本文關(guān)鍵詞：體細(xì)胞重編程過(guò)程中Pkm2表達(dá)特征和功能研究

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【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?癌癥是世界嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題,據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的數(shù)據(jù)顯示,每年全球約800萬(wàn)人死于癌癥。在我國(guó)每6分鐘就有一人被確診為癌癥,每天有8550人成為癌癥患者。因此,深入認(rèn)識(shí)癌癥并尋找診斷治療癌癥的靶標(biāo)刻不容緩。生物體的生存離不開(kāi)能量的供應(yīng),腫瘤細(xì)胞也不例外。惡性腫瘤在有氧環(huán)境下仍然保持異常旺盛的糖酵解(Warburg效應(yīng)),這種代謝的轉(zhuǎn)變是為了滿足腫瘤增殖活力和生物合成的需求,其中一個(gè)起重要作用的關(guān)鍵酶便是丙酮酸激酶,其與多種腫瘤的分期分型、惡性程度等密切相關(guān)。但在腫瘤發(fā)生早期,Pkm2是如何發(fā)揮作用的,其復(fù)雜的表達(dá)調(diào)控是如何建立的尚不清楚。這是由于腫瘤發(fā)生的過(guò)程不能夠被人們捕捉的原因。隨著對(duì)腫瘤各方面性質(zhì)的深入研究,人們發(fā)現(xiàn)腫瘤與干細(xì)胞存在密切聯(lián)系,如Wnt、Notch、SHH等信號(hào)通路的相似性,ES特異基因Oct4、Sox2、Nanog等在腫瘤中同樣高表達(dá)等。因此,我們擬把重編程過(guò)程作為模擬腫瘤發(fā)生的體外研究平臺(tái),研究Pkm2在重編程過(guò)程中的表達(dá)模式及功能,探討其對(duì)重編程過(guò)程的影響和調(diào)控,為揭示Pkm2在腫瘤發(fā)生中的表達(dá)調(diào)控并發(fā)現(xiàn)新的潛在診療靶標(biāo)提供理論基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法:首先,我們利用構(gòu)建成功的二次重編程系統(tǒng)小鼠制備小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF細(xì)胞)。然后利用MEF細(xì)胞在含有強(qiáng)力霉素(Dox)的ES培養(yǎng)基中誘導(dǎo)重編程,成功得到誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞(iPS cell)。隨后,利用shRNA將Pkm敲低后進(jìn)行誘導(dǎo),觀察克隆生成情況。為了檢測(cè)重編程過(guò)程中Pk基因的表達(dá)變化,我們?cè)谡T導(dǎo)過(guò)程中在不同的時(shí)間點(diǎn)取樣,用qPCR和Western Blot分別檢測(cè)Pkm1,pkm2的表達(dá)情況,對(duì)它們的表達(dá)變化進(jìn)行分析。最后,通過(guò)qPCR檢測(cè)Pkm2的相關(guān)調(diào)控基因的表達(dá)。根據(jù)已知的Pkm2基因在腫瘤細(xì)胞中的調(diào)控情況,探尋在腫瘤細(xì)胞中相關(guān)調(diào)控基因Ptb,hnRANPA1,hnRNPA2B1,Hif-1α等在重編程過(guò)程中的表達(dá)趨勢(shì)。然后對(duì)它們進(jìn)行上調(diào)或者敲低表達(dá)后,觀察其對(duì)重編程過(guò)程的影響及對(duì)Pkm2、Pkm1基因的調(diào)控作用。Pk基因的幾種亞型中,只有Pkm2能夠被變構(gòu)調(diào)節(jié):低激酶活性的二聚體形式和高激酶活性的四聚體形式。在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)Pkm2二聚體形式,而高激酶活性的Pkm2四聚體形式表達(dá)較低。我們將利用Western Blot檢測(cè)在重編程過(guò)程中Pkm2兩種變構(gòu)形式的變化關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1、Pkm2在重編程過(guò)程中起到重要作用,不可或缺;2、Pkm2在多能細(xì)胞中入核或可作為轉(zhuǎn)錄因子參與基因調(diào)控;3、Pkm2在重編程過(guò)程中與其在腫瘤細(xì)胞已知的相關(guān)特征相一致,可以通過(guò)對(duì)重編程過(guò)程的研究構(gòu)建其調(diào)控網(wǎng)絡(luò),進(jìn)一步探索新的可能的調(diào)控因子。
【關(guān)鍵詞】：誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 重編程 丙酮酸激酶M2型
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.2
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 第1章 前言11-17
• 一、研究背景11-16
• 1、國(guó)內(nèi)外腫瘤現(xiàn)狀11
• 2、腫瘤能量代謝特點(diǎn)11-12
• 3、PK在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的表達(dá)模式12-13
• 4、腫瘤細(xì)胞中Pkm2與Pkm1的調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)換13
• 5、Pkm2在腫瘤細(xì)胞中的功能13-14
• 6、Pkm2的高表達(dá)與腫瘤的關(guān)系及研究現(xiàn)狀14-15
• 7、利用重編程過(guò)程模擬腫瘤發(fā)生的過(guò)程15-16
• 二、研究思路16-17
• 1、技術(shù)路線16
• 2、研究?jī)?nèi)容16
• 3、總結(jié)16-17
• 第2章 材料和方法17-45
• 一、材料和儀器17-19
• 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 2、實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 3、實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 二、方法19-45
• 1、pFUW-Tet-On表達(dá)載體的構(gòu)建19-27
• 2、p Sico-sh表達(dá)載體的構(gòu)建27-30
• 3、i PS細(xì)胞系的建立和培養(yǎng)30-35
• 4、i PS細(xì)胞系的鑒定35-45
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-53
• 一、可誘導(dǎo)型i PS細(xì)胞系的建立45-46
• 二、Pkm2在不同細(xì)胞中的表達(dá)情況46-47
• 三、Pkm在重編程過(guò)程中的表達(dá)47-48
• 四、敲低Pkm的表達(dá)對(duì)重編程過(guò)程的影響48-49
• 五、小結(jié)49
• 六、構(gòu)建Pkm2相關(guān)載體進(jìn)行深入研究49-50
• 七、Pkm2作為調(diào)控因子參與基因調(diào)控50-51
• 八、FUW-3F-Pkm2-P2A-MKO標(biāo)簽表達(dá)載體的構(gòu)建51-52
• 九、總結(jié)52-53
• 第4章 總結(jié)與討論53-56
• 第5章 參考文獻(xiàn)56-59
• 綜述 丙酮酸激酶M2型（PKM2）在腫瘤細(xì)胞中的功能及調(diào)控59-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 致謝68-69

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 谷瑞升;賈文文;田艷艷;杜生明;;重大研究計(jì)劃“細(xì)胞編程和重編程的表觀遺傳機(jī)制”中期進(jìn)展概述[J];中國(guó)基礎(chǔ)科學(xué);2013年05期

2 唐新杰;謝峰;張群;;細(xì)胞抽提物重編程作用的研究進(jìn)展[J];組織工程與重建外科雜志;2011年01期

3 汪進(jìn)益;范慧敏;劉中民;;內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制劑與重編程功能性心肌干細(xì)胞[J];組織工程與重建外科雜志;2011年01期

4 趙巍;陳煥;馮業(yè)童;劉朋飛;;誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞重編程誘導(dǎo)方式的研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2012年05期

5 劉雪霞;李建遠(yuǎn);;哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植后核重編程研究進(jìn)展[J];國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2008年06期

6 景秋洋;陳費(fèi);金圣博;何志穎;胡以平;;細(xì)胞直接重編程:從一種終末分化細(xì)胞直接重編程為另一種終末分化細(xì)胞[J];生命的化學(xué);2012年04期

7 ;卵細(xì)胞對(duì)精子重編程機(jī)制被揭示[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2011年06期

8 林真;沈曉麗;;轉(zhuǎn)導(dǎo)特定基因重編程體細(xì)胞為多能干細(xì)胞[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年02期

9 彭正軍;劉路;凌均h，

本文編號(hào)：1091125