本文關(guān)鍵詞：AMPK在胃癌中對(duì)Bmi-1的抑制作用

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【摘要】：背景和目的:5’單磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)一直以來(lái)被稱為細(xì)胞內(nèi)的“能量感受器與調(diào)節(jié)器”,AMPK的抑癌功能已經(jīng)得到研究者們的廣泛認(rèn)可。AMPK可通過(guò)一系列信號(hào)通路影響細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移從而發(fā)揮其抑癌功能。Bmi-1屬于多疏基因家族成員,不僅能維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新,還在EMT進(jìn)程中發(fā)揮著極為重要的作用。我們?cè)诜伟┑那捌谠囼?yàn)表明:1.AMPK活性升高,Bmi-1表達(dá)下降;而降低AMPK活性后,Bmi-1的表達(dá)反而升高,即AMPK能夠抑制Bmi-1的表達(dá)。2.LITAF為AMPK下游,受AMPK正調(diào)控,且我們的microarray分析結(jié)果顯示LITAF可以調(diào)控部分mi RNA,而其中的mi RNA-15a/128/194可調(diào)控Bmi-1的表達(dá)。所以我們猜想AMPK是否能通過(guò)LITAF抑制Bmi-1的表達(dá)。因此,本研究旨在探究胃癌中Bmi-1的表達(dá)是否受AMPK抑制,并探索AMPK影響B(tài)mi-1表達(dá)的分子機(jī)制。為進(jìn)一步研究AMPK的抑癌功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1收集66例胃癌及相應(yīng)癌旁組織蠟塊,組織切片后采用免疫組化方法檢測(cè)p-AMPK、Bmi-1在胃癌及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本中的表達(dá)情況,并分析兩者之間的相關(guān)性。2收集16例胃腺癌及相應(yīng)癌旁新鮮組織,提取蛋白后采用Western blotting方法檢測(cè)p-AMPK、Bmi-1在胃癌及其癌旁新鮮組織標(biāo)本中的表達(dá)情況。3用AMPK激活劑黃連素、二甲雙胍和AMPK抑制劑Compound C分別處理胃癌細(xì)胞SGC-7901和AGS后,觀察AMPK的活性變化情況、以及LITAF和Bmi-1蛋白的表達(dá)變化。4轉(zhuǎn)染AMPK-DN質(zhì)粒至AGS細(xì)胞抑制AMPK的活性,觀察Bmi-1表達(dá)的變化。5制備含p Super Retro-LITAF-sh RNA和p Super Retro-LITAF-sh RNA-Control重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒,感染胃癌細(xì)胞AGS敲除LITAF基因,puromycin篩選獲得AGS-LITAF-sh RNA和AGS-sh RNA-C穩(wěn)定細(xì)胞株。采用Western Blotting及q RT-PCR兩種方法驗(yàn)證LITAF缺失細(xì)胞株是否構(gòu)建成功,并檢測(cè)Bmi-1蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1在胃癌組織中Bmi-1的表達(dá)明顯高于相應(yīng)的癌旁組織(P0.01),而p-AMPK在胃癌組織中的表達(dá)則顯著低于相應(yīng)的癌旁組織(P0.01)。2 Berberine處理SGC-7901和AGS細(xì)胞后,AMPK活性升高,p-ACC表達(dá)增加,而B(niǎo)mi-1蛋白的表達(dá)降低。相反,用AMPK抑制劑Compound C抑制了AMPK活性并增加了Bmi-1的表達(dá)。提示AMPK可能調(diào)節(jié)Bmi-1的表達(dá)。3轉(zhuǎn)染AMPK-DN質(zhì)粒至AGS細(xì)胞中,AMPK下游因子活性下降,但Bmi-1表達(dá)增加。通過(guò)以上研究我們可以確定AMPK能夠抑制Bmi-1的表達(dá)。4 Metformin能夠增加AMPK活性,增加LITAF的表達(dá),并減少Bmi-1的表達(dá)。5與AGS-sh RNA-C細(xì)胞克隆株相比,AGS-LITAF-sh RNA單克隆細(xì)胞株中LITAF蛋白表達(dá)量明顯減少,而B(niǎo)mi-1的表達(dá)顯著增高。結(jié)果表明LITAF能夠調(diào)節(jié)Bmi-1的表達(dá)。因此,AMPK能夠通過(guò)AMPK-LITAF-Bmi-1信號(hào)軸發(fā)揮對(duì)Bmi-1的抑制作用。結(jié)論:在胃癌細(xì)胞中,AMPK能抑制Bmi-1蛋白的表達(dá),這種抑制作用是通過(guò)上調(diào)LITAF的表達(dá)發(fā)揮的。
【關(guān)鍵詞】：AMPK Bmi-1 LITAF 胃癌
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 中英文縮略詞表8-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-31
• 2.1 材料13-17
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑14-16
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 2.2 研究方法及內(nèi)容17-30
• 2.2.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑配置方法17-19
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-30
• 2.3 統(tǒng)計(jì)分析30-31
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-41
• 3.1 胃癌及癌旁組織中p-AMPK與Bmi-1 的表達(dá)31-33
• 3.2 AMPK活性上升對(duì)Bmi-1 表達(dá)的影響33-35
• 3.3 AMPK活性下降對(duì)Bmi-1 表達(dá)的影響35-38
• 3.3.1 Compound C抑制AMPK活性后對(duì)Bmi-1 表達(dá)的影響35-37
• 3.3.2 轉(zhuǎn)染AMPK-DN質(zhì)粒后對(duì)Bmi-1 表達(dá)的影響37-38
• 3.4 AMPK抑制Bmi-1 的機(jī)制38-41
• 第4章 討論41-45
• 4.1 AMPK與Bmi-1 關(guān)系的初步探究41
• 4.2 AMPK對(duì)Bmi-1 的抑制作用41-43
• 4.3 AMPK抑制Bmi-1 表達(dá)的作用機(jī)制43-45
• 第5章 結(jié)論45-46
• 致謝46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 攻讀學(xué)位期間的科研成果50-51
• 綜述51-63
• 參考文獻(xiàn)59-63

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