本文關(guān)鍵詞：青蒿琥酯對(duì)宮頸癌U14細(xì)胞移植瘤VEGF及COX-2表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:子宮頸癌為最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一,近年在發(fā)展中國(guó)家發(fā)病年齡有年輕化趨勢(shì)。通過(guò)手術(shù)及放化療的方法雖可改善早期宮頸癌預(yù)后,但對(duì)導(dǎo)致宮頸癌患者死亡的復(fù)發(fā)性、轉(zhuǎn)移性宮頸癌,其療效尚不理想。手術(shù)相對(duì)創(chuàng)傷較大而化療藥物長(zhǎng)期大量應(yīng)用可能導(dǎo)致毒性積累,副反應(yīng)加重甚至化療藥物耐藥,因此尋找高效、無(wú)毒的抗腫瘤藥物成為研究熱點(diǎn)。血管生成是促血管形成因子和抑制因子協(xié)調(diào)作用的復(fù)雜過(guò)程,在創(chuàng)傷修復(fù)、生長(zhǎng)發(fā)育及生殖中占據(jù)重要位置。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)及環(huán)氧合酶2(COX-2)是與腫瘤血管生成密切相關(guān)的細(xì)胞因子,參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。青蒿琥酯(ART)已證實(shí)對(duì)于肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、結(jié)腸癌、白血病、黑色素瘤、腎臟腫瘤等腫瘤細(xì)胞具有良好療效[1],且副作用小于傳統(tǒng)化療藥物。目前體外研究證實(shí),青蒿琥酯可通過(guò)抑制腫瘤組織血管生成,從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究青蒿琥酯作用下宮頸癌U14移植瘤VEGF及COX-2的表達(dá)變化及其與微血管密度(MVD)的相關(guān)性,探究青蒿琥酯是否可通過(guò)抑制血管生成而發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。方法:1移植瘤動(dòng)物模型的建立及實(shí)驗(yàn)分組收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期U14細(xì)胞,調(diào)整濃度為1×10~7/ml,接種于小鼠腹腔(0.7ml/只),待3-5天后腹水形成,取腹水離心后,生理鹽水稀釋為5×10~7/ml,于雌性KM小鼠(5-6周齡,15-17g)左后肢近背部皮下接種0.2ml。成瘤且腫瘤直徑5mm進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組:1、正常對(duì)照組(未接種腫瘤,肌注生理鹽水1/日)2、腫瘤對(duì)照組(成瘤后,肌注生理鹽水1/日);3、ART組(成瘤后,肌注青蒿琥酯20mg/kg/d);4、DDP組(成瘤后,腹腔注射順鉑2mg/kg/d),各給藥0.2ml。每組80只,各組共給藥7日。后各組再次隨機(jī)分為4組,分別于第10d、20d、30d、40d處死,每組20只。2腫瘤組織中VEGF及COX-2表達(dá)情況及MVD計(jì)數(shù)的分析制備腫瘤組織石蠟切片,免疫組化染色后進(jìn)行圖像分析,VEGF、COX-2表達(dá)強(qiáng)度以灰度值(GS)表示,數(shù)值大小與陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度呈反比。以矩形走形計(jì)算200個(gè)細(xì)胞,計(jì)算各組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)百分率。光鏡下VEGF染色陽(yáng)性細(xì)胞呈棕黃色,采用weidner等方法進(jìn)行MVD量化分析。首先在低倍視野下掃視整個(gè)組織切片,在腫瘤浸潤(rùn)區(qū)域選取內(nèi)皮細(xì)胞染色分析、微血管數(shù)量密集的視野,隨機(jī)選取6個(gè)高倍視野,對(duì)微血管數(shù)計(jì)算,計(jì)算平均值作為MVD。任何棕黃色陽(yáng)性內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇,只要與臨近腫瘤細(xì)胞、血管及其他結(jié)締組織分界清楚,即可作為1個(gè)微血管數(shù);腫瘤硬化取和大于8個(gè)紅細(xì)胞的血管不做計(jì)數(shù)對(duì)象。3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:對(duì)各組數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS13.0版本軟件進(jìn)行正態(tài)性、方差齊性檢驗(yàn),對(duì)VEGF、COX-2表達(dá)情況及MVD計(jì)數(shù)進(jìn)行單因素方差分析(analysis of variance,ANOVA),對(duì)于不符合正態(tài)性或方差齊性檢驗(yàn)者,采取K-independent samples秩和檢驗(yàn),SNK法進(jìn)一步對(duì)多樣本均數(shù)進(jìn)行兩兩比較。結(jié)果:1小鼠移植瘤中微血管生成情況與腫瘤對(duì)照組移植瘤中MVD計(jì)數(shù)相比,DDP組及ART組均明顯減低(均P0.05)。腫瘤組織中MVD計(jì)數(shù)呈腫瘤對(duì)照組ART組DDP組的總體趨勢(shì)。DDP組及ART組間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),除在第20d時(shí)ART組腫瘤組織中MVD計(jì)數(shù)較DDP組明顯增高(21.23±2.71v.s16.69±2.44,P0.05)。在腫瘤對(duì)照組、DDP組及ART組中,各組MVD計(jì)數(shù)呈10d20d30d40d的總體趨勢(shì),除腫瘤對(duì)照組在10d及20d中無(wú)顯差異(20.59±2.52v.s22.72±2.97,P0.05),ART組在20d及30d時(shí)無(wú)明顯差異(21.23±2.71v.s20.30±5.06,P0.05),其余各組間均差異顯著(均P0.05)。2 ART對(duì)小鼠移植瘤中VEGF和COX-2表達(dá)的影響2.1對(duì)小鼠移植瘤中VEGF表達(dá)情況的影響與腫瘤對(duì)照組第10天VEGF陽(yáng)性細(xì)胞百分率為(20.58%±3.28%)相比,DDP組明顯降低(14.89%±2.70%,P0.05),ART組無(wú)明顯變化(17.95%±2.02%,P0.05)。第20d、30d及40d時(shí),移植瘤中VEGF陽(yáng)性細(xì)胞百分率呈腫瘤對(duì)照組ART組DDP組的總體趨勢(shì),除30d時(shí),ART組與DDP組之間無(wú)明顯差異外(38.54%±7.10%v.s31.67%±3.84%,P0.05),其中各組之間均差異顯著(均P0.05)。ART組、DDP組及腫瘤對(duì)照組中VEGF陽(yáng)性細(xì)胞百分率均呈10d20d30d40d的總體趨勢(shì),除DDP組在第10d和20d時(shí)無(wú)明顯差異外(14.89%±2.70%v.s17.41%±4.89%,P0.05),其中各組之間均差異顯著(均P0.05)。在第10d及40d時(shí),移植瘤中VEGF表達(dá)GS值在各組中無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。第20d和30d時(shí),與腫瘤對(duì)照組GS值(124.55±1.44,121.67±5.39)相比,ART組明顯降低(118.14±5.33,111.24±6.42,P0.05),DDP組在第20d時(shí)明顯回升(132.98±3.49,P0.05),第30d時(shí)GS值略有降低(120.40±3.89,P0.05)。2.2對(duì)小鼠移植瘤中COX-2表達(dá)情況與腫瘤對(duì)照組第10天時(shí)COX-2陽(yáng)性細(xì)胞百分率(34.10%±6.79%)相比,DDP組明顯減低(16.92%±6.11%,P0.05),ART組無(wú)明顯變化(30.06%±5.28%,P0.05)。在第20d、30d及40d時(shí),移植瘤中COX-2陽(yáng)性細(xì)胞百分率呈腫瘤對(duì)照組ART組DDP組的總體趨勢(shì),除30d時(shí),ART組與DDP組之間無(wú)明顯差異外(53.83%±5.54%v.s45.76%±11.83%,P0.05),其余各組之間均差異顯著(均P0.05)。ART組、DDP組及腫瘤對(duì)照組中COX-2陽(yáng)性細(xì)胞百分率均呈10d20d30d40d的總體趨勢(shì)。除ART組在第10d、20d時(shí)(30.06%±5.28%v.s31.88%±6.72%,P0.05),及DDP組在第10d、20d時(shí)(16.92%±6.11%v.s19.32%±6.03%,P0.05)無(wú)明顯差異外,各組間均差異顯著(均P0.05)。與腫瘤對(duì)照組第10d時(shí)COX-2表達(dá)GS值(109.36±5.37)相比,DDP組明顯回升(118.67±3.82,P0.05),ART組無(wú)明顯變化(109.52±6.40,P0.05)。在第20d、30d及40d時(shí),移植瘤中COX-2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度在ART組、DDP組及腫瘤對(duì)照組中無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)。3小鼠移植瘤中VEGF、COX-2表達(dá)及MVD相關(guān)性分析小鼠腫瘤組織中VEGF及COX-2陽(yáng)性細(xì)胞百分率在不同時(shí)間均呈正相關(guān)(10d:r=0.526,P0.05;20d:r=0.599,P0.05;30d:r=0.859,P0.05;40d:r=0.951,P0.05)。VEGF陽(yáng)性細(xì)胞百分率與MVD計(jì)數(shù)之間在不同時(shí)間均呈正相關(guān)(10d:r=0.773,P0.05;20d:r=0.558,P0.05;30d:r=0.804,P0.05;40d:r=0.565,P0.05)。COX-2陽(yáng)性細(xì)胞百分率與MVD計(jì)數(shù)之間在除10d時(shí)均呈正相關(guān)(10d:r=0.339,P0.05;20d:r=0.615,P0.05;30d:r=0.595,P0.05;40d:r=0.563,P0.05)。結(jié)論:1青蒿琥酯抑制小鼠U14移植瘤生長(zhǎng)可能與抑制腫瘤組織中VEGF及COX-2的表達(dá)有關(guān)。2青蒿琥酯可顯著阻抑小鼠U14移植瘤中微血管生成,抑制腫瘤組織生長(zhǎng)。3 VEGF與COX-2在腫瘤組織中表達(dá)具有正相關(guān)關(guān)系。COX-2及VEGF與腫瘤組織中微血管生成具有相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：青蒿琥酯 宮頸癌 U14 移植瘤 COX-2 VEGF MVD
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫(xiě)13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-26
• 附表26-29
• 討論29-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述 青蒿素及其衍生物阻抑腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展36-47
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷48

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1082004