p65的表達(dá),空白對(duì)照組MMP9、P-p65及p65蛋白表達(dá)量分別為0.621±0.110、0.528±0.121、0.810±0.01,50 ng/m LRh IL-17D組上述三種蛋白表達(dá)量分別為0.760±0.100、0.830±0.100、0.790±0.01,兩組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)及SKOV3+Rh IL-17D(50 ng/m L)+50ng/ml+NF-κB的抑制劑helenalin組中MMP9的表達(dá)量分別為0.338±0.002、0.692±0.003、0.556±0.003,三組差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:IL-17D明顯促進(jìn)人上皮性卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng),能增加s MICA,可能與其活化NF-κB-MMP-9信號(hào)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 白介素-17D MMP9 可溶性MICA m MICA 免疫逃逸
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文縮寫8-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-20
• 結(jié)果20-21
• 附圖21-24
• 附表24-26
• 討論26-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 綜述 關(guān)于基質(zhì)金屬蛋白酶9的研究進(jìn)展33-44
• 參考文獻(xiàn)38-44
• 致謝44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45

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本文編號(hào)：1115275