本文關(guān)鍵詞：Sox30基因在肺癌和結(jié)直腸癌中的甲基化與表達(dá)分析

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【摘要】：背景肺癌是嚴(yán)重威脅著人類健康的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率在世界絕大部分地區(qū)的腫瘤性疾病中均排在第一位。結(jié)直腸癌作為最常見的消化道惡性腫瘤,發(fā)病率位居全球惡性腫瘤的第三位,在我國結(jié)直腸癌的病死率位居惡性腫瘤死亡率的第五位,并且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。肺癌和結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展涉及了遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)等異常變化并逐漸積累的復(fù)雜過程,近些年來的研究發(fā)現(xiàn),表觀遺傳學(xué)已經(jīng)成為肺癌和結(jié)直腸癌發(fā)病機制之一,受到了廣泛的關(guān)注和重視,其中DNA甲基化作為表觀遺傳學(xué)中重要的調(diào)控機制,在基因的異常表達(dá)和腫瘤發(fā)生中起著重要作用。Sox30(SRY-box containing gene 30)作為SOX轉(zhuǎn)錄因子超家族中的一員,與該家族的其他基因相同,都含有一個典型的HMG-box DNA結(jié)合區(qū)域,這無疑提示Sox30基因作為轉(zhuǎn)錄因子可能對其他基因具有非常重要的調(diào)控作用。多年研究表明,Sox30在性腺發(fā)育、精原細(xì)胞分化和精子形成中具有重要作用。最近我們研究首次發(fā)現(xiàn),Sox30在肺癌中是一個新的腫瘤抑制基因,作用機制是Sox30轉(zhuǎn)錄激活p53及其通路活性,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。然而,Sox30基因在肺癌和結(jié)直腸癌中的表觀遺傳學(xué)變化和表達(dá)之間的關(guān)系以及與結(jié)直腸癌、肺癌發(fā)生存在的關(guān)系報道尚少。目的1、檢測Sox30基因在肺癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的甲基化和表達(dá)情況。2、檢測Sox30基因在肺癌組織及癌旁組織中的甲基化和表達(dá)的發(fā)生情況,同時檢測Sox30基因在結(jié)直腸癌組織及癌旁組織中甲基化的發(fā)生情況,并分析它們與病人臨床病理資料之間的聯(lián)系。方法1、利用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR,MSP)檢測肺癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞系以及組織標(biāo)本DNA中Sox30基因的甲基化情況。采用亞硫酸氫鹽修飾后測序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)進(jìn)一步驗證Sox30的MSP分析結(jié)果。2、通過RT-PCR檢測肺癌與結(jié)直腸癌細(xì)胞系和在甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-azaCd R處理前后Sox30基因m RNA水平的表達(dá)情況。3、利用免疫組織化學(xué)方法檢測sox30基因在肺癌組織樣本及相應(yīng)癌旁組織樣本中的表達(dá)。4、通過統(tǒng)計學(xué)方法,對sox30基因在肺癌中發(fā)生甲基化及表達(dá)的情況和結(jié)直腸癌中甲基化的情況與患者臨床病理資料以及預(yù)后情況之間存在的關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果1、本課題選用了8株肺癌細(xì)胞系:95d、h1395、h358、h1975、ltep、h1650、a549和spc-a和3株結(jié)直腸癌細(xì)胞系:hct8、hct116和sw480。在mrna水平,sox30基因在肺癌細(xì)胞系a549、h1395、h358和ltep中無表達(dá),在spc-a、h1975、95d、h1650中為弱表達(dá),在結(jié)直腸癌細(xì)胞系三株細(xì)胞中均為弱表達(dá);msp結(jié)果顯示,hct116、a549、h1395、h1975、95d、h1650和ltep中的sox30為完全甲基化,hct8、sw480、spc-a和h358為部分甲基化。通過5-aza-cdr處理72小時后,hct116、a549、h1395、h1975、95d、h1650和ltep中sox30均恢復(fù)表達(dá),hct8、sw480、spc-a和h358中sox30表達(dá)均上調(diào),說明sox30基因甲基化直接調(diào)控其表達(dá)。2、在90例肺癌組織標(biāo)本中,62例發(fā)生了甲基化(68.9%),而12例癌旁組織標(biāo)本中僅1例發(fā)生甲基化(8.3%)。在54例結(jié)直腸癌組織標(biāo)本中,43例發(fā)生了甲基化(79.6%),而10例癌旁組織標(biāo)本中僅2例發(fā)生甲基化(20%)。對133例肺癌組織標(biāo)本和10例癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色結(jié)果提示,sox30基因在肺癌標(biāo)本中表達(dá)的平均值為5.36,癌旁標(biāo)本中表達(dá)的平均值為9.67,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。3、對臨床病理分型等特征與sox30基因甲基化之間的關(guān)系進(jìn)行了分析,結(jié)果表明:在肺癌中,sox30基因甲基化發(fā)生與性別、年齡、組織類型和病理分級等無明顯的相關(guān)性(p0.05),但與肺癌臨床分期明顯相關(guān)(p0.05);在結(jié)直腸癌中,以性別、年齡、吸煙與否、tnm分期和ducks分期進(jìn)行分組,兩組間sox30基因甲基化發(fā)生率無明顯的相關(guān)性(p0.05)。4、我們對sox30基因表達(dá)與臨床病理特征也進(jìn)行了相關(guān)性分析,結(jié)果表明,在肺癌中,sox30基因表達(dá)與肺癌患者的性別、病理分級、年齡、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、腫瘤大小和臨床分期無顯著差異(p0.05)。5、sox30基因的表達(dá)與患者預(yù)后之間的關(guān)系。通過單因素分析和多因素分析所得結(jié)果表明,在肺腫瘤中,單因素分析的結(jié)果顯示sox30基因的高表達(dá)與患者良好預(yù)后具有顯著的相關(guān)性,多因素分析的結(jié)果表明Sox30基因的表達(dá)是一個獨立的預(yù)后因素。結(jié)論Sox30基因在肺癌和結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中通過高甲基化導(dǎo)致表達(dá)下調(diào)或者失活,從而參與了肺癌和結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展;Sox30基因表達(dá)與肺癌患者預(yù)后正相關(guān);Sox30甲基化可以作為肺癌和結(jié)直腸癌的一個潛在的標(biāo)記物。本課題的研究為進(jìn)一步完善Sox30在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮的作用和深入探究Sox30基因在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及機制提供了實驗依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：Sox30基因 肺癌 結(jié)直腸癌 DNA甲基化 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2;R735.34
【目錄】：

• 英文縮略詞4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-14
• 第二章 SOX30基因在肺癌細(xì)胞株和肺癌組織中的甲基化與表達(dá)分析14-34
• 2.1 材料和方法14-25
• 2.2 實驗結(jié)果25-31
• 2.3 討論31-34
• 第三章 SOX30基因在結(jié)直腸癌細(xì)胞株和結(jié)直腸癌組織中的甲基化與表達(dá)分析34-41
• 3.1 材料和方法34-35
• 3.2 實驗結(jié)果35-39
• 3.3 討論39-41
• 全文總結(jié)41-42
• 1.結(jié)論41
• 2.本文存在的不足41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 文獻(xiàn)綜述 SOX基因家族與腫瘤的研究進(jìn)展45-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 學(xué)位期間發(fā)表論文56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 呂新廳;黃仁俊;;胃癌組織中SOX9的表達(dá)及其與預(yù)后關(guān)系[J];中國普通外科雜志;2014年06期

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本文編號：1103558