發(fā)布時間：2017-10-23 06:32

  本文關鍵詞：青蒿琥酯對宮頸癌U14細胞移植瘤VEGF及COX-2表達的影響

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【摘要】：目的:子宮頸癌為最常見的婦科惡性腫瘤之一,近年在發(fā)展中國家發(fā)病年齡有年輕化趨勢。通過手術及放化療的方法雖可改善早期宮頸癌預后,但對導致宮頸癌患者死亡的復發(fā)性、轉移性宮頸癌,其療效尚不理想。手術相對創(chuàng)傷較大而化療藥物長期大量應用可能導致毒性積累,副反應加重甚至化療藥物耐藥,因此尋找高效、無毒的抗腫瘤藥物成為研究熱點。血管生成是促血管形成因子和抑制因子協(xié)調作用的復雜過程,在創(chuàng)傷修復、生長發(fā)育及生殖中占據(jù)重要位置。血管內皮細胞生長因子(VEGF)及環(huán)氧合酶2(COX-2)是與腫瘤血管生成密切相關的細胞因子,參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。青蒿琥酯(ART)已證實對于肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、結腸癌、白血病、黑色素瘤、腎臟腫瘤等腫瘤細胞具有良好療效[1],且副作用小于傳統(tǒng)化療藥物。目前體外研究證實,青蒿琥酯可通過抑制腫瘤組織血管生成,從而抑制腫瘤生長。本實驗通過研究青蒿琥酯作用下宮頸癌U14移植瘤VEGF及COX-2的表達變化及其與微血管密度(MVD)的相關性,探究青蒿琥酯是否可通過抑制血管生成而發(fā)揮抗腫瘤效應。方法:1移植瘤動物模型的建立及實驗分組收集對數(shù)生長期U14細胞,調整濃度為1×10~7/ml,接種于小鼠腹腔(0.7ml/只),待3-5天后腹水形成,取腹水離心后,生理鹽水稀釋為5×10~7/ml,于雌性KM小鼠(5-6周齡,15-17g)左后肢近背部皮下接種0.2ml。成瘤且腫瘤直徑5mm進行后續(xù)實驗。將實驗動物隨機分為4組:1、正常對照組(未接種腫瘤,肌注生理鹽水1/日)2、腫瘤對照組(成瘤后,肌注生理鹽水1/日);3、ART組(成瘤后,肌注青蒿琥酯20mg/kg/d);4、DDP組(成瘤后,腹腔注射順鉑2mg/kg/d),各給藥0.2ml。每組80只,各組共給藥7日。后各組再次隨機分為4組,分別于第10d、20d、30d、40d處死,每組20只。2腫瘤組織中VEGF及COX-2表達情況及MVD計數(shù)的分析制備腫瘤組織石蠟切片,免疫組化染色后進行圖像分析,VEGF、COX-2表達強度以灰度值(GS)表示,數(shù)值大小與陽性細胞表達強度呈反比。以矩形走形計算200個細胞,計算各組陽性細胞表達百分率。光鏡下VEGF染色陽性細胞呈棕黃色,采用weidner等方法進行MVD量化分析。首先在低倍視野下掃視整個組織切片,在腫瘤浸潤區(qū)域選取內皮細胞染色分析、微血管數(shù)量密集的視野,隨機選取6個高倍視野,對微血管數(shù)計算,計算平均值作為MVD。任何棕黃色陽性內皮細胞或內皮細胞簇,只要與臨近腫瘤細胞、血管及其他結締組織分界清楚,即可作為1個微血管數(shù);腫瘤硬化取和大于8個紅細胞的血管不做計數(shù)對象。3統(tǒng)計學處理:對各組數(shù)據(jù)通過SPSS13.0版本軟件進行正態(tài)性、方差齊性檢驗,對VEGF、COX-2表達情況及MVD計數(shù)進行單因素方差分析(analysis of variance,ANOVA),對于不符合正態(tài)性或方差齊性檢驗者,采取K-independent samples秩和檢驗,SNK法進一步對多樣本均數(shù)進行兩兩比較。結果:1小鼠移植瘤中微血管生成情況與腫瘤對照組移植瘤中MVD計數(shù)相比,DDP組及ART組均明顯減低(均P0.05)。腫瘤組織中MVD計數(shù)呈腫瘤對照組ART組DDP組的總體趨勢。DDP組及ART組間無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05),除在第20d時ART組腫瘤組織中MVD計數(shù)較DDP組明顯增高(21.23±2.71v.s16.69±2.44,P0.05)。在腫瘤對照組、DDP組及ART組中,各組MVD計數(shù)呈10d20d30d40d的總體趨勢,除腫瘤對照組在10d及20d中無顯差異(20.59±2.52v.s22.72±2.97,P0.05),ART組在20d及30d時無明顯差異(21.23±2.71v.s20.30±5.06,P0.05),其余各組間均差異顯著(均P0.05)。2 ART對小鼠移植瘤中VEGF和COX-2表達的影響2.1對小鼠移植瘤中VEGF表達情況的影響與腫瘤對照組第10天VEGF陽性細胞百分率為(20.58%±3.28%)相比,DDP組明顯降低(14.89%±2.70%,P0.05),ART組無明顯變化(17.95%±2.02%,P0.05)。第20d、30d及40d時,移植瘤中VEGF陽性細胞百分率呈腫瘤對照組ART組DDP組的總體趨勢,除30d時,ART組與DDP組之間無明顯差異外(38.54%±7.10%v.s31.67%±3.84%,P0.05),其中各組之間均差異顯著(均P0.05)。ART組、DDP組及腫瘤對照組中VEGF陽性細胞百分率均呈10d20d30d40d的總體趨勢,除DDP組在第10d和20d時無明顯差異外(14.89%±2.70%v.s17.41%±4.89%,P0.05),其中各組之間均差異顯著(均P0.05)。在第10d及40d時,移植瘤中VEGF表達GS值在各組中無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05)。第20d和30d時,與腫瘤對照組GS值(124.55±1.44,121.67±5.39)相比,ART組明顯降低(118.14±5.33,111.24±6.42,P0.05),DDP組在第20d時明顯回升(132.98±3.49,P0.05),第30d時GS值略有降低(120.40±3.89,P0.05)。2.2對小鼠移植瘤中COX-2表達情況與腫瘤對照組第10天時COX-2陽性細胞百分率(34.10%±6.79%)相比,DDP組明顯減低(16.92%±6.11%,P0.05),ART組無明顯變化(30.06%±5.28%,P0.05)。在第20d、30d及40d時,移植瘤中COX-2陽性細胞百分率呈腫瘤對照組ART組DDP組的總體趨勢,除30d時,ART組與DDP組之間無明顯差異外(53.83%±5.54%v.s45.76%±11.83%,P0.05),其余各組之間均差異顯著(均P0.05)。ART組、DDP組及腫瘤對照組中COX-2陽性細胞百分率均呈10d20d30d40d的總體趨勢。除ART組在第10d、20d時(30.06%±5.28%v.s31.88%±6.72%,P0.05),及DDP組在第10d、20d時(16.92%±6.11%v.s19.32%±6.03%,P0.05)無明顯差異外,各組間均差異顯著(均P0.05)。與腫瘤對照組第10d時COX-2表達GS值(109.36±5.37)相比,DDP組明顯回升(118.67±3.82,P0.05),ART組無明顯變化(109.52±6.40,P0.05)。在第20d、30d及40d時,移植瘤中COX-2陽性細胞表達強度在ART組、DDP組及腫瘤對照組中無明顯統(tǒng)計學差異(均P0.05)。3小鼠移植瘤中VEGF、COX-2表達及MVD相關性分析小鼠腫瘤組織中VEGF及COX-2陽性細胞百分率在不同時間均呈正相關(10d:r=0.526,P0.05;20d:r=0.599,P0.05;30d:r=0.859,P0.05;40d:r=0.951,P0.05)。VEGF陽性細胞百分率與MVD計數(shù)之間在不同時間均呈正相關(10d:r=0.773,P0.05;20d:r=0.558,P0.05;30d:r=0.804,P0.05;40d:r=0.565,P0.05)。COX-2陽性細胞百分率與MVD計數(shù)之間在除10d時均呈正相關(10d:r=0.339,P0.05;20d:r=0.615,P0.05;30d:r=0.595,P0.05;40d:r=0.563,P0.05)。結論:1青蒿琥酯抑制小鼠U14移植瘤生長可能與抑制腫瘤組織中VEGF及COX-2的表達有關。2青蒿琥酯可顯著阻抑小鼠U14移植瘤中微血管生成,抑制腫瘤組織生長。3 VEGF與COX-2在腫瘤組織中表達具有正相關關系。COX-2及VEGF與腫瘤組織中微血管生成具有相關性。
【關鍵詞】：青蒿琥酯 宮頸癌 U14 移植瘤 COX-2 VEGF MVD
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-19
• 結果19-21
• 附圖21-26
• 附表26-29
• 討論29-32
• 結論32-33
• 參考文獻33-36
• 綜述 青蒿素及其衍生物阻抑腫瘤生長和轉移的研究進展36-47
• 參考文獻41-47
• 致謝47-48
• 個人簡歷48

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：1082004