本文關(guān)鍵詞：納米載體遞送小分子miRNA-34a調(diào)節(jié)劑治療肝細(xì)胞癌的研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞癌 miR-34a miRNA小分子調(diào)節(jié)劑 基因治療 納米粒子

【摘要】：MicroRNA(miRNA)是一種內(nèi)源性的非編碼單鏈RNA,長(zhǎng)約20~23個(gè)核苷酸,在進(jìn)化上具有高度保守性,能夠調(diào)控后轉(zhuǎn)錄基因的表達(dá)。大量研究發(fā)現(xiàn)miRNA在許多癌癥中呈異常表達(dá),發(fā)揮抑癌或者致癌功能。因此,基于miRNA的基因治療在腫瘤治療中展現(xiàn)了廣闊的應(yīng)用前景。但是如何將治療性基因?qū)氩≡罱M織和細(xì)胞成為制約其臨床應(yīng)用的最大問題。近年來,研究發(fā)現(xiàn)了若干種miRNA小分子調(diào)節(jié)劑,它們?yōu)檠芯縨iRNA的功能與調(diào)節(jié)機(jī)制提供了新的工具,同時(shí)為靶向miRNA的腫瘤治療提供了新的策略。Rubone(2’-羥基-2,4,4’,5,6’-五甲氧基查爾酮)是一個(gè)天然小分子有機(jī)化合物,能夠靶向調(diào)節(jié)miR-34a的表達(dá),增強(qiáng)miR-34a的抗肝癌活性,達(dá)到肝癌治療的目的。但是它的疏水性限制了其直接使用。在本研究中,我們構(gòu)建出了包裹Rubone的羧甲基葡聚糖修飾的聚乙烯亞胺-聚己內(nèi)酯納米顆粒,并通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究其抗肝癌活性。首先,我們用乳化溶劑蒸發(fā)法制備了包載Rubone的聚乙烯亞胺-聚己內(nèi)酯納米顆粒,通過電荷間的相互作用在納米顆粒表面修飾了一層羧甲基葡聚糖。對(duì)納米粒子的粒徑尺寸、表面電荷及形貌、Rubone的包裝效率、Rubone的體外釋放效率、納米顆粒穩(wěn)定性能、納米顆粒的質(zhì)子緩沖能力進(jìn)行了表征。我們進(jìn)一步對(duì)載藥納米粒子體外細(xì)胞水平與體內(nèi)動(dòng)物水平的抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。體外細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示載藥納米粒子能夠被細(xì)胞有效攝取,使Rubone在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮對(duì)miR-34a的調(diào)節(jié)作用,提高miR-34a的表達(dá),進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。此外,本研究還建立了肝細(xì)胞癌動(dòng)物腫瘤模型并研究了載藥納米粒子在動(dòng)物體內(nèi)的抗腫瘤效果及機(jī)制,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明載藥納米粒子能夠通過EPR效應(yīng)被動(dòng)靶向進(jìn)入腫瘤部位,抑制腫瘤的生長(zhǎng)。本研究為靶向miR-34a的肝細(xì)胞癌治療探索了新的途徑。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 miR-34a miRNA小分子調(diào)節(jié)劑 基因治療 納米粒子
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 縮略語(yǔ)6-10
• 第1章 緒論10-24
• 1.1 HCC的研究及其診治現(xiàn)狀11-13
• 1.1.1 HCC的簡(jiǎn)介及發(fā)病情況11-12
• 1.1.2 HCC治療的治療現(xiàn)狀12
• 1.1.3 HCC的治療進(jìn)展12-13
• 1.2 miRNA與HCC13-18
• 1.2.1 miRNA的研究進(jìn)展13-15
• 1.2.2 miRNA在HCC中的研究進(jìn)展15-18
• 1.2.3 miRNA在HCC治療中的展望18
• 1.3 miRNA靶向小分子調(diào)節(jié)劑18-19
• 1.4 納米載體19-22
• 1.4.1 納米載體的分類19-20
• 1.4.2 納米載體在藥物遞送中的優(yōu)勢(shì)20-21
• 1.4.3 基于高分子材料的納米載體21-22
• 1.5 本論文研究?jī)?nèi)容22-24
• 第2章 CMD-PEI-PCL納米載體的構(gòu)建及其包載miRNA-34a小分子調(diào)節(jié)劑性能研究24-40
• 2.1 引言24-25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器25
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法25-30
• 2.4.1 乳化-溶劑揮發(fā)法制備PEI-PCL納米粒子25-26
• 2.4.2 制備CMD修飾的PEI-PCL納米粒子26
• 2.4.3 載藥納米粒子的制備26
• 2.4.4 BP-NPs、BC-NPs、RP-NPs、RC-NPs理化性質(zhì)的表征26-27
• 2.4.5 BP-NPs、BC-NPs、RP-NPs、RC-NPs的穩(wěn)定性研究27
• 2.4.6 RP-NPs包載Rubone效率27-28
• 2.4.7 RC-NPs體外釋放Rubone動(dòng)力學(xué)研究28-29
• 2.4.8 蛋白吸附實(shí)驗(yàn)29-30
• 2.4.9 納米粒子的溶血性測(cè)試30
• 2.4.10 納米粒子的質(zhì)子緩沖能力測(cè)試30
• 2.5 結(jié)果與討論30-37
• 2.5.1 納米粒子的構(gòu)建、表征及其穩(wěn)定性研究30-33
• 2.5.2 納米粒子包載Rubone的效率33-34
• 2.5.3 載藥納米粒子體外釋放動(dòng)力學(xué)研究34-35
• 2.5.4 納米粒子血液相容性的測(cè)定35-37
• 2.5.5 納米粒子的質(zhì)子緩沖能力37
• 2.6 本章小結(jié)37-40
• 第3章 負(fù)載Rubone的CMD-PEI-PCL納米粒子體內(nèi)外抗腫瘤效果評(píng)價(jià)40-58
• 3.1 引言40-41
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料41-42
• 3.2.1 主要藥品及試劑41
• 3.2.2 細(xì)胞株41
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物41-42
• 3.3 實(shí)驗(yàn)儀器42
• 3.4 實(shí)驗(yàn)方法42-48
• 3.4.1 細(xì)胞傳代培養(yǎng)42
• 3.4.2 激光共聚焦顯微鏡觀察Cy-3 標(biāo)記的RC-NPs納米粒子進(jìn)入HepG-2細(xì)胞的能力42-43
• 3.4.3 CCK-8 實(shí)驗(yàn)測(cè)定不同組分納米粒子的細(xì)胞毒性43-44
• 3.4.4 流式細(xì)胞法測(cè)定不同組分對(duì)細(xì)胞凋亡的影響44
• 3.4.5 細(xì)胞劃線實(shí)驗(yàn)44
• 3.4.6 qRT- PCR檢測(cè)miRNA-34a及其靶基因的表達(dá)44-46
• 3.4.7 Western blot檢測(cè)Bcl-2、Cyclin D1和CDK6蛋白表達(dá)水平46-47
• 3.4.8 體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)47
• 3.4.9 體內(nèi)成像實(shí)驗(yàn)47-48
• 3.4.10 qReal-Time PCR檢測(cè)腫瘤組織中miRNA-34a及靶基因的表達(dá)水平48
• 3.4.11 蘇木精-伊紅染色（HE染色）48
• 3.5 結(jié)果與討論48-56
• 3.5.1 RC-NPs的細(xì)胞攝取及其在細(xì)胞內(nèi)的分布情況48-49
• 3.5.2 載藥納米粒子對(duì)細(xì)胞毒性、凋亡及遷移的影響49-50
• 3.5.3 載藥納米粒子對(duì)細(xì)胞內(nèi)miRNA-34a及其靶基因表達(dá)的調(diào)控50-51
• 3.5.5 載藥納米粒子的體內(nèi)分布情況51-52
• 3.5.6 載藥納米粒子體內(nèi)抑瘤活性的研究52-55
• 3.5.7 腫瘤組織中mi RNA-34a及其靶基因的表達(dá)水平55
• 3.5.8 納米粒子對(duì)裸鼠各主要器官組織的毒性55-56
• 3.6 本章小結(jié)56-58
• 結(jié)論58-60
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 攻讀碩士期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64-66
• 致謝66

，

本文編號(hào)：1107160