本文關(guān)鍵詞：尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶影響胃癌細胞的生物學功能和患者預(yù)后

  更多相關(guān)文章： 尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶 預(yù)后 胃癌 組織芯片

【摘要】：[研究背景]在臨床實踐中,一些指標被廣泛用于預(yù)測胃癌患者的預(yù)后。 這些指標包括如癌胚抗原(CEA)、ca199等分子標志物的聯(lián)合檢測以及腫瘤分期與分級的劃分。但是,這些預(yù)測患者預(yù)后的方法依然有一定的局限性,所以,胃癌仍然是最致命的人類惡性腫瘤之一。代謝酶尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶(NNMT, EC.2.1.1.1)曾被報道參與各種癌的進展和發(fā)展。然而,NNMT在胃癌中的預(yù)后和生物功能尚不清楚。[材料方法]1.利用定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測胃癌患者新鮮組織(包括腫瘤組織和瘤旁組織)NNMT的mRNA表達是否存在差異。2.采用免疫組織化學(IHC)的方法,檢測蠟塊中良惡性胃粘膜上皮組織中的NNMT蛋白質(zhì)表達的差異。3.統(tǒng)計并評估患者胃癌組織中NNMT蛋白表達與臨床病理及預(yù)后的關(guān)系。4.利用siRNA介導,抑制NNMT在胃腺癌細胞株MGC803 BGC823中的表達, 探究NNMT在胃癌細胞系體內(nèi)外的生物學功能。5.充分檢索并分析數(shù)據(jù)庫TCGA,并利用cBioPortal網(wǎng)站計算并得出NNMT共表達基因列表.采用DAVID Bioinformatics Resources 6.7對列表中的高表達相關(guān)性基因進行富集分析。[結(jié)果]1.通過qRT-PCR實驗發(fā)現(xiàn)與鄰近非癌組織相比,NNMT的mRNA和蛋白水平在胃癌組織中上調(diào);通過免疫組化實驗發(fā)現(xiàn)NNMT蛋白表達水平在胃癌組織中的表達明顯升高(56.8%vs31.9%)。2. NNMT的蛋白表達水平與原發(fā)腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移和TNM分期有相關(guān)性。3.單因素和多因素COX回歸生存分析驗證了NNMT的蛋白表達是胃癌患者總存活率的獨立預(yù)后因素。4.用siRNA干擾胃癌細胞系MGC803、BGC823中NNMT的表達水平,細胞增殖、 侵襲和遷移在體內(nèi)外都受到了抑制。[結(jié)論]總體而言,這項研究的結(jié)果表明NNMT的表達在胃癌組織中上調(diào),并能促進胃癌細胞的增殖、遷移侵襲。最重要的是,NNMT的表達水平是一個潛在的預(yù)測胃癌患者預(yù)后的新靶點。
【關(guān)鍵詞】：尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶 預(yù)后 胃癌 組織芯片
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 第一部分：尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶在胃癌組織中的表達及預(yù)后影響12-31
• 材料12-15
• 1、TCGA數(shù)據(jù)庫12-13
• 2、組織標本13
• 3、實驗試劑13-14
• 4、實驗儀器14
• 5、引物14-15
• 方法15-20
• 1、總RNA的提取(Trizol法)15
• 2、逆轉(zhuǎn)錄cDNA15-16
• 3、實時熒光定量PCR16
• 4、組織芯片的制備16-17
• 5、免疫組化分析17-18
• 6、統(tǒng)計學分析18-20
• 結(jié)果20-22
• 一、TCGA數(shù)據(jù)庫分析20
• 二、NNMT在胃癌及癌旁組織中的表達情況20
• 三、NNMT的表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系20-21
• 四、NNMT的表達與胃癌預(yù)后的關(guān)系21-22
• 附圖表22-31
• 第二部分：尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶影響胃癌細胞生物學功能31-50
• 材料31-36
• 一、實驗材料31-34
• 1、細胞株與培養(yǎng)基31
• 2、實時熒光定量PCR試劑31-32
• 3、Western Blot相關(guān)試劑32
• 4、siRNA及細胞轉(zhuǎn)染相關(guān)試劑32
• 5、與細胞功能學有關(guān)的實驗試劑32-33
• 6、相關(guān)培養(yǎng)基及溶液的配置33-34
• 二、實驗儀器及耗材34-36
• 方法36-44
• 1、細胞培養(yǎng)36
• 2、實時熒光定量PCR檢測mRNA表達36-38
• 3、Western blot蛋白測定38-40
• 4、Transwell小室實驗檢測細胞侵襲和遷移40-41
• 5、碘化丙錠PI單染法檢測細胞周期41
• 6、CCK8實驗檢測細胞增殖能力41
• 7、細胞轉(zhuǎn)染41-42
• 8、生物信息學分析42
• 9、裸鼠成瘤實驗42-43
• 10、統(tǒng)計學分析43-44
• 結(jié)果44-46
• 1. NNMT在胃癌細胞系中的表達情況44
• 2. 沉默NNMT胃癌細胞系的構(gòu)建44
• 3. 沉默NNMT對胃癌細胞系MGC803和BGC823遷移和侵襲能力的影響44
• 4. 沉默NNMT對胃癌細胞系MGC803和BGC823細胞周期和增殖能力的影響44-45
• 5. 沉默NNMT對裸鼠成瘤能力的影響45
• 6. 沉默NNMT后可能影響的信號通路45-46
• 附圖表46-50
• 討論50-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻54-61
• 文獻綜述61-75
• 1. NNMT在多種腫瘤中的異常表達62-64
• 2. NNMT影響腫瘤細胞的生物學功能及其機制64-66
• 3. NNMT與腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系66-68
• 參考文獻68-75
• 附錄75-77
• 附錄1：攻讀學位期間發(fā)表文章75-76
• 附錄2：縮略詞表76-77
• 致謝77-78

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Nicotinamide N-methyltransferase protein expression in renal cell cancer[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2010年02期

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本文編號：1085159