本文關鍵詞：納米載體遞送小分子miRNA-34a調節(jié)劑治療肝細胞癌的研究

  更多相關文章： 肝細胞癌 miR-34a miRNA小分子調節(jié)劑 基因治療 納米粒子

【摘要】：MicroRNA(miRNA)是一種內(nèi)源性的非編碼單鏈RNA,長約20~23個核苷酸,在進化上具有高度保守性,能夠調控后轉錄基因的表達。大量研究發(fā)現(xiàn)miRNA在許多癌癥中呈異常表達,發(fā)揮抑癌或者致癌功能。因此,基于miRNA的基因治療在腫瘤治療中展現(xiàn)了廣闊的應用前景。但是如何將治療性基因導入病灶組織和細胞成為制約其臨床應用的最大問題。近年來,研究發(fā)現(xiàn)了若干種miRNA小分子調節(jié)劑,它們?yōu)檠芯縨iRNA的功能與調節(jié)機制提供了新的工具,同時為靶向miRNA的腫瘤治療提供了新的策略。Rubone(2’-羥基-2,4,4’,5,6’-五甲氧基查爾酮)是一個天然小分子有機化合物,能夠靶向調節(jié)miR-34a的表達,增強miR-34a的抗肝癌活性,達到肝癌治療的目的。但是它的疏水性限制了其直接使用。在本研究中,我們構建出了包裹Rubone的羧甲基葡聚糖修飾的聚乙烯亞胺-聚己內(nèi)酯納米顆粒,并通過體內(nèi)外實驗研究其抗肝癌活性。首先,我們用乳化溶劑蒸發(fā)法制備了包載Rubone的聚乙烯亞胺-聚己內(nèi)酯納米顆粒,通過電荷間的相互作用在納米顆粒表面修飾了一層羧甲基葡聚糖。對納米粒子的粒徑尺寸、表面電荷及形貌、Rubone的包裝效率、Rubone的體外釋放效率、納米顆粒穩(wěn)定性能、納米顆粒的質子緩沖能力進行了表征。我們進一步對載藥納米粒子體外細胞水平與體內(nèi)動物水平的抗腫瘤活性進行了研究。體外細胞水平的實驗結果顯示載藥納米粒子能夠被細胞有效攝取,使Rubone在細胞內(nèi)發(fā)揮對miR-34a的調節(jié)作用,提高miR-34a的表達,進而抑制腫瘤細胞的增殖和遷移、誘導腫瘤細胞的凋亡。此外,本研究還建立了肝細胞癌動物腫瘤模型并研究了載藥納米粒子在動物體內(nèi)的抗腫瘤效果及機制,實驗結果表明載藥納米粒子能夠通過EPR效應被動靶向進入腫瘤部位,抑制腫瘤的生長。本研究為靶向miR-34a的肝細胞癌治療探索了新的途徑。
【關鍵詞】：肝細胞癌 miR-34a miRNA小分子調節(jié)劑 基因治療 納米粒子
【學位授予單位】：北京工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 縮略語6-10
• 第1章 緒論10-24
• 1.1 HCC的研究及其診治現(xiàn)狀11-13
• 1.1.1 HCC的簡介及發(fā)病情況11-12
• 1.1.2 HCC治療的治療現(xiàn)狀12
• 1.1.3 HCC的治療進展12-13
• 1.2 miRNA與HCC13-18
• 1.2.1 miRNA的研究進展13-15
• 1.2.2 miRNA在HCC中的研究進展15-18
• 1.2.3 miRNA在HCC治療中的展望18
• 1.3 miRNA靶向小分子調節(jié)劑18-19
• 1.4 納米載體19-22
• 1.4.1 納米載體的分類19-20
• 1.4.2 納米載體在藥物遞送中的優(yōu)勢20-21
• 1.4.3 基于高分子材料的納米載體21-22
• 1.5 本論文研究內(nèi)容22-24
• 第2章 CMD-PEI-PCL納米載體的構建及其包載miRNA-34a小分子調節(jié)劑性能研究24-40
• 2.1 引言24-25
• 2.2 實驗材料25
• 2.3 實驗儀器25
• 2.4 實驗方法25-30
• 2.4.1 乳化-溶劑揮發(fā)法制備PEI-PCL納米粒子25-26
• 2.4.2 制備CMD修飾的PEI-PCL納米粒子26
• 2.4.3 載藥納米粒子的制備26
• 2.4.4 BP-NPs、BC-NPs、RP-NPs、RC-NPs理化性質的表征26-27
• 2.4.5 BP-NPs、BC-NPs、RP-NPs、RC-NPs的穩(wěn)定性研究27
• 2.4.6 RP-NPs包載Rubone效率27-28
• 2.4.7 RC-NPs體外釋放Rubone動力學研究28-29
• 2.4.8 蛋白吸附實驗29-30
• 2.4.9 納米粒子的溶血性測試30
• 2.4.10 納米粒子的質子緩沖能力測試30
• 2.5 結果與討論30-37
• 2.5.1 納米粒子的構建、表征及其穩(wěn)定性研究30-33
• 2.5.2 納米粒子包載Rubone的效率33-34
• 2.5.3 載藥納米粒子體外釋放動力學研究34-35
• 2.5.4 納米粒子血液相容性的測定35-37
• 2.5.5 納米粒子的質子緩沖能力37
• 2.6 本章小結37-40
• 第3章 負載Rubone的CMD-PEI-PCL納米粒子體內(nèi)外抗腫瘤效果評價40-58
• 3.1 引言40-41
• 3.2 實驗材料41-42
• 3.2.1 主要藥品及試劑41
• 3.2.2 細胞株41
• 3.2.3 實驗動物41-42
• 3.3 實驗儀器42
• 3.4 實驗方法42-48
• 3.4.1 細胞傳代培養(yǎng)42
• 3.4.2 激光共聚焦顯微鏡觀察Cy-3 標記的RC-NPs納米粒子進入HepG-2細胞的能力42-43
• 3.4.3 CCK-8 實驗測定不同組分納米粒子的細胞毒性43-44
• 3.4.4 流式細胞法測定不同組分對細胞凋亡的影響44
• 3.4.5 細胞劃線實驗44
• 3.4.6 qRT- PCR檢測miRNA-34a及其靶基因的表達44-46
• 3.4.7 Western blot檢測Bcl-2、Cyclin D1和CDK6蛋白表達水平46-47
• 3.4.8 體內(nèi)抑瘤實驗47
• 3.4.9 體內(nèi)成像實驗47-48
• 3.4.10 qReal-Time PCR檢測腫瘤組織中miRNA-34a及靶基因的表達水平48
• 3.4.11 蘇木精-伊紅染色（HE染色）48
• 3.5 結果與討論48-56
• 3.5.1 RC-NPs的細胞攝取及其在細胞內(nèi)的分布情況48-49
• 3.5.2 載藥納米粒子對細胞毒性、凋亡及遷移的影響49-50
• 3.5.3 載藥納米粒子對細胞內(nèi)miRNA-34a及其靶基因表達的調控50-51
• 3.5.5 載藥納米粒子的體內(nèi)分布情況51-52
• 3.5.6 載藥納米粒子體內(nèi)抑瘤活性的研究52-55
• 3.5.7 腫瘤組織中mi RNA-34a及其靶基因的表達水平55
• 3.5.8 納米粒子對裸鼠各主要器官組織的毒性55-56
• 3.6 本章小結56-58
• 結論58-60
• 參考文獻60-64
• 攻讀碩士期間所發(fā)表的學術論文64-66
• 致謝66

，

本文編號：1107160