本文關(guān)鍵詞：秦皮乙素對人肝癌細胞Wnt信號通路的影響

  更多相關(guān)文章： 秦皮乙素 SMCC-7721 Wnt信號通路 β-catenin C-myc Cyclin D1

【摘要】：目的：檢測秦皮乙素(Esculetin)對人肝癌細胞的增殖影響以及對Wnt通路中β-catenin、C-myc和Cyclin D1基因和蛋白的表達影響,初步探討其抗腫瘤機制。方法：1.采用細胞病變法(Cytopathologic Effect, CPE)觀察秦皮乙素對肝癌細胞SMMC-7721的抑制作用。用噻唑藍比色法(3-(4,5-dimethyithiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)來測定秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721和人肝細胞HL-7702的抑制率。2.采用熒光定量PCR技術(shù)檢測秦皮乙素在不同濃度,不同時間點對β-catenin、 C-myc和Cyclin D1基因合成的影響。3.通過蛋白免疫印跡法檢測秦皮乙素對磷酸化β-catenin、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白表達的影響。結(jié)杲：1.秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721有增殖抑制作用,抑制效果與時間和濃度呈依賴關(guān)系。秦皮乙素與順鉑對肝癌細胞SMMC-7721的抑制率相同時,秦皮乙素對正常肝細胞HL-7702的毒性更低。2.藥物作用人肝癌細胞SMMC-772148h和72h后,秦皮乙素與細胞對照組相比能顯著降低β-catenin、C-myc和Cyclin D1基因的合成(P0.05)。3.秦皮乙素作用人肝癌細胞SMMC-7721 24h后能提高P-catenin蛋白的磷酸化水平；秦皮乙素作用人肝癌細胞SMMC-7721 72h后降低了β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白的表達量。結(jié)論：1.秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721有增殖抑制作用,抑制效果與時間和濃度呈依賴關(guān)系。2.秦皮乙素通過上調(diào)P-catenin蛋白的磷酸化水平,促進P-catenin的降解,抑制Wnt通路的激活。3.秦皮乙素通過下調(diào)β-catenin、C-myc和Cyclin D1基因和蛋白的表達來抑制肝癌細胞SMMC-7721的增殖。
【關(guān)鍵詞】：秦皮乙素 SMCC-7721 Wnt信號通路 β-catenin C-myc Cyclin D1
【學位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要8-9
• 文獻綜述9-18
• 1 肝癌9-10
• 1.1 肝癌概述9
• 1.2 中藥抗癌途徑9-10
• 1.2.1 直接殺傷腫瘤細胞9
• 1.2.2 誘導細胞分化9-10
• 1.2.3 誘導細胞凋亡10
• 1.2.4 抑制腫瘤血管的生成10
• 1.2.5 調(diào)節(jié)細胞信號傳導通路10
• 2 Wnt通路10-15
• 2.1 Wnt通路概述10-11
• 2.2 Wnt通路中相關(guān)因子在不同腫瘤中的表達11-15
• 3 秦皮乙素的研究進展15-18
• 3.1 秦皮乙素的理化特征15-16
• 3.2 秦皮乙素的藥理活性16-18
• 3.2.1 抗炎鎮(zhèn)痛作用16
• 3.2.2 抗腫瘤作用16
• 3.2.3 抗氧化和清除自由基作用16-17
• 3.2.4 抗病原微生物作用17
• 3.2.5 抗凝和抗過敏作用17
• 3.2.6 其他作用17-18
• 前言18-19
• 1 試驗材料19-22
• 1.1 主要試劑19
• 1.2 試劑配制19-21
• 1.3 試驗儀器21
• 1.4 試驗藥物21
• 1.5 細胞21-22
• 1.5.1 來源21-22
• 1.5.2 細胞培養(yǎng)22
• 1.5.3 細胞傳代22
• 1.5.4 細胞凍存22
• 1.5.5 復蘇細胞22
• 2 試驗方法22-29
• 2.1 秦皮乙素藥效學檢測22-23
• 2.1.1 藥物的溶解和配制22-23
• 2.1.2 MTT法測定抑制率23
• 2.1.3 觀測肝癌細胞SMMC-7721病變效應23
• 2.1.4 分組設置23
• 2.2 普通PCR檢測目的基因23-25
• 2.2.1 引物設計23-24
• 2.2.2 樣品制備24
• 2.2.3 提取細胞總RNA24
• 2.2.4 合成cDNA24-25
• 2.3 熒光定量PCR檢測目的基因25-26
• 2.4 Western blot26-29
• 2.4.1 總蛋白樣品的制備26-27
• 2.4.2 磷酸化蛋白的提取27
• 2.4.3 BCA法測定蛋白濃度27
• 2.4.4 SDS-PAGE電泳27-28
• 2.4.5 轉(zhuǎn)膜28
• 2.4.6 封閉28
• 2.4.7 一抗孵育28-29
• 2.4.8 二抗孵育29
• 2.4.9 蛋白檢測29
• 2.4.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析29
• 3 結(jié)果29-39
• 3.1 秦皮乙素的藥效作用29-32
• 3.1.1 秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721和人肝細胞HL-7702增殖的影響29-31
• 3.1.2 秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721導致的病變31-32
• 3.2 熒光定量PCR測定結(jié)果32-38
• 3.2.1 人肝癌細胞SMMC-7721總RNA提取與檢測32
• 3.2.2 普通PCR電泳驗證目的基片段32-33
• 3.2.3 熒光定量PCR目的基因特異性驗證33-34
• 3.2.4 熒光定量PCR產(chǎn)物測序驗證34
• 3.2.5 不同時間點秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721β-catenin基因表達量的影響34-36
• 3.2.6 不同時間點秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721 C-myc基因表達量的影響36-37
• 3.2.7 不同時間點秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721 Cyclin D1基因表達量的影響37-38
• 3.3 Western blot測定結(jié)果38-39
• 3.3.1 BCA蛋白濃度測定結(jié)果38
• 3.3.2 秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721磷酸化蛋白β-catenin表達量的影響38
• 3.3.3 秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721 β-catenin蛋白表達量的影響38-39
• 3.3.4 秦皮乙素對人肝癌細胞SMMC-7721 C-myc和Cyclin D1蛋白表達量的影響39
• 4 分析與討論39-42
• 4.1 秦皮乙素的細胞毒性和抗癌活性39-40
• 4.2 秦皮乙素通過上調(diào)β-catenin磷酸化蛋白表達水平而下調(diào)其β-catenin總蛋白的表達40-41
• 4.3 秦皮乙素通過降低C-myc和CycliD1在基因和蛋白水平上的表達而發(fā)揮抗腫瘤作用41-42
• 5 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-48
• Abstract48-50
• 致謝50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 嚴曉鶯;幾種抗癌活性成分對人正常肝細胞LO2毒性的體外實驗研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2012年

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本文編號：1084208