本文關(guān)鍵詞：葉酸受體靶向的多功能殼聚糖納米載體用于抗腫瘤和成像研究

  更多相關(guān)文章： 殼聚糖 葉酸 基因治療 化療 聯(lián)合治療 細(xì)胞成像

【摘要】：隨著腫瘤的發(fā)生率與死亡率日漸增加,腫瘤的預(yù)防、診斷以及針對(duì)性治療正被人們時(shí)刻關(guān)注著,各種研究治療的方式和手段也正日益改善腫瘤的療效。目前應(yīng)用在臨床治療上的最主要手段仍然還是傳統(tǒng)化療藥物治療,但如何提高藥物在靶點(diǎn)的有效性和降低藥物副作用一直是實(shí)踐中的難題;而現(xiàn)代生物治療(基因療法)是一種治療腫瘤的新手段,因其抑制腫瘤能力強(qiáng),可從源頭控制癌細(xì)胞基因、減少產(chǎn)生腫瘤形成相關(guān)分子等特點(diǎn),受到越來(lái)越多的關(guān)注。當(dāng)然臨床使用中也面臨巨大的挑戰(zhàn),主要是因?yàn)槠漭斔托实?穩(wěn)定性差,容易被體內(nèi)的酶或者其他物質(zhì)降解,難以發(fā)揮功效。那么構(gòu)建一種安全且能攜載不同作用機(jī)制的藥物/基因復(fù)合載體,提供多種治療手段,勢(shì)必將幫助進(jìn)一步提高腫瘤治療能力。本論文通過(guò)構(gòu)建葉酸和異硫氰酸熒光素共修飾的殼聚糖(FA-CS-FITC),同時(shí)攜載化療藥物阿霉素(DOX)和碳量子點(diǎn)(C-Dots),表面吸附上與抑制腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)的VEGF shRNA,將化療和基因治療相結(jié)合,協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。復(fù)合載體FA-CS-FITC大小約為100nm,表面Zeta電位高達(dá)+24.7mV,具有良好的生物相容性、穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn),能夠高效攜載阿霉素(載藥率14.1%);同時(shí)C-Dots包裹進(jìn)復(fù)合載體后也可以在多種溶劑中保持穩(wěn)定性,而且由于殼聚糖本身的pH響應(yīng)能力,還可以在酸性環(huán)境下穩(wěn)定釋放;將VEGF shRNA吸附在納米復(fù)合物上后,既能有效保護(hù)不被體內(nèi)的多種酶降解,同時(shí)也可以在離子富集的環(huán)境下釋放出來(lái)。生物學(xué)研究結(jié)果表明,在聯(lián)合藥物和基因治療后對(duì)HeLa腫瘤細(xì)胞的抑制率48h可以達(dá)到74%,同時(shí)藥物和基因雙重治療促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的凋亡的發(fā)生;葉酸分子給復(fù)合粒子提供更高的靶向能力,可以有效提高載體被細(xì)胞內(nèi)吞。我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),復(fù)合納米粒子在治療細(xì)胞的同時(shí),還可以利用量子點(diǎn)的熒光光學(xué)特性對(duì)細(xì)胞進(jìn)行示蹤與定位,進(jìn)行光學(xué)成像和示蹤研究。本文研究表明復(fù)合納米藥物FA-CS-FITC(DOX/C-Dots)/VEGF shRNA具有很好的協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,提高腫瘤治療效果的能力,同時(shí)幫助在腫瘤細(xì)胞中定位和成像,為腫瘤治療提供了一種新途徑。
【關(guān)鍵詞】：殼聚糖 葉酸 基因治療 化療 聯(lián)合治療 細(xì)胞成像
【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.5
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-13
• 第一章 緒論13-22
• 1.1 藥物運(yùn)輸納米載體的研究進(jìn)展13-19
• 1.1.1 前言13-14
• 1.1.2 納米載體（納米粒子）的分類和選擇14-15
• 1.1.3 殼聚糖納米載體材料的合成方法15
• 1.1.3.1 化學(xué)-交聯(lián)法15
• 1.1.3.2 離子-交聯(lián)法15
• 1.1.4 殼聚糖藥物載體研究現(xiàn)狀15-16
• 1.1.5 腫瘤靶向運(yùn)輸16-17
• 1.1.6 基因治療17-19
• 1.1.6.1 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF）與腫瘤的相關(guān)性研究18-19
• 1.2 熒光探針的研究和實(shí)時(shí)成像應(yīng)用19-21
• 1.2.1 熒光染料19-20
• 1.2.2 碳材料量子點(diǎn)20-21
• 1.3 本課題的實(shí)驗(yàn)思路21-22
• 第二章 水溶性碳量子點(diǎn)的合成與表征22-30
• 2.0 引言22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 2.1.1 主要試劑22-23
• 2.1.2 主要溶劑配置23
• 2.1.3 主要儀器與設(shè)備23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-25
• 2.2.1 殼聚糖碳量子點(diǎn)的制備23-25
• 2.2.1.1 微波加熱法制備殼聚糖碳量子點(diǎn)23-24
• 2.2.1.2 PEG4000表面鈍化殼聚糖碳量子合成24
• 2.2.1.3 功能化碳量子點(diǎn)C-dots的合成24
• 2.2.1.4 殼聚糖C-QDs與C-Dots的光學(xué)性質(zhì)24-25
• 2.2.1.5 殼聚糖C-QDs與C-Dots熒光量子產(chǎn)率測(cè)量25
• 2.2.2 碳量子點(diǎn)熒光的溶劑效應(yīng)25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論25-29
• 2.3.1.1 C-QDs與C-Dots紫外與熒光光譜表征25-26
• 2.3.1.2 C-Dots光成像與光穩(wěn)定性檢測(cè)26-27
• 2.3.1.3 碳量子點(diǎn)熒光的溶劑效應(yīng)27-29
• 2.4 小結(jié)29-30
• 第三章 功能化殼聚糖載體的修飾與表征30-42
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料30-31
• 3.1.1 主要試劑30
• 3.1.2 主要溶液配置30
• 3.1.3 主要儀器與設(shè)備30-31
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法31-34
• 3.2.1 葉酸活性酯的制備31
• 3.2.2 葉酸修飾殼聚糖的制備31-32
• 3.2.3 異硫氰酸熒光素標(biāo)記的葉酸殼聚糖的制備32
• 3.2.4 靶向熒光型FA-CS-FITC(DOX/C-dots)納米粒子的制備32
• 3.2.5 場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡檢測(cè)32-33
• 3.2.6 傅里葉紅外光譜檢測(cè)33
• 3.2.7 紫外與熒光分光光度計(jì)定性分析33
• 3.2.8 阿霉素負(fù)載效率實(shí)驗(yàn)33-34
• 3.2.9 藥物體外釋放實(shí)驗(yàn)34
• 3.2.10 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)34
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論34-41
• 3.3.1 靶向熒光型FA-CS-FITC(DOX/C-dots)納米粒子形貌34-37
• 3.3.2 葉酸與異硫氰酸熒光素修飾的殼聚糖表征37-41
• 3.3.2.1 葉酸、異硫氰酸熒光素修飾的紫外吸收與傅里葉紅外光譜37-38
• 3.3.2.2 葉酸異硫氰酸熒光素共修飾的殼聚糖熒光光譜分析38-39
• 3.3.2.3 功能化復(fù)合粒子載藥量和包封率研究和體外釋放實(shí)驗(yàn)39-40
• 3.3.2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)40-41
• 3.4 小結(jié)41-42
• 第四章 葉酸修飾的殼聚糖共載阿霉素和基因聯(lián)合抗腫瘤及細(xì)胞內(nèi)成像研究42-58
• 4.1 引言42
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料42-44
• 4.2.1 細(xì)胞42
• 4.2.2 主要試劑42-43
• 4.2.3 主要儀器和設(shè)備43
• 4.2.4 主要溶液配制43-44
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法44-49
• 4.3.1 VEGF shRNA的提取及濃度測(cè)定44-45
• 4.3.2 基因復(fù)合物的制備與吸附實(shí)驗(yàn)45
• 4.3.3 HeLa細(xì)胞的培養(yǎng)45-46
• 4.3.3.1 細(xì)胞的復(fù)蘇45-46
• 4.3.3.2 細(xì)胞的傳代與接板46
• 4.3.3.3 細(xì)胞的凍存46
• 4.3.4 FA-CS-FITC與FA-CS-FITC(C-Dots)載體細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)46-47
• 4.3.5 復(fù)合粒子的細(xì)胞內(nèi)吞實(shí)驗(yàn)47
• 4.3.6 基因藥物復(fù)合粒子的抗腫瘤協(xié)同治療檢測(cè)47-48
• 4.3.7 基因藥物復(fù)合粒子的促腫瘤細(xì)胞凋亡檢測(cè)48
• 4.3.8 VEGF基因表達(dá)檢測(cè)48
• 4.3.9 復(fù)合粒子靶向與競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)48-49
• 4.3.10復(fù)合粒子模式成像49
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-57
• 4.4.1 FA-CS-FITC(DOX/C-dots)/VEGF shRNA NPs形貌表征與電位49-50
• 4.4.2 復(fù)合粒子對(duì)VEGF shRNA吸附與保護(hù)50-51
• 4.4.3 FA-CS-FITC與FA-CS-FITC(C-Dots)載體細(xì)胞毒性檢測(cè)51-52
• 4.4.4 復(fù)合粒子的內(nèi)吞情況檢測(cè)52
• 4.4.5 復(fù)合粒子靶向性與競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)52-55
• 4.4.6 復(fù)合粒子協(xié)同抗腫瘤研究55-56
• 4.4.7 復(fù)合粒子模式成像圖56-57
• 4.5 小結(jié)57-58
• 第五章 全文總結(jié)58-59
• 致謝59-60
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 攻碩期間的研究成果64-65

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