本文關(guān)鍵詞：MicroRNA214在晚期下咽鱗癌中的表達(dá)及作用機制的研究

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【摘要】：背景微小RNA (MicroRNA, miRNA)是由21-23個核苷酸組成的內(nèi)源性小的非編碼RNA,通過抑制基因翻譯或使RNA轉(zhuǎn)錄子裂解來調(diào)控蛋白的表達(dá)。越來越多的研究表明miRNA在多種人體腫瘤中異常表達(dá),并且在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。與其他頭頸部鱗狀細(xì)胞癌相比,下咽鱗癌的預(yù)后較差,5年生存率約為25%一40%,預(yù)后較差的原因有就診時已達(dá)晚期、局部復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。盡管手術(shù)治療、放化療等治療手段已取得進(jìn)展,下咽鱗癌患者的生存率并無明顯提高。因此,充分了解下咽鱗癌的分子致癌機制對提高疾病的診斷、治療和預(yù)后都有重要意義。目的1、檢測miR-214在晚期下咽鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)。2、探討miR-214對FaDu細(xì)胞侵襲遷移能力及增值克隆的影響。3、初步探討miR-214影響FaDu細(xì)胞侵襲遷移能力的作用機制。方法利用qRT-PCR技術(shù)檢測30例晚期下咽鱗癌患者腫瘤組織及正常粘膜組織中miR-214的表達(dá)；通過轉(zhuǎn)染過表達(dá)載體hsa-mir-214上調(diào)FaDu細(xì)胞中miR-214的表達(dá)；采用Transwell侵襲、遷移實驗和平板克隆實驗,分別檢測miR-214表達(dá)上調(diào)后對FaDu細(xì)胞侵襲、遷移及克隆形成能力的影響；利用Western blot檢測上調(diào)miR-214表達(dá)對TWIST蛋白表達(dá)的影響；運用雙熒光素酶實驗檢測TWIST是否為miR-214的直接作用靶基因。結(jié)果1、miR-214在晚期下咽鱗癌組織中的表達(dá)(0.311±0.206)明顯低于下咽正常粘膜組織中的表達(dá)(1.620±1.394),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.09,P0.05)。2、實驗組FaDu細(xì)胞轉(zhuǎn)染hsa-mir-214后,miR-214的表達(dá)較陰性對照組明顯上調(diào)(t=6.347,P0.05)。3、Transwell遷移和侵襲實驗顯示,實驗組FaDu細(xì)胞遷移能力及侵襲能力均明顯低于對照組(t=11.6,P0.01；t=6.499,P0.05)。4、平板克隆實驗顯示,實驗組與對照組相比,平均克隆形成數(shù)及克隆形成率均無明顯差異(t=0.592,P0.05),miR-214對FaDu細(xì)胞增殖能力無明顯影響。5、Western blot結(jié)果顯示,miR-214上調(diào)后的實驗組細(xì)胞Twist蛋白的表達(dá)明顯低于對照組細(xì)胞中的表達(dá)(t=6.545,P0.05)。6、雙熒光素酶實驗結(jié)果顯示,實驗組與對照組相比,螢火蟲熒光的相對表達(dá)量無明顯降低,證明TWIST不是miR-214的直接作用靶基因。結(jié)論1、miR-214在晚期下咽鱗癌組織中低表達(dá)。2、miR-214可明顯抑制FaDu細(xì)胞的侵襲、遷移能力,其作用機制與抑制TWIST蛋白表達(dá)有關(guān),但TWIST不是miR-214的直接作用靶基因。3、miR-214對FaDu細(xì)胞增殖能力無明顯影響。
【關(guān)鍵詞】：下咽腫瘤 微小RNA-214 TWIST 腫瘤浸潤
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號說明10-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-26
• 結(jié)果26-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31-32
• 附錄附圖表32-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述42-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文53-54
• 附件54

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本文編號：1067250