本文關(guān)鍵詞：Mcl-1的小分子抑制劑UMI-77對胃癌細(xì)胞的促凋亡作用

  更多相關(guān)文章： 胃癌 小分子抑制劑 Mcl-1 UMI-77 細(xì)胞凋亡

【摘要】：背景及目的：胃癌是我國消化系統(tǒng)中發(fā)病率和死亡率極高的惡性腫瘤之一,化療是術(shù)后及部分晚期患者治療的主要方式,但腫瘤對化療藥物的耐受導(dǎo)致治療效果低下。細(xì)胞凋亡是普遍存在于機(jī)體的受多基因多信號途徑嚴(yán)格控制的一種死亡方式,細(xì)胞凋亡調(diào)控異常與腫瘤的形成密切相關(guān)。Bcl-2家族成員蛋白是調(diào)控內(nèi)源性凋亡的關(guān)鍵分子,Mcl-1是該家族中重要的抗凋亡蛋白,在抗腫瘤靶向研究中備受關(guān)注。本課題通過體外實驗研究Mcl-1的小分子抑制劑UMI-77對胃癌細(xì)胞的作用,以期為小分子抑制劑應(yīng)用于臨床提供更多思路。方法：1.UMI-77的促凋亡作用：采用不同濃度UMI-77處理胃癌細(xì)胞MGC-803、HGC-27和GES-1人胃黏膜細(xì)胞。MTS和結(jié)晶紫染色檢測UMI-77對細(xì)胞的生存、增殖以及克隆形成的影響。Annexin V/PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率。2.UMI-77誘導(dǎo)胃癌MGC-803細(xì)胞凋亡機(jī)制研究：Western blot檢測caspase-3、 caspase-9、PARP的裂解活化、Bcl-2家族蛋白的表達(dá)以及胞漿、線粒體中Smac、Cyt C蛋白的釋放。JC-1染色流式細(xì)胞術(shù)分析UMI-77對細(xì)胞線粒體膜電位的影響。MTS法檢測廣譜caspases抑制劑(z-VAD-fmk)對UMI-77誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞凋亡的影響。3.沉默Mcl-1表達(dá)對UMI-77誘導(dǎo)凋亡的影響：特異性小干擾RNA沉默Mcl-1基因,將化學(xué)合成的Mcl-1 siRNA通過Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染MGC-803細(xì)胞,Western blot檢測Mcl-1基因的沉默效率。流式細(xì)胞術(shù)檢測沉默Mcl-1對UMI-77誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞凋亡的影響。qRT-PCR檢測三株細(xì)胞中Mcl-1、Bcl-2以及Bcl-XLmRNA表達(dá)水平。結(jié)果：1.UMI-77處理細(xì)胞后,三株細(xì)胞的生存、增殖以及克隆形成受到抑制。其中UMI-77對MGC-803細(xì)胞的抑制作用明顯高于HGC-27、GES-1細(xì)胞。流式檢測結(jié)果顯示UMI-77可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞MGC-803凋亡,并具有時間劑量相關(guān)性；而UMI-77對HGC-27細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用不明顯,未檢測出凋亡的特征性改變。2.UMI-77作用后,MGC-803細(xì)胞線粒體膜電位下降,CytC、Smac在處理24 h后釋放入胞漿；caspase-9、caspase-3和PARP在UMI-77處理24 h即顯著活化,且z-VAD-fink能部分抑制UMI-77引起的細(xì)胞凋亡；Bcl-2、BcI-XL在UMI-77作用前后的蛋白表達(dá)水平?jīng)]有明顯改變,Mcl-1蛋白表達(dá)水平在UMI-77處理24 h后明顯下調(diào)；3.轉(zhuǎn)染Mcl-1 siRNA后MGC-803細(xì)胞中Mcl-1蛋白表達(dá)水平下調(diào),而轉(zhuǎn)染Mcl-1siRNA能部分抑制UMI-77誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。結(jié)論：三株細(xì)胞對UMI-77敏感性存在差異；與HGC-27和GES-1細(xì)胞相比,UMI-77可誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞顯著凋亡。線粒體膜電位改變以及線粒體蛋白Cyt C和Smac的釋放表明UMI-77可誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞發(fā)生內(nèi)源性凋亡。MGC-803對UMI-77的敏感性高于HGC-27和GES-1可能與其Mcl-1高表達(dá)有關(guān)。沉默Mcl-1表達(dá)可以部分抑制UMI-77誘導(dǎo)的凋亡,表明除了Mcl-1可能還存在其它調(diào)控參與UMI-77誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 小分子抑制劑 Mcl-1 UMI-77 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 1 引言12-16
• 2 實驗材料16-22
• 3 實驗方法22-31
• 4 實驗結(jié)果31-43
• 5 討論43-46
• 6 結(jié)論46-47
• 7 參考文獻(xiàn)47-52
• 附錄52-53
• 致謝53-54
• 綜述54-64
• 參考文獻(xiàn)60-64

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于成功,李敏,莫劍忠,蕭樹東;胃癌細(xì)胞垂體腺苷環(huán)化酶激活肽相關(guān)受體分析[J];胃腸病學(xué);2000年02期

2 薛英威,耿敬姝,劉曉民,劉立人,高小敏,陳國林,張豈凡,趙家宏;胃癌細(xì)胞的流式分析及臨床意義[J];腫瘤防治研究;2000年03期

3 陳堅,林庚金,錢立平,程建,施冬云,張亞東,劉珊林;內(nèi)源性活性氧水平及錳型超氧化物歧化酶的表達(dá)與胃癌細(xì)胞分化、增殖相關(guān)[J];生物物理學(xué)報;2003年02期

4 李瑩,藥立波,韓炯,王立峰,韓月恒,劉新平,林樹新,俞強(qiáng);胃癌細(xì)胞抗脫落凋亡的分子機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年02期

5 羅和生,王維,包鵬輝,張翼;核因子-κB活性增強(qiáng)參與胃癌細(xì)胞長春新堿耐藥[J];中華消化雜志;2004年08期

6 劉冀紅,曹偉新,紀(jì)玉寶,張軼,劉炳亞,朱正綱,燕敏,林言箴;右旋甲硫氨酸對胃癌細(xì)胞作用初探[J];腸外與腸內(nèi)營養(yǎng);2005年01期

7 齊元玲;于皆平;劉啟勝;鄧全軍;曹俊;于紅剛;;抑癌基因PTEN在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J];廣東醫(yī)學(xué);2006年03期

8 何必立;呂賓;徐毅;苗青;范一宏;;溫郁金對胃癌細(xì)胞的抑制作用及其對血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響[J];中醫(yī)藥學(xué)刊;2006年09期

9 郭強(qiáng);李榮;李慶芳;夏紹友;杜曉輝;王立生;;高表達(dá)鞘氨醇激酶對胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2006年12期

10 陳先來;肖曉旦;楊榮;劉建平;;基于誤差反向傳播神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的胃癌細(xì)胞識別研究[J];中國循證醫(yī)學(xué)雜志;2007年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓霜;雷婷;韓者藝;劉杰;郭雪艷;丁睿;吳開春;丁杰;樊代明;;分化抑制因子1對胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

2 陳韶華;吳靈嬌;吳鴻儒;吳雅春;厲有名;;低濃度酒精對胃癌細(xì)胞活性及周期抑制[A];中華醫(yī)學(xué)會第12次全國內(nèi)科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

3 陳韶華;吳靈嬌;吳鴻儒;吳雅春;厲有名;;低濃度酒精對胃癌細(xì)胞活性及周期抑制[A];第二屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2009年

4 李娜;郭瑞芳;李文梅;邵建敏;汪浩;趙康;李書婷;王敬強(qiáng);王融;徐寧志;劉斯奇;呂有勇;;大蒜素處理在胃癌細(xì)胞中引發(fā)的蛋白質(zhì)表達(dá)響應(yīng)[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會論文摘要論文集[C];2004年

5 ;多西紫杉醇對胃癌細(xì)胞作用及其機(jī)制的研究[A];第四屆中國腫瘤大會中國藥理學(xué)會腫瘤藥理專業(yè)委員會分會場學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

6 樓儷泓;;15-羥基前列腺素脫氫酶對胃癌細(xì)胞周期影響的試驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

7 朗瑋;;中藥方劑1號對胃癌細(xì)胞體外生長及細(xì)胞粘附分子的影響[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會消化專業(yè)第八次學(xué)術(shù)年會暨省中西醫(yī)結(jié)合消化系疾病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

8 鞏龍靜;馬君;周涵婧;鄭榮兒;;胃癌細(xì)胞的表面增強(qiáng)拉曼光譜研究[A];中國光學(xué)學(xué)會2011年學(xué)術(shù)大會摘要集[C];2011年

9 謝少茹;沈洪;趙崧;張國新;郝波;劉增巍;施瑞華;;黃芪多糖對胃癌細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會脾胃病分會第十九次全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2007年

10 劉文超;任軍;張學(xué)庸;劉智廣;張曉楠;;防御素對胃癌細(xì)胞殺傷的體外實驗研究[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 記者 陸葉清;發(fā)現(xiàn)抑制胃癌細(xì)胞的重要基因[N];上海科技報;2010年

2 衣曉峰　喬蕤琳 記者 趙宇清;抑制胃癌細(xì)胞生長研究有新發(fā)現(xiàn)[N];黑龍江日報;2010年

3 記者 衣曉峰　通訊員 喬蕤琳;維生素E衍生物能抑制胃癌細(xì)胞生長[N];健康報;2010年

4 王振嶺;我國抑制胃癌細(xì)胞生長研究有重要發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報;2002年

5 王振嶺;抗癌藥抑制胃癌細(xì)胞生長研究獲重要發(fā)現(xiàn)[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

6 王振嶺;7種抗癌藥體外抑制胃癌細(xì)胞的研究有新發(fā)現(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2002年

7 張中橋;胃癌細(xì)胞MDR機(jī)制研究取得新進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報;2007年

8 吳一福 蘇玉軍;白藜蘆醇可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞脫落凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李雙玲;IGF-1通過抑制Fox01核保留促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 胡偉國;腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞中Thy-1激活誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

3 周韻斕;應(yīng)激條件下胃癌細(xì)胞高表達(dá)線粒體活性氧和前梯度蛋白2促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

4 徐同鵬;SP1誘導(dǎo)的長非編碼RNA TINCR通過調(diào)控KLF2 mRNA穩(wěn)定性影響胃癌細(xì)胞的增殖與凋亡[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王暢;miR-34a通過miR-34a-c-myc/Bmi-1負(fù)反饋通路負(fù)調(diào)控胃癌干細(xì)胞樣特性[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 羅貫虹;MGr1-Ag/37LRP參與PrP~C介導(dǎo)的胃癌細(xì)胞多藥耐藥[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

7 默董亮;人類解旋酶RecQL4調(diào)控胃癌細(xì)胞耐藥性分子機(jī)制研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2016年

8 劉皎婧;PI3K/Akt/GSK3β/p190ARhoGAP/RhoA信號通路在Wnt5a誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞遷移中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

9 Muhammad Kamran（卡姆拉）;[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

10 王瑛;PKGⅡ?qū)PA誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞徖移及RhoA和Rac1激活的影響[D];江蘇大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林光錟;CyclinA/CDK2介導(dǎo)BAG3 Ser291位點的磷酸化并影響胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 蔡洙哲;p12-LOX對胃癌細(xì)胞MKN-28的增殖和遷移的影響[D];延邊大學(xué);2015年

3 李龍;Her-2高表達(dá)對胃癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響[D];長江大學(xué);2015年

4 趙婷婷;GPIbα對胃癌細(xì)胞粘附、遷移和侵襲能力的影響及其機(jī)制的初步探討[D];蘭州大學(xué);2015年

5 謝瑞霞;盤狀結(jié)構(gòu)域受體1調(diào)控上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響胃癌侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

6 王東倉;NM23-H2通過抑制Wnt/β-catenin信號通路抑制胃癌細(xì)胞的侵襲遷移[D];蘭州大學(xué);2015年

7 朱瑞雪;NDRG2基因?qū)ξ赴┘?xì)胞惡性表型的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

8 董凱楠;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對胃癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 單爭爭;二甲雙胍在IL-6誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞EMT中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

10 田莉;NM23-H2通過誘導(dǎo)自噬抑制胃癌細(xì)胞EMT的發(fā)生[D];蘭州大學(xué);2015年

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本文編號：1110816