本文關鍵詞：HMGB1誘導乏氧人肺腺癌A549細胞順鉑耐藥及機制

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【摘要】：原發(fā)性支氣管肺癌(primary bronchopulmonary carcinoma),簡稱肺癌(lung cancer),是全世界發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤之一。肺腺癌是其中一種常見的病理類型,據統(tǒng)計,近年來在世界許多國家和地區(qū)肺腺癌的發(fā)病率已超過鱗癌,成為肺癌最常見的病理類型。然而,大多數患者確診時已屬晚期,因此,以鉑類為基礎的聯(lián)合長春瑞濱、吉西他濱、多西他賽以及培美曲塞等二聯(lián)化療方案是EGFR基因突變陰性及TKI治療失敗患者的首要選擇,然而,化療耐藥的出現嚴重影響化療效果和患者預后。腫瘤化療耐藥的機制極為復雜,其中由于實體腫瘤血管生成速度常滯后于瘤細胞生長增殖的速度所形成瘤體內乏氧微環(huán)境引起了重視。Co Cl2是乏氧實驗中常用的化學乏氧模擬劑,它能夠使細胞線粒體內呼吸用氧障礙達到細胞乏氧的作用,近年研究發(fā)現腫瘤乏氧微環(huán)境下氧自由基減少可以直接影響化療藥物的作用機制,而且低氧還可以通過上調和下調一些靶基因通過多種間接途徑影響腫瘤細胞的化療敏感性。高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)是細胞在周圍乏氧、慢性炎及腫瘤相關成纖維細胞激活后產生的多種損傷相關模式分子中最重要的一種,不僅在多種腫瘤細胞中參與侵襲和轉移,而且近期有學者在白血病的一項研究中發(fā)現,HMGB1可能通過活化P13KC3-MEK-ERK1/2信號途徑上調LC3-II表達及增加p62的降解調節(jié)自噬影響腫瘤細胞的化療耐藥性。實體瘤乏氧環(huán)境下HMGB1釋放明顯增多,而目前研究發(fā)現HMGB1與腫瘤化療耐藥關系密切,那么乏氧環(huán)境下肺癌細胞化療耐藥的產生是否與HMGB1相關及其具體機制目前尚不清楚。研究目的:本實驗旨在通過建立人肺腺癌A549細胞化學乏氧模型,探討乏氧條件下HMGB1對A549細胞順鉑化療敏感性的影響及其機制。研究方法:人肺腺癌A549細胞在Co Cl2(0、200μM)中培養(yǎng)24小時后,首先通過細胞免疫化學檢測HIF-1α的表達來驗證乏氧模型是否成功建立。然后,通過倒置相差顯微鏡觀察A549細胞的形態(tài),MTT法檢測A549細胞的生長、增殖情況,ELISA檢測化學乏氧條件下人肺腺癌A549細胞上清液中HMGB1蛋白的含量,CCK-8法測定化學乏氧條件下順鉑作用時A549細胞活性,進一步通過Western-blot檢測自噬基因Beclin-1及LC3-II蛋白的表達。研究結果:1)Co Cl2乏氧組HIF-1α陽性A549細胞陽性積分及細胞核中HIF-1α蛋白表達均較常氧組增高;2)倒置相差顯微鏡下Co Cl2乏氧組與常氧組A549細胞均貼壁良好,Co Cl2乏氧組A549細胞數目較常氧組稀疏,部分形態(tài)不規(guī)則,可見多個偽足形成;3)與常氧組A549細胞相比,Co Cl2乏氧組A549細胞生長曲線較為低平、增殖速度緩慢;4)經順鉑處理后,Co Cl2乏氧組A549細胞存活率較常氧組A549細胞增高;5)ELISA檢測結果顯示Co Cl2乏氧組o Cl2組A549細胞上清液中HMGB1蛋白的表達較常氧組A549細胞增加;6)抑制HMGB1蛋白的活性能夠增加Co Cl2乏氧組A549細胞順鉑化療敏感性,而加入外源性HMGB1使Co Cl2乏氧組A549細胞順鉑化療敏感性降低;7)Co Cl2乏氧組A549細胞中Beclin-1及LC3-II蛋白的表達隨HMGB1蛋白的增加而增加,隨HMGB1蛋白的減少而減少。結論:乏氧條件下HMGB1的表達增加可能通過上調自噬誘導人肺腺癌A549細胞順鉑化療耐藥,然而自噬在多大程度上參與HMGB1誘導的化療耐藥及具體機制還需進一步研究。
【關鍵詞】：HMGB1 乏氧 肺腫瘤 化療耐藥 自噬
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• abstract7-11
• 主要英文縮略詞表11-12
• 引言12-15
• 實驗流程圖15-16
• 1 實驗材料16-18
• 2 實驗方法18-26
• 3 結果26-32
• 4 討論32-35
• 5 結論35-36
• 參考文獻36-39
• 綜述 肺癌化療耐藥的研究進展39-54
• 參考文獻50-54
• 個人簡歷及在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果54-55
• 致謝55

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本文編號：1110223