本文關(guān)鍵詞：普洱茶聯(lián)合化療藥物的增敏及保護(hù)作用研究

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【摘要】：癌癥已成為人類健康的頭號威脅,嚴(yán)重的影響著人們的生活。而乳腺癌作為女性中最常見的腫瘤,給全球許多女性和家庭帶來了不安。世界范圍內(nèi),每年近50萬女性死于乳腺癌的數(shù)據(jù),也在警示著我們這種癌癥的危害性。而我國的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明,每年新增的乳腺癌病例數(shù)高居所有癌癥發(fā)病數(shù)的第二位,而隨著診斷技術(shù)的提高,這個(gè)數(shù)據(jù)仍會(huì)不斷升高。過去的半個(gè)多世紀(jì)里,化療藥物的發(fā)現(xiàn)、發(fā)展、改進(jìn)給無數(shù)的患者及家庭帶來希望,并在很大程度上改善了患者的生活質(zhì)量,延長了患者的壽命,成為臨床醫(yī)生很好的幫手。但化療藥物較多的副作用,如惡心、嘔吐、免疫力低下、心臟毒性、基因毒性等,同樣給患者帶來痛苦,因此也限制了其更好地為人類服務(wù)的本意。雖然科學(xué)家們和臨床醫(yī)生都想盡辦法的改進(jìn)、降低其副作用,但效果卻不甚理想。目前為止,化療藥物的副作用仍是醫(yī)生和患者面臨的重大挑戰(zhàn)。作為云南產(chǎn)量豐富的普洱茶,不僅有著悠久的飲用歷史,其多種保健功能也逐漸的被發(fā)現(xiàn)、應(yīng)用起來。近年來發(fā)現(xiàn)的其抗腫瘤、防癌的功效,更是吸引了大量研究人員和臨床醫(yī)生的注意。本實(shí)驗(yàn)室之前的研究發(fā)現(xiàn),普洱茶可以通過降低突變p53的表達(dá),來抑制攜帶突變p53的小鼠腫瘤細(xì)胞的生長,從而起到抑制腫瘤發(fā)展的作用。而普洱茶聯(lián)合化療藥物針對人腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞的研究相對有限,于是本課題以乳腺癌細(xì)胞系T47D、MDA-MB-468,乳腺正常上皮細(xì)胞MCF-10A,結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29為研究對象,研究普洱茶聯(lián)合化療藥物——阿霉素、順鉑、環(huán)磷酰胺、紫杉醇對這些細(xì)胞的作用。我們首先通過黃酰羅丹明B比色法檢測(Sulforhodamine B, SRB實(shí)驗(yàn))普洱茶聯(lián)合這些化療藥物對細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明,普洱茶聯(lián)合阿霉素后,不影響阿霉素對乳腺癌細(xì)胞系T47D、 MDA-MB-468、結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的殺傷作用,而能顯著改善阿霉素對正常細(xì)胞MCF-10A的毒害作用。同時(shí),我們在顯微鏡下觀察了普洱茶聯(lián)合阿霉素及阿霉素單獨(dú)處理MCF-10A細(xì)胞的增殖情況,也發(fā)現(xiàn)聯(lián)合處理后,存活的細(xì)胞數(shù)明顯的增多,表明聯(lián)合處理確實(shí)降低了阿霉素對正常細(xì)胞的殺傷。而對普洱茶聯(lián)合順鉑、環(huán)磷酰胺、紫杉醇的研究則表明,普洱茶對正常細(xì)胞MCF-10A則沒有明顯的保護(hù)作用。我們從分子水平上進(jìn)一步探討這種保護(hù)作用的機(jī)理。Western blot的結(jié)果表明普洱茶聯(lián)合阿霉素后,阿霉毒引起的凋亡信號通路中的蛋白：Caspase8、 Caspase3、PARP的切割均顯著減少。表明這種保護(hù)作用是通過降低阿霉素引起的細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn)。同時(shí),由于阿霉素是DNA毒性藥物,所以我們探索了DNA損傷信號通路的變化情況。如我們預(yù)料的一樣,普洱茶聯(lián)合阿霉素后DNA損傷的標(biāo)志γ-H2AX、p53及磷酸化p53(p-p53)的表達(dá)均顯著降低。這些結(jié)果表明,聯(lián)合處理后阿霉素對細(xì)胞DNA的損傷明顯降低。提示我們DNA損傷的降低可能也對這種保護(hù)起到一定作用。我們還采用了脈沖場凝膠電泳實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步證實(shí)DNA損傷的情況,結(jié)果與western blot的一致。由于懷疑到普洱茶可能會(huì)通過與阿霉素相互作用,從而影響阿霉素進(jìn)入細(xì)胞或者降低阿霉素對正常細(xì)胞的殺傷,所以我們設(shè)計(jì)了熒光實(shí)驗(yàn)來評價(jià)這種可能性。熒光實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,普洱茶未影響阿霉素進(jìn)入細(xì)胞。我們又試圖通過高效液相色譜層析技術(shù)(HPLC)來確認(rèn)兩者間的作用。但由于我們使用的藥物濃度低于HPLC檢測的限度,所以未能確認(rèn)兩者是否有相互作用。此外,我們還初步探索了普洱茶對攜帶突變p53的乳腺癌細(xì)胞T47D、結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29中突變p53表達(dá)情況的作用,未發(fā)現(xiàn)有明顯的影響。在對普洱茶中幾種成分槲皮素、EGCG、咖啡因、沒食子酸等聯(lián)合阿霉素處理MCF-10A的初步探索中,亦未發(fā)現(xiàn)其有保護(hù)作用,表明普洱茶聯(lián)合阿霉素后的保護(hù)作用可能是普洱茶中其他成分發(fā)揮的作用。綜上所述,普洱茶聯(lián)合阿霉素后可以降低阿霉素對正常細(xì)胞的毒害,而不影響阿霉素對腫瘤細(xì)胞的殺傷,且這種作用不是通過阻止阿霉素進(jìn)入細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)的,而是通過降低阿霉素引起的細(xì)胞凋亡及DNA損傷來實(shí)現(xiàn)的。普洱茶在聯(lián)合其他化療藥物時(shí),則沒有明顯的作用。該研究為利用普洱茶聯(lián)合阿霉素進(jìn)行后續(xù)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn),提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：普洱茶 化療藥物 細(xì)胞凋亡 DNA損傷
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-16
• 第一章 前言16-36
• 1.1 癌癥及乳腺癌現(xiàn)狀16-17
• 1.2 乳腺癌分類17-21
• 1.2.1 乳腺癌的臨床應(yīng)用分類17-19
• 1.2.2 乳腺癌的組織化學(xué)及分子生物學(xué)分類19-21
• 1.3 乳腺癌的治療21-25
• 1.3.1 手術(shù)治療與放射治療22
• 1.3.2 內(nèi)分泌治療22
• 1.3.3 分子靶向治療22-23
• 1.3.4 化學(xué)藥物治療23-25
• 1.4 p53與乳腺癌25-27
• 1.4.1 p53簡介25-26
• 1.4.2 p53在乳腺癌發(fā)生中的作用26
• 1.4.3 p53狀態(tài)的乳腺癌預(yù)后意義26-27
• 1.5 普洱茶27-34
• 1.5.1 普洱茶簡介27-28
• 1.5.2 普洱茶形成過程中的微生物28
• 1.5.3 普洱茶的化學(xué)成分28-30
• 1.5.4 普洱茶的功效30-34
• 1.6 本論文的研究意義34-36
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料36-50
• 2.1 細(xì)胞系36
• 2.2 實(shí)驗(yàn)所用主要儀器設(shè)備36-37
• 2.3 實(shí)驗(yàn)所用主要耗材及試劑37-40
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)耗材37-38
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)所用主要試劑38-40
• 2.4 各種試劑的配制方法40-50
• 第三章 實(shí)驗(yàn)方法50-62
• 3.1 蛋白免疫印跡(western blot)50-55
• 3.1.1 總蛋白提取50
• 3.1.2 蛋白定量50-51
• 3.1.3 SDS-PAGE電泳體系配制51
• 3.1.4 SDS-PAGE電泳51-53
• 3.1.5 Western Blot——轉(zhuǎn)膜53
• 3.1.6 封閉53
• 3.1.7 一抗孵育53-54
• 3.1.8 二抗孵育54
• 3.1.9 顯影54
• 3.1.10 抗體的剝離54-55
• 3.2 細(xì)胞培養(yǎng)55-57
• 3.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇55
• 3.2.2 細(xì)胞傳代55-56
• 3.2.3 細(xì)胞凍存56-57
• 3.3 細(xì)胞收集57-58
• 3.4 SRB法檢測細(xì)胞增殖58-59
• 3.5 脈沖場凝膠電泳實(shí)驗(yàn)(Pulsed-field gel electrophoresis)59-60
• 3.6 熒光實(shí)驗(yàn)60-61
• 3.7 高效液相色譜實(shí)驗(yàn)(HPLC)61-62
• 第四章 結(jié)果與討論62-80
• 4.1 普洱茶聯(lián)合阿霉素對乳腺癌細(xì)胞系、結(jié)腸癌細(xì)胞及正常乳腺上皮細(xì)胞的影響62-64
• 4.2 普洱茶聯(lián)合順鉑、紫杉醇、環(huán)磷酰胺等對腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞的作用64-66
• 4.3 顯微鏡下觀察阿霉素、普洱茶、及聯(lián)合處理正常乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A的結(jié)果66-68
• 4.4 普洱茶聯(lián)合阿霉素后起到的對正常細(xì)胞的保護(hù)作用是通過降低阿霉素引起的細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn)的68-69
• 4.5 普洱茶聯(lián)合阿霉素后起到的對正常細(xì)胞的保護(hù)作用是通過減少阿霉素引起的細(xì)胞DNA的損傷來實(shí)現(xiàn)的69-71
• 4.6 脈沖場電泳實(shí)驗(yàn)也表明普洱茶聯(lián)合阿霉素后起到的對正常細(xì)胞的保護(hù)作用是通過減少阿霉素引起的細(xì)胞DNA的損傷來實(shí)現(xiàn)的71-72
• 4.7 熒光實(shí)驗(yàn)表明普洱茶并未影響阿霉素進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮作用72-73
• 4.8 高效液相色譜實(shí)驗(yàn)檢測普洱茶與阿霉素混合后的相互作用情況73-75
• 4.9 普洱茶未見對腫瘤細(xì)胞系內(nèi)突變p53的表達(dá)有明顯的影響75-76
• 4.10 槲皮素、EGCG、咖啡因、沒食子酸等聯(lián)合阿霉素后未見有明顯保護(hù)作用76-80
• 第五章 總結(jié)與展望80-82
• 5.1 總結(jié)80
• 5.2 展望80-82
• 致謝82-84
• 參考文獻(xiàn)84-90
• 附錄A 碩士期間發(fā)表的論文90

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 龔加順;陳文品;周紅杰;董兆君;張以芳;;云南普洱茶特征成分的功能與毒理學(xué)評價(jià)[J];茶葉科學(xué);2007年03期

2 婁瑩;黃韜;;乳腺癌靶向治療進(jìn)展[J];腫瘤學(xué)雜志;2009年09期

3 梁名志;夏麗飛;陳林波;方成剛;段志芬;陳繼偉;楊盛美;孫榮琴;;普洱茶渥堆發(fā)酵過程中理化指標(biāo)的變化研究[J];中國農(nóng)學(xué)通報(bào);2006年10期

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本文編號：1075764