本文關(guān)鍵詞：糞便脫落細(xì)胞學(xué)和外周血標(biāo)志物篩查結(jié)直腸癌的研究

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【摘要】：研究背景結(jié)直腸癌(俗稱大腸癌)是全球范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率及病死率均居于惡性腫瘤的第3位。近年以來,我國大腸癌的發(fā)病率正在逐漸增多,由上世紀(jì)70年代初的12/10萬增長到目前的56/10萬,已成為威脅公眾健康和生命安全的重大疾病。研究表明,有效的早期篩查和干預(yù)治療可明顯的大幅度地降低大腸癌的發(fā)病率與死亡率。目前最廣泛使用的大腸癌篩查方法是糞便隱血試驗(FOBT)檢測、電子結(jié)腸鏡檢查和活體組織取檢及病理等等。糞便隱血試驗比較常用,但是它的敏感性和特異性都比較低,而且假陰性率及假陽性率均較高。結(jié)腸鏡檢查和活體組織取檢及病理作為目前臨床篩查和臨床診斷的一種金標(biāo)準(zhǔn),但結(jié)腸鏡檢查畢竟是一項有創(chuàng)操作而且其檢查費用也較高,不能推廣為為一線篩查方法。糞便檢測簡便、特異性較高、無創(chuàng)、患者依從性好且腸道無需做特殊的檢測前準(zhǔn)備,可以作為大腸癌早期篩查和早期診斷的一種重要手段。然而,糞便中除含有脫落細(xì)胞外還混有大量的雜質(zhì)如細(xì)菌、食物殘渣、膽汁及腸黏液等,從而導(dǎo)致脫落細(xì)胞提取的純度不高。目前常用的細(xì)胞提取方法包括細(xì)胞離心淘洗法、細(xì)胞密度梯度離心法以及細(xì)胞免疫磁珠法,但上述的三種提取方法因細(xì)胞涂片背景不清、費時、費力、費用高、操作繁瑣等缺點大大限制了其在臨床篩查中的應(yīng)用。因此,本研究的第一部分我們采用納米Fe_3O_4葉酸磁珠替代免疫磁珠來采集脫落細(xì)胞,并進一步探討該方法在臨床大腸癌診斷應(yīng)用的可行性及其臨床篩查效率。另外,最近研究發(fā)現(xiàn)SEPT9基因的過甲基化可以做為早期檢測大腸癌的分子標(biāo)志物,但是前期研究使用的都是最早期的SEPT9檢測方法,而且實驗對象人群均為西方國家人群。通過改進工藝和實驗流程,新一代的SEPT9基因甲基化檢測方法提高了對微量游離DNA的分析水平,理論上可提高檢測結(jié)直腸癌的性能,但是目前相關(guān)研究還很少。因此,在本研究的第二部分,我們評估了外周血標(biāo)志物新一代SEPT9基因甲基化檢測方法在中國人群結(jié)直腸癌早期診斷中的作用,并與免疫法糞隱血試驗(FIT)進行了比較。研究目的第一部分旨在探討納米Fe_3O_4葉酸磁珠富集大腸癌患者糞便脫落細(xì)胞的可行性及其臨床篩選效率。第二部分旨在探討外周血標(biāo)志物新一代SEPT9基因甲基化檢測方法在中國人群結(jié)直腸癌早期診斷中的作用,并與FIT進行了比較。研究方法探討納米Fe_3O_4葉酸磁珠富集法提取糞便脫落細(xì)胞的可行性及其臨床意義。第一,采用大腸癌患者糞便脫落細(xì)胞富集篩檢試驗對納米Fe_3O_4葉磁珠富集法提取糞便脫落細(xì)胞的可行性進行評估。第二,采用體外培養(yǎng)大腸癌HCT116細(xì)胞富集篩檢試驗對納米Fe_3O_4葉酸磁珠富集法提取糞便脫落細(xì)胞的可行性進行評估。探討外周血標(biāo)志物SEPT9檢測結(jié)直腸癌的敏感性和特異性。第一,采用電子結(jié)腸鏡檢查和活體組織取檢及病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)的回顧性病例一對照研究。研究對象為經(jīng)電子結(jié)腸鏡檢查和病理診斷確診的大腸癌患者與健康正常人。第二,采用配對研究的方法直接比較SEPT9和FIT的檢測性能。研究結(jié)果探討納米Fe_3O_4葉酸磁珠富集法提取糞便脫落細(xì)胞的可行性及其臨床意義1.體外培養(yǎng)大腸癌細(xì)胞檢測磁珠包被系統(tǒng)的富集效率1.1周圍包被高糖化合物的納米Fe_3O_4葉酸磁珠懸液放置時間較長不會出現(xiàn)磁珠與液體分層,懸液穩(wěn)定性好,磁珠不會沉淀于試管底部,能較清楚的觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu),不影響觀察細(xì)胞特性。1.2體外大腸癌脫落細(xì)胞培養(yǎng)的最佳反應(yīng)條件體外大腸癌脫落細(xì)胞培養(yǎng)的最佳反應(yīng)條件為40ul周圍包被高糖化合物的納米葉酸磁珠加入100ul大腸癌細(xì)胞HCT116懸液(10× 105/ml),在37℃水浴中孵育60min,將裝有孵育后納米葉酸磁珠-細(xì)胞混懸液的離心管與磁鐵進行15min的貼壁反應(yīng)。2.納米Fe_3O_4葉酸磁珠富集大腸癌患者糞便脫落細(xì)胞的驗證實驗2.1糞便脫落細(xì)胞學(xué)檢出大腸癌的敏感性情況脫落細(xì)胞檢查大腸癌的敏感性高達(dá)66%(33/50);異型細(xì)胞的陽性檢出率與大腸癌的分布部位有顯著相關(guān)性(P0.05)。2.2糞便脫落細(xì)胞學(xué)與糞便隱血試驗對大腸癌檢出的特異性情況糞便脫落細(xì)胞檢查大腸癌的特異性高達(dá)100%;糞便脫落細(xì)胞檢測大腸癌的特異性明顯高于糞便潛血試驗(P0.05)。2.3大腸癌患者清腸便與自然便的脫落細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果情況自然便與清腸便聯(lián)合脫落細(xì)胞學(xué)檢測的敏感性遠(yuǎn)高于單次清腸便或自然便脫落細(xì)胞學(xué)檢測的敏感性,聯(lián)合檢測的敏感性可高達(dá)92%(46/50)。2.4細(xì)胞涂片觀察納米Fe_3O_4葉酸磁珠法與三層篩網(wǎng)一體法收集脫落細(xì)胞情況從細(xì)胞涂片的效果觀察發(fā)現(xiàn)三層篩網(wǎng)一體法收集的脫落細(xì)胞分布不均,常呈片塊狀,背景有大量糞便殘渣,嚴(yán)重影響觀察細(xì)胞形態(tài),而納米葉酸磁珠法富集的脫落細(xì)胞分散均勻,涂片背景僅有極少量糞便殘渣,相對比較干凈不影響觀察細(xì)胞形態(tài)探討外周血標(biāo)志物SEPT9檢測結(jié)直腸癌的敏感性和特異性1.經(jīng)結(jié)腸鏡檢查和病理診斷確診的大腸癌患者與健康正常人回顧性病例—對照研究結(jié)果1.1 在腫瘤性病變中,可見隨著病變的進展,即從非進展期腺瘤、進展期腺瘤但無高級別瘤變,到高級別瘤變,最后到結(jié)直腸癌,SEPT9的陽性率逐漸升高。1.2 SEPT9對結(jié)直腸癌的敏感性為74.8%(95%CI:67.0%-81.6%),特異性為87.4%;SEPT9的陽性率隨結(jié)直腸癌分期的進展而升高1.3 SEPT9的陽性率在不同的年齡、性別、腫瘤部位亞組間均沒有顯著差異2.配對研究比較了SEPT9和FIT的檢測性能2.1 SEPT9較FIT檢查對結(jié)直腸癌具有更好的檢出性能。2.2 SEPT9和FIT聯(lián)合檢測結(jié)直腸癌可以顯著的提高檢出率研究結(jié)論1.納米葉酸磁珠法可顯著提高糞便脫落細(xì)胞的檢出敏感性,為大腸癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷提供可靠有效方法,而且納米葉酸磁珠檢測法不僅可增加異性細(xì)胞檢出效率,而且可保持被分離靶細(xì)胞的形態(tài)和功能的完整,細(xì)胞圖片顯示脫落細(xì)胞分散均勻,背景清楚,不影響觀察細(xì)胞形態(tài)。2.SEPT9具有良好的大腸癌檢出性能,可以用于大腸癌篩查。新一代SEPT9檢查方法比我們所使用的FIT在大腸癌的檢出上具有更好的性能,也優(yōu)于文獻報道的第一代SEPT9檢測性能。聯(lián)合使用SEPT9和FIT檢測大腸癌可能會提高檢出率和篩查效果
【關(guān)鍵詞】：大腸癌 納米Fe_3O_4葉酸磁珠 免疫法糞隱血試驗 SEPT9基因
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-11
• 中文摘要11-14
• 第一章 前言14-15
• 第二章 納米FE_3O_4葉酸磁珠富集法提取糞便脫落細(xì)胞的臨床價值及意義15-31
• 2.1 材料和方法15-20
• 2.2 結(jié)果20-28
• 2.3 討論28-30
• 2.4 結(jié)論30-31
• 第三章 外周血游離SEPT9基因甲基化檢測結(jié)直腸癌的研究31-42
• 3.1 材料與方法32-34
• 3.2 結(jié)果34-38
• 3.3 討論38-41
• 3.4 結(jié)論41-42
• 全文總結(jié)42-49
• 參考文獻43-49
• 文獻綜述一 糞便脫落細(xì)胞及其標(biāo)記物篩查大腸癌的研究進展49-65
• 參考文獻60-65
• 文獻綜述二 大腸癌的篩檢與監(jiān)測65-75
• 參考文獻70-75
• 在讀碩士期間論文發(fā)表情況75-76
• 致謝76

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：1083786