本文關(guān)鍵詞：MiR-335對MDA-MB-231乳腺癌細胞生物學特性的影響及其與C-met靶向關(guān)系的驗證

  更多相關(guān)文章： miR-335 乳腺癌 增殖 遷移 c-Met

【摘要】：Micro RNAs(mi RNAs)是一組內(nèi)源性基因表達調(diào)控因子,自發(fā)現(xiàn)至今,已經(jīng)成為腫瘤研究領(lǐng)域的新熱點。隨著生物信息學和分子生物學技術(shù)的不斷發(fā)展,部分mi RNAs的功能也逐漸得到確認。研究發(fā)現(xiàn)一部分異常表達的mi RNAs與乳腺癌的遠處轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系,其中mi R-335(micro RNA-335)表達缺失,提示預后不良。故本論文主要研究mi R-335對具有高轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細胞株MDA-MB-231的生物學特性的影響及其與預測靶基因C-met靶向關(guān)系的驗證。第一部分Mi R-335對MDA-MB-231乳腺癌細胞生物學特性的影響目的:檢測mi R-335在乳腺癌細胞系BT474、T47D、MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231和正常乳腺上皮細胞MCF-10A中的表達以及在原發(fā)性乳腺癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性乳腺癌組織中的表達情況,進一步研究mi R-335對MDA-MB-231細胞增殖、凋亡及遷移能力的影響。方法:采用熒光實時定量PCR檢測mi R-335在乳腺癌細胞系BT474、T47D、MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231和正常乳腺上皮細胞MCF-10A中的表達情況以及在原發(fā)性乳腺癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性乳腺癌組織中的表達情況。體外培養(yǎng)MDA-MB-231細胞并將其分3組,分別為mi R-335組、陰性對照組和空白對照組。mi R-335組轉(zhuǎn)染mi R-335模擬物(has-mi R-335 mimics),陰性對照組轉(zhuǎn)染陰性對照序列(negative control,NC),空白對照組細胞不行任何轉(zhuǎn)染。通過MTT實驗檢測過表達mi R-335對細胞增殖能力的影響;流式細胞儀檢測過表達mi R-335對細胞凋亡的影響;Transwell實驗檢測過表達mi R-335對細胞遷移能力的影響。Western blot檢測MMP-2和MMP-9的蛋白表達情況。結(jié)果:各乳腺癌細胞系中mi R-335表達水平均低于正常乳腺上皮細胞MCF-10A,MDA-MB-231細胞中最低(P0.01)。在隨機配對的10例原發(fā)性乳腺癌和10例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性乳腺癌標本中,有7例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性乳腺癌中Mi R-335的表達低于對應(yīng)的原發(fā)性乳腺癌(P0.05)。過表達mi R-335對乳腺癌細胞MDA-MB-231增殖、凋亡無明顯影響(P0.05),但能顯著抑制細胞的遷移能力(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示:mi R-335組MMP-2和MMP-9的蛋白的表達量均低于陰性對照組和空白對照組。結(jié)論:mi R-335在高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細胞系和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性乳腺癌組織中明顯低表達,過表達mi R-335對MDA-MB-231細胞的增殖、凋亡無明顯影響卻抑制MDA-MB-231細胞的遷移能力。mi R-335可能通過下調(diào)MMP2和MMP9的表達從而抑制MDA-MB-231細胞遷移。第二部分mi R-335與C-met靶向關(guān)系的驗證目的:通過對Mi R-335與C-met靶向關(guān)系的驗證進一步研究其在乳腺癌細胞中具體作用機制。方法:Pic Tar(www.pictar.org)、Targetscan數(shù)據(jù)庫(www.target scan.org)預測mi R-335可能靶基因。熒光定量PCR及WB檢測mi R-335、c-Met在乳腺癌各細胞系和正常乳腺上皮細胞中的表達。構(gòu)建靶基因熒光報告載體,BT20、MDA-MB-231細胞共轉(zhuǎn)染野生型c-Met 3’UTR熒光素酶報告載體、突變型c-Met 3’UTR熒光素酶報告載體和mi R-335 mimics、mimics control,轉(zhuǎn)染后分別分為c-Met 3’UTR-wt組和c-Met 3’UTR-mut組并經(jīng)熒光素酶報告基因檢測測定活性,BT20、MDA-MB-231細胞分別轉(zhuǎn)染mi R-335 mimics、mimics control和m i R-335 ASO、ASO control后通過Western blot蛋白水平檢測評估cMet表達情況。結(jié)果:Targetscan數(shù)據(jù)庫預測顯示C-Met的3’UTR區(qū)存在mi R-335的可能結(jié)合位點。熒光定量PCR及WB結(jié)果顯示:各乳腺癌細胞系中,c-Met在BT-20、MDA-MB-231細胞中的蛋白表達水平明顯升高,而在正常乳腺上皮細胞MCF-10A和其他乳腺癌細胞系中蛋白表達水平相對較低。相反,mi R-335在BT-20、MDA-MB-231細胞中的RNA表達水平降低,在正常乳腺上皮細胞MCF-10A和其他乳腺癌細胞系中RNA表達水平升高。熒光素酶報告基因檢測結(jié)果顯示:BT-20、MDA-MB-231細胞中,c-Met 3’UTR-wt組中轉(zhuǎn)染mi R-335 mimics的細胞較轉(zhuǎn)染mimics control的細胞相對熒光強度明顯降低,c-Met 3’UTR-mut組中轉(zhuǎn)染mi R-335 mimics的細胞與轉(zhuǎn)染mimics control的細胞相對熒光強度無明顯變化。Western blot結(jié)果顯示mi R-335 mimics組較mimics control組蛋白表達水平降低,mi R-335 ASO組較ASO control組蛋白表達水平升高。結(jié)論:乳腺癌各細胞系中mi R-335 m RNA水平表達和c-Met蛋白水平表達呈負相關(guān),mi R-335能夠與c-Met m RNA 3’UTR區(qū)特異性結(jié)合并抑制其表達,mi R-335在翻譯后修飾水平調(diào)控c-Met的表達。綜上所述,本實驗通過生物信息學及細胞生物學技術(shù)驗證了mi R-335與c-Met的靶向關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：miR-335 乳腺癌 增殖 遷移 c-Met
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 第一部分：Mi R-335 對MDA-MB-231 乳腺癌細胞生物學特性的影響17-34
• 1 材料與方法17-26
• 2 結(jié)果26-32
• 3 討論32-34
• 第二部分：mi R-335 與C-met靶向關(guān)系的驗證34-49
• 1 材料與方法34-43
• 2 結(jié)果43-47
• 3 討論47-49
• 全文總結(jié)49-50
• 參考文獻50-53
• 文獻綜述53-62
• 參考文獻59-62
• 致謝62-63
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文63

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國華;乳腺癌相關(guān)標志物的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細胞[J];上海生物醫(yī)學工程;2005年04期

8 田富國;郭向陽;張華一;;乳腺癌診治研究新進展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌的臨床研究進展[J];國外醫(yī)學(外科學分冊);2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進展[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2005年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國免疫學會第四屆學術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學術(shù)交流會論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會健;;乳腺癌治療靶標的研究進展[A];北方遺傳資源的保護與利用研討會論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細胞的生長及誘導凋亡的機制研究[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

5 劉愛國;胡冰;;乳腺癌臨床治療進展[A];安徽省抗癌協(xié)會第四次代表大會暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會成立會議、安徽省腫瘤防治進展學術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠景[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學術(shù)會議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進展[A];山西省抗癌協(xié)會第六屆腫瘤學術(shù)交流會論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國腫瘤學術(shù)大會教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽;王兆鉞;阮長耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細胞中的表達研究[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細胞擴散基因被找到[N];科技日報;2007年

3 中國軍事醫(yī)學科學院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國婦女報;2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補可消滅乳腺癌細胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個時期不一樣[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

6 辛君;乳腺癌擴散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細胞生長的分子[N];科技日報;2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日報;2011年

9 王樂　沈基飛;我科學家發(fā)現(xiàn)導致乳腺癌耐藥的新標志物[N];科技日報;2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學行為及其藥物干預研究[D];武漢大學;2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細胞的分化并影響乳腺癌的預后[D];復旦大學;2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測及其功能論證[D];復旦大學;2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強表皮生長因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學;2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導乳腺癌細胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機制研究[D];東北師范大學;2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細胞樣乳腺癌細胞機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細胞EMT的分子機制研究[D];東北師范大學;2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲θ橄侔﹨f(xié)同殺傷作用的分子機制研究[D];延邊大學;2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對其生物學行為的影響[D];延邊大學;2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點[D];鄭州大學;2011年

2 單系金;Mfn2磷酸化修飾對其調(diào)控乳腺癌細胞增殖功能的重要性的研究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

3 徐晶;缺氧對乳腺癌細胞miR-210表達及侵襲能力的影響[D];河北聯(lián)合大學;2014年

4 李麗;Mfn2對乳腺癌細胞MCF-7侵襲遷移能力的影響及機制探究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

5 楊洋;醌氧化還原酶及其抑制劑在乳腺癌增殖與遷移中的作用研究[D];延邊大學;2015年

6 張秀娟;免疫組化與熒光原位雜交檢測乳腺癌Her-2表達的對比研究及17號染色多體對檢測結(jié)果的影響[D];泰山醫(yī)學院;2014年

7 韓晶;納米脂質(zhì)體多西他賽抑制乳腺癌細胞增殖降低骨髓毒性的機制[D];安徽大學;2015年

8 鐘顯峰;乳腺癌的分子亞型與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究[D];泰山醫(yī)學院;2014年

9 張碩穩(wěn);MTDH、IκB、NF-κB P65在乳腺癌組織中的表達及意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 謝少利;RNAi阻低UBE3A后對乳腺癌細胞MDA-MB-231生物學行為的影響及其機制研究[D];川北醫(yī)學院;2015年

，

本文編號：1066679