本文關(guān)鍵詞：Mcl-1的小分子抑制劑UMI-77對(duì)胃癌細(xì)胞的促凋亡作用

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【摘要】：背景及目的：胃癌是我國(guó)消化系統(tǒng)中發(fā)病率和死亡率極高的惡性腫瘤之一,化療是術(shù)后及部分晚期患者治療的主要方式,但腫瘤對(duì)化療藥物的耐受導(dǎo)致治療效果低下。細(xì)胞凋亡是普遍存在于機(jī)體的受多基因多信號(hào)途徑嚴(yán)格控制的一種死亡方式,細(xì)胞凋亡調(diào)控異常與腫瘤的形成密切相關(guān)。Bcl-2家族成員蛋白是調(diào)控內(nèi)源性凋亡的關(guān)鍵分子,Mcl-1是該家族中重要的抗凋亡蛋白,在抗腫瘤靶向研究中備受關(guān)注。本課題通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究Mcl-1的小分子抑制劑UMI-77對(duì)胃癌細(xì)胞的作用,以期為小分子抑制劑應(yīng)用于臨床提供更多思路。方法：1.UMI-77的促凋亡作用：采用不同濃度UMI-77處理胃癌細(xì)胞MGC-803、HGC-27和GES-1人胃黏膜細(xì)胞。MTS和結(jié)晶紫染色檢測(cè)UMI-77對(duì)細(xì)胞的生存、增殖以及克隆形成的影響。Annexin V/PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。2.UMI-77誘導(dǎo)胃癌MGC-803細(xì)胞凋亡機(jī)制研究：Western blot檢測(cè)caspase-3、 caspase-9、PARP的裂解活化、Bcl-2家族蛋白的表達(dá)以及胞漿、線粒體中Smac、Cyt C蛋白的釋放。JC-1染色流式細(xì)胞術(shù)分析UMI-77對(duì)細(xì)胞線粒體膜電位的影響。MTS法檢測(cè)廣譜caspases抑制劑(z-VAD-fmk)對(duì)UMI-77誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞凋亡的影響。3.沉默Mcl-1表達(dá)對(duì)UMI-77誘導(dǎo)凋亡的影響：特異性小干擾RNA沉默Mcl-1基因,將化學(xué)合成的Mcl-1 siRNA通過(guò)Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染MGC-803細(xì)胞,Western blot檢測(cè)Mcl-1基因的沉默效率。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)沉默Mcl-1對(duì)UMI-77誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞凋亡的影響。qRT-PCR檢測(cè)三株細(xì)胞中Mcl-1、Bcl-2以及Bcl-XLmRNA表達(dá)水平。結(jié)果：1.UMI-77處理細(xì)胞后,三株細(xì)胞的生存、增殖以及克隆形成受到抑制。其中UMI-77對(duì)MGC-803細(xì)胞的抑制作用明顯高于HGC-27、GES-1細(xì)胞。流式檢測(cè)結(jié)果顯示UMI-77可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞MGC-803凋亡,并具有時(shí)間劑量相關(guān)性；而UMI-77對(duì)HGC-27細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用不明顯,未檢測(cè)出凋亡的特征性改變。2.UMI-77作用后,MGC-803細(xì)胞線粒體膜電位下降,CytC、Smac在處理24 h后釋放入胞漿；caspase-9、caspase-3和PARP在UMI-77處理24 h即顯著活化,且z-VAD-fink能部分抑制UMI-77引起的細(xì)胞凋亡；Bcl-2、BcI-XL在UMI-77作用前后的蛋白表達(dá)水平?jīng)]有明顯改變,Mcl-1蛋白表達(dá)水平在UMI-77處理24 h后明顯下調(diào)；3.轉(zhuǎn)染Mcl-1 siRNA后MGC-803細(xì)胞中Mcl-1蛋白表達(dá)水平下調(diào),而轉(zhuǎn)染Mcl-1siRNA能部分抑制UMI-77誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。結(jié)論：三株細(xì)胞對(duì)UMI-77敏感性存在差異；與HGC-27和GES-1細(xì)胞相比,UMI-77可誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞顯著凋亡。線粒體膜電位改變以及線粒體蛋白Cyt C和Smac的釋放表明UMI-77可誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞發(fā)生內(nèi)源性凋亡。MGC-803對(duì)UMI-77的敏感性高于HGC-27和GES-1可能與其Mcl-1高表達(dá)有關(guān)。沉默Mcl-1表達(dá)可以部分抑制UMI-77誘導(dǎo)的凋亡,表明除了Mcl-1可能還存在其它調(diào)控參與UMI-77誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 小分子抑制劑 Mcl-1 UMI-77 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 1 引言12-16
• 2 實(shí)驗(yàn)材料16-22
• 3 實(shí)驗(yàn)方法22-31
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-43
• 5 討論43-46
• 6 結(jié)論46-47
• 7 參考文獻(xiàn)47-52
• 附錄52-53
• 致謝53-54
• 綜述54-64
• 參考文獻(xiàn)60-64

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本文編號(hào)：1110816