本文關(guān)鍵詞：多光子顯微鏡用于食管癌診斷的離體研究

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【摘要】：背景：食管癌是嚴重威脅人類健康的常見惡性腫瘤,總五年生存率低于20%。因此,探索食管癌的早期診斷及合理的治療方法,改善患者的生活質(zhì)量和延長存活時間,是擺在我們面前的一個嚴峻的難題和挑戰(zhàn)。近些年來,由于電子胃鏡、色素內(nèi)鏡、超聲內(nèi)鏡、放大內(nèi)鏡、窄帶成像技術(shù)、熒光內(nèi)鏡、激光共聚焦顯微鏡的應(yīng)用,使食管癌診斷率大大提高,但最終的確診仍需病理診斷。術(shù)前活檢,臨床上存在出血、針道、轉(zhuǎn)移、病理流程費時等缺點；而術(shù)后組織病理學(xué)診斷,需要取材及隨后的組織固定、包埋、切片、染色等步驟。多光子顯微鏡(Multiphoton microscopy, MPM)技術(shù)基于非線性光學(xué)和飛秒激光鐳射之上的多光子“光學(xué)活檢”,通過利用活體組織中細胞本身產(chǎn)生的自體熒光及膠原組織產(chǎn)生的第二諧波,可以實時快速地獲得腫瘤實質(zhì)的組織結(jié)構(gòu)、細胞形態(tài)以及腫瘤間質(zhì)在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中膠原的反應(yīng)變化。細胞本身產(chǎn)生的自體熒光來自細胞內(nèi)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide, NADH)及黃素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide, FAD)。多光子“光學(xué)活檢”不僅可以捕獲腫瘤的組織學(xué)特征,而且可以反映腫瘤細胞的代謝水平以及周圍間質(zhì)中膠原信號的變化。MPM無需傳統(tǒng)病理多重步驟,是一種實時快速的診斷方法,具有實時、無損、穿透率高及分辨率高等優(yōu)勢。MPM有望成為腫瘤的實時診斷工具。目的：1,比較正常兔食管組織,VX2食管鱗癌組織及紫杉醇支架治療后的食管組織MPM下的成像特點；2,總結(jié)出人正常食管組織,食管高級別上皮內(nèi)瘤變及食管鱗癌的MPM下的成像特點；3,運用以上總結(jié)出的特點,擴大樣本量計算MPM診斷效能即敏感度,特異度及準確性。方法：1,新西蘭兔24只(購自江蘇南京市青龍山動物繁殖場,合格證號：SCXK(蘇)2007-0008),3月齡,均為雄性,體重1.8-2.0g,動物體健,顆粒飼料喂養(yǎng),將VX2(兔鱗狀上皮來源的癌細胞)組織塊注射入兔后腿肌肉內(nèi),約2周后長成癌細胞腫塊,將腫塊在無菌條件下取出并剪碎成小塊凍存于-80℃超低溫冰箱；2,將腫瘤組織塊注射入兔食管內(nèi)：采用內(nèi)鏡下動物造模的方法,將組織塊取出復(fù)蘇,剪碎至約1mm大小,通過注射針在內(nèi)鏡下將組織塊注射入食管粘膜下層。通過超細內(nèi)鏡檢查確定狹窄超過2/3管腔時滿足植入支架適應(yīng)癥,通過支架輸送器經(jīng)口將支架植入病變部位,兩周后猝死新西蘭兔；3,取正常的兔食管組織,成瘤的食管癌組織及支架置入治療后的食管癌組織分為三組,將組織行冰凍切片,在MPM下成像及病理成像,收集圖像。比較成像特點；4,收集人正常食管組織、高級別上皮內(nèi)瘤變組織及食管鱗癌組織,制作成冰凍切片,在MPM下成像及病理成像,總結(jié)出MPM成像特點；5,擴大樣本量,用以上總結(jié)出的MPM成像特點,以病理為金標準,計算MPM的診斷效能。結(jié)果：1,成功的總結(jié)出正常的兔食管組織,成瘤的食管癌組織及支架置入治療后的食管病變組織的MPM成像特點,三組膠原蛋白的平均光密度為正常食管組織的膠原纖維的光密度為16.15±5.73,腫瘤組為1.46±1.20,支架置入術(shù)后組為4.16±2.17,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；2,MPM可以成功區(qū)分正常食管組織、高級別上皮內(nèi)瘤變組織及食管鱗癌組織,三組NADH/FAD的比值為食管鱗癌的NADH/FAD比值是3.36±0.28食管高級別上皮內(nèi)瘤變NADH/FAD比值是2.85±0.19正常食管組織的NADH/FAD比值是1.91±0.12,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；3,得出MPM診斷效能：敏感度：95%,特異度為：94.44%,陽性預(yù)測值97.08%,陰性預(yù)測值90.67%,準確度：94.81%。結(jié)論：1,MPM可以區(qū)分正常的食管組織、食管癌組織及支架置入后的組織；2,MPM可以診斷出人正常的食管組織,食管高級別上皮內(nèi)瘤變的組織及食管癌組織；3,MPM的診斷效能比較高,可實現(xiàn)實時診斷,具有可觀的發(fā)展前景。
【關(guān)鍵詞】：食管癌 多光子顯微鏡 雙光子成像 二次諧波
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-16
• 第一部分 多光子檢測的動物水平方法驗證16-29
• 材料和方法16-22
• 結(jié)果22-26
• 討論26-28
• 本部分小結(jié)28-29
• 第二部分 多光子檢測臨床應(yīng)用性考察29-42
• 材料和方法29-34
• 結(jié)果34-38
• 討論38-41
• 本部分小結(jié)41-42
• 全文結(jié)論42-43
• 參考文獻43-49
• 綜述49-60
• 參考文獻57-60
• 附錄：中英文縮略詞表60-61
• 攻讀學(xué)位期間承擔的科研任務(wù)及發(fā)表的文章61-63
• 致謝63-64

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馬駿;;食管癌的早期診斷技術(shù)[J];黑龍江醫(yī)藥;2013年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 胡文艷;新鮮胰腺組織的無標記非線性光學(xué)顯微成像研究[D];華中科技大學(xué);2013年

2 劉超;共聚焦激光顯微內(nèi)鏡在體診斷結(jié)直腸癌的研究[D];山東大學(xué);2014年

3 胡春瑞;受激拉曼散射顯微鏡的髓鞘成像應(yīng)用及連續(xù)波激光器搭建受激拉曼散射顯微鏡[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2014年

4 胡文艷;新鮮胰腺組織的無標記非線性光學(xué)顯微成像研究[D];華中科技大學(xué);2013年

5 秦秀敏;早期食管癌及癌前病變內(nèi)鏡診斷、治療、隨訪及癌前病變中多種蛋白表達分析研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 許仁安;基于二次諧波和雙光子激發(fā)熒光非線性光學(xué)效應(yīng)的腸微結(jié)構(gòu)成像[D];福建師范大學(xué);2013年

2 徐健;多光子顯微成像技術(shù)用于食管鱗癌進程監(jiān)測的研究[D];福建師范大學(xué);2013年

3 陳傳寶;應(yīng)用非線性光學(xué)成像技術(shù)診斷移植腎間質(zhì)纖維化的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

4 趙明星;類彈性蛋白多肽黏膜下注射應(yīng)用于內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

5 李洪生;多光子顯微成像技術(shù)用于結(jié)直腸腺癌發(fā)展進程監(jiān)測的研究[D];福建師范大學(xué);2014年

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本文編號：1095688