本文關(guān)鍵詞：BRCA1介導(dǎo)PIG3表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制

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【摘要】：研究背景與目的：乳腺癌易感基因1(The breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)是1990年Hall等首次在乳腺癌家族中發(fā)現(xiàn)的抑癌基因,定位于染色體17q21。其發(fā)生遺傳突變與遺傳性乳腺癌或卵巢癌的發(fā)生密切相關(guān)。BRCA1在細(xì)胞內(nèi)參與多種生理過程,包括DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期檢驗點的控制、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、染色體重塑和凋亡。文獻(xiàn)報道：BRCA1能夠調(diào)節(jié)P53的轉(zhuǎn)錄,BRCA1的氨基端殘基(224-500)與p53的羧基端殘基(300-393)相互作用,增加p53反應(yīng)啟動子P21、bax的轉(zhuǎn)錄活性從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。PIG3(p53 inducible gene 3)是近年來發(fā)現(xiàn)的受p53調(diào)控的下游靶基因,參與p53起始的凋亡過程。但對于BRCA1是否能夠調(diào)控PIG3誘導(dǎo)的凋亡以及具體機(jī)制目前仍未明確。本研究旨在探尋BRCA1對PIG3的調(diào)控作用,并初步探討其調(diào)控的分子機(jī)制以及與乳腺癌患者總生存期(OS)的關(guān)系。為深入理解BRCA1發(fā)揮的生物學(xué)作用及其成為乳腺癌患者臨床預(yù)后預(yù)測指標(biāo)提供依據(jù)。方法：本實驗選擇四株乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、T47D、SK-BR-3(p53野生型),和MDA-MB-157(p53缺失型)；兩株結(jié)腸癌細(xì)胞：HCT116p53+/+細(xì)胞(p53野生型),HCT116p53-/-(p53缺失型)；149例乳腺癌患者組織芯片為研究對象。1.通過對149例乳腺癌患者組織芯片的免疫組化染色實驗,檢測乳腺癌組織中BRCA1 、PIG3表達(dá)的情況,利用相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析法分析BRCA1與PIG3表達(dá)之間的關(guān)系以及BRCA1和/或PIG3表達(dá)水平與乳腺癌患者OS的關(guān)系。2.通過基因轉(zhuǎn)染、MTT、流式細(xì)胞術(shù)檢測BRCA1對乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響。3.通過染色體免疫共沉淀、熒光素酶報告基因、免疫印跡實驗,觀察PHB1與PIG3啟動子區(qū)(TGYCC)15的結(jié)合情況及PHB1對PIG3表達(dá)的影響。4.通過RT-PCR、蛋白免疫印跡、細(xì)胞免疫熒光實驗,探討B(tài)RCA1調(diào)控PIG3表達(dá)的分子機(jī)制。結(jié)果：1.149例乳腺癌患者腫瘤組織標(biāo)本的免疫組化結(jié)果表明,BRCA1和/或PIG3高表達(dá)的乳腺癌患者OS顯著延長(所有P0.05)。乳腺癌組織中BRCA1與PIG3的表達(dá)相關(guān),且呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.678,P0.001)。2.在p53野生型的乳腺癌細(xì)胞中,BRCA1抑制細(xì)胞的增殖,同時促進(jìn)細(xì)胞的凋亡(P0.05),但在P53缺失型乳腺癌細(xì)胞中,BRCA1對細(xì)胞增殖、凋亡作用不顯著,無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3.在p53野生型的乳腺癌細(xì)胞中,BRCA1能夠上調(diào)PIG3的表達(dá)(P0.05),但在p53缺失型乳腺癌細(xì)胞中,BRCA1不能上調(diào)PIG3的表達(dá)(P0.058)。4.染色體免疫共沉淀、熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果表明,PHB1能夠與PIG3啟動子區(qū)(TGYCC)15結(jié)合,并且這種結(jié)合不依賴于p53及凋亡的刺激,激活PIG3的轉(zhuǎn)錄(P0.05)。5.通過瞬時轉(zhuǎn)染PHB1過表達(dá)質(zhì)粒和PHB1干涉質(zhì)粒,利用蛋白免疫印跡實驗發(fā)現(xiàn)PHB1能通過p53依賴或非依賴的方式上調(diào)PIG3的表達(dá)(P0.05)。6.無論是在p53野生型還是p53缺失型乳腺癌細(xì)胞中,過表達(dá)BRCA1后,BRCA1對PHB1的表達(dá)都無顯著影響(P0.05)。結(jié)論：BRCA1通過調(diào)控p53而上調(diào)PIG3的表達(dá),從而抑制乳腺癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。研究表明BRCA1和/或PIG3高表達(dá)與乳腺癌患者總生存期(OS)的延長相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：PIG3 BRCA1 p53 prohibitin 乳腺癌
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 縮略詞5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-18
• 一、實驗材料18-21
• 二、實驗方法21-32
• 三、實驗結(jié)果32-44
• 四、討論44-47
• 五、結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 綜述54-63
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 作者簡介63-64
• 致謝64-65

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本文編號：1108278