本文關(guān)鍵詞：靶向沉默RACK1基因?qū)Ψ蜗侔〢549細(xì)胞化療敏感性的影響

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【摘要】：目的:研究靶向沉默RACK1基因?qū)Ψ蜗侔〢549細(xì)胞化療藥物敏感性的影響,探討其可能的作用機(jī)制。方法:設(shè)計(jì)并合成靶向沉默RACK1基因的sh RNA序列。實(shí)驗(yàn)分組為RACK1-sh RNA(實(shí)驗(yàn)組)、Vector-sh RNA(空載質(zhì)粒組)和Control(空白對(duì)照組)三組。采用脂質(zhì)體(Lipofectamine 2000)轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)方法,將靶向沉默RACK1基因的sh RNA序列轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞,然后進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):(1)在熒光倒置顯微鏡下觀察A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況。(2)Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞中RACK1蛋白的表達(dá)。(3)MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞對(duì)順鉑、吉西他濱、培美曲塞和紫杉醇四種不同類型化療藥物敏感性的影響。(4)Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞中肺耐藥蛋白(LRP)和多藥耐藥蛋白(MRP)的表達(dá)。結(jié)果:1將轉(zhuǎn)染24h后的A549細(xì)胞在熒光倒置顯微鏡下觀察,在A549細(xì)胞中出現(xiàn)綠色熒光,說明轉(zhuǎn)染成功;2轉(zhuǎn)染36h后,Western blot法檢測(cè)RACK1-sh RNA組RACK1蛋白的相對(duì)表達(dá)量為:0.267±0.47,明顯低于Vector-sh RNA組(相對(duì)表達(dá)量為0.821±0.109)及Control組(相對(duì)表達(dá)量為0.842±0.060),與Vector-sh RNA組及Control組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=54.438,p0.05),Vector-sh RNA組與Control組相比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);3 MTT法檢測(cè)示RACK1-sh RNA組細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制,該組A549細(xì)胞對(duì)順鉑及紫杉醇的敏感性明顯增加。順鉑、紫杉醇在36h、72h檢測(cè)時(shí)對(duì)RACK1-sh RNA組A549細(xì)胞的抑制率顯著增高,與Vector-sh RNA和Control組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F順鉑36h=6.628,F紫杉醇36h=7.291,均p0.05;F順鉑72h=7.560,F紫杉醇72h=25.132,均p0.05);4 Western blot結(jié)果顯示,RACK1-sh RNA組別A549細(xì)胞中相關(guān)耐藥蛋白LRP和MRP的相對(duì)表達(dá)量為分別:0.163±0.056、0.246±0.050,與Vector-sh RNA組(0.420±0.080、0.644±0.057)及對(duì)照組(0.444±0.041、0.617±0.031)相比表達(dá)量均下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(FLRP=19.430、FMRP=61.548,均p0.05)。結(jié)論:靶向沉默RACK1基因可提高A549細(xì)胞對(duì)鉑類和紫杉醇類化療藥物的敏感性,其作用可能是通過下調(diào)LRP及MRP的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：肺腺癌A549細(xì)胞 RACK1基因 RNA干擾 LRP MRP
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表9-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器12-14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法14-22
• 2 結(jié)果22-28
• 2.1 A549 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況觀察22
• 2.2 RACK-1 蛋白的表達(dá)檢測(cè)22-23
• 2.3 靶向沉默A549 細(xì)胞中RACK-1 基因后對(duì)化療藥物敏感性的影響23-27
• 2.4 靶向沉默A549 細(xì)胞中RACK1 基因后對(duì)LRP和MRP表達(dá)的影響27-28
• 3 討論28-32
• 4 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-39
• 綜述39-53
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 致謝53-54
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果54-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 朱薇;賀修勝;肖志強(qiáng);易紅;姜浩;;RACK1在大腸癌癌變過程中的表達(dá)和意義[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2013年01期

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本文編號(hào)：1068665