本文關鍵詞：Amygdalin對抗谷氨酰胺剝奪誘導的肝癌細胞HepG2凋亡及其抗氧化機制的研究

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【摘要】：Amygdalin作為天然藥物，具有豐富的藥用價值特別是具有抗腫瘤的功效，但Amygdalin抗氧化的生物學作用研究尚未見有報道，本文首次用生物學實驗證明了Amygdalin的抗氧化作用。剝奪谷氨酰胺可以使HepG2細胞內(nèi)活性氧（ROS）堆積，從而導致細胞凋亡。Amygdalin在小劑量的條件下可以降低HepG2細胞內(nèi)谷氨酰胺引起的ROS的堆積，通過其抗氧化作用對抗HepG2剝奪谷氨酰胺導致的細胞凋亡，而大劑量的Amygdalin無此作用。 通過MTT實驗檢測HepG2細胞在無谷氨酰胺的DMEM培養(yǎng)時加入不同劑量Amygdalin對細胞活力的影響，AnnexinⅤ-FITC/PI雙染流式細胞儀檢測無谷氨酰胺時，Amygdalin對細胞凋亡的影響，RT-PCR進一步檢測促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2mRNA水平的表達。結果表明無谷氨酰胺時細胞的活力降低，凋亡比率增加，Bax/Bcl-2比值增加。而加入0.5mg/ml Amygdalin后細胞的活力增加，凋亡比率降低，Bax/Bcl-2比值降低，但5mg/mlAmygdalin與無谷氨酰胺組相比活力降低，Bax/Bcl-2比值增加。Amygdalin在0.5mg/ml的劑量可以對抗谷氨酰胺剝奪導致的HepG2細胞凋亡，，而5mg/mlAmygdalin無此作用。 為探討Amygdalin對抗谷氨酰胺剝奪導致的HepG2細胞凋亡機制我們又進行了如下實驗：有無谷氨酰胺時Amygdalin對HepG2細胞內(nèi)羥自由基的影響；DCFH-DA探針檢測，熒光顯微鏡觀察和流式細胞儀檢測無谷氨酰胺時Amygdalin對HepG2細胞內(nèi)ROS的影響；RT-PCR和Western blot檢測無谷氨酰胺時Amygdalin對HepG2細胞內(nèi)抗氧化酶mRNA和蛋白水平的影響并進一步檢測酶活力。通過實驗證明0.5mg/mlAmygdalin可以降低谷氨酰胺引起的細胞內(nèi)的ROS而對抗細胞凋亡，而大劑量的Amygdalin則無此作用。無谷氨酰胺時，0.5mg/ml Amygdalin可以上調(diào)HepG2細胞內(nèi)抗氧化酶SOD1和CAT mRNA和蛋白水平和CAT酶活力，加入CAT的抑制劑ATM后，Amygdalin對抗Gln剝奪誘導的HepG2細胞凋亡作用消失。 Amygdalin分子由一單元苯甲醛，一單元氫氰酸和兩單元葡萄糖組成，其分解產(chǎn)物苯甲醛及進一步氧化的產(chǎn)物苯甲酸具有抗氧化的化學結構，這可能是Amygdalin抗氧化的另一個潛在機制。我們在無細胞體系中用Amygdalin，Amygdalin和β-葡萄糖苷酶共同孵育，苯甲醛和苯甲酸進行了羥自由基生成試驗。研究發(fā)現(xiàn)Amygdalin本身和苯甲醛不能抑制羥自由基的生成，在細胞內(nèi)Amygdalin是否可以通過其分解產(chǎn)物苯甲酸發(fā)揮抗氧化機制有待進一步研究。
【關鍵詞】：Amygdalin 抗氧化 谷氨酰胺 活性氧 凋亡
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮寫詞表11-12
• 第1章 緒論12-24
• 1.1 Amygdalin 及其生物學作用12-19
• 1.1.1 Amygdalin 的分解12-13
• 1.1.2 Amygdalin 分解產(chǎn)物的毒性13
• 1.1.3 Amygdalin 的藥理學作用13-15
• 1.1.4 Amygdalin 抗腫瘤作用的爭議15-17
• 1.1.5 Amygdalin 的抗腫瘤作用17-19
• 1.2 活性氧與腫瘤19-22
• 1.2.1 活性氧的產(chǎn)生及生理作用19-20
• 1.2.2 活性氧與腫瘤的發(fā)生發(fā)展20-21
• 1.2.3 活性氧與腫瘤細胞凋亡21-22
• 1.3 谷氨酰胺與腫瘤22-23
• 1.3.1 谷氨酰胺及其生理功能22
• 1.3.2 谷氨酰胺與腫瘤22-23
• 1.4 抗氧化與腫瘤23-24
• 第2章 Amygdalin 對抗谷氨酰胺(Gln)剝奪誘導的肝癌細胞HepG2 凋亡及其機制的研究24-38
• 2.1 實驗器材24-26
• 2.1.1 主要儀器24-25
• 2.1.2 主要試劑配制25-26
• 2.1.3 細胞株來源26
• 2.2 實驗方法26-37
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)26
• 2.2.2 MTT 檢測 Amygdalin 對有無 Gln 的培養(yǎng)液培養(yǎng)的HepG2 細胞的毒性作用26-27
• 2.2.3 AnnexinⅤ-FITC/PI 雙染檢測 Amygdalin 對 HepG2 的凋亡的影響27-28
• 2.2.4 羥自由基檢測28-29
• 2.2.5 超氧化物歧化酶活力的測定29-31
• 2.2.6 過氧化氫酶（CAT）活力的測定31-32
• 2.2.7 細胞 ROS 水平檢測32-33
• 2.2.8 RT-PCR33-35
• 2.2.9 Westrn blot 檢測蛋白表達水平35-37
• 2.3 統(tǒng)計學處理37-38
• 第3章 實驗結果38-55
• 3.1 Amygdalin 對抗谷氨酰胺(Gln)剝奪誘導的肝癌細胞HepG2 凋亡的研究38-41
• 3.1.1 MTT 檢測無 Gln 時 Amygdalin 對 HepG2 細胞活力的影響38
• 3.1.2 AnnexinⅤ-FITC/PI 雙染檢測無 Gln 時 Amygdalin 對HepG2 細胞凋亡的影響38-39
• 3.1.3 RT-PCR 檢測無 Gln 時 Amygdalin 對 HepG2 細胞內(nèi)Bax 和 Bcl-2 mRNA 水平的影響39-41
• 3.2 Amygdalin 對抗谷氨酰胺(Gln)剝奪誘導的肝癌細胞HepG2 凋亡機制的研究41-44
• 3.2.1 Amygdalin 在細胞內(nèi)的抗氧化作用41-44
• 3.3 Amygdalin 對 HepG2 細胞內(nèi)抗氧化酶的影響44-52
• 3.3.1 RT-PCR 檢測無 Gln 時 Amygdalin 對 HepG2 細胞內(nèi)抗氧化酶 mRNA 水平的影響44-46
• 3.3.2 Western Blot 檢測無 Gln 時 Amygdalin 對 HepG2 細胞內(nèi)抗氧化酶蛋白水平的影響46-49
• 3.3.3 檢測無 Gln 時 Amygdalin 對 HepG2 細胞內(nèi)抗氧化酶SOD 和 CAT 酶活力的影響49-50
• 3.3.4 加入 CAT 抑制劑 3-氨基-1.2.4-三唑（ATM）檢測無 Gln 時 Amygdalin 對HepG2 細胞凋亡的影響50-52
• 3.4 Amygdalin 的體外抗氧化分析52-55
• 3.4.1 檢測 Amygdalin 對羥自由基生成的影響52-53
• 3.4.2 檢測 Amygdalin 和β-葡萄糖苷酶共同孵育后對羥自由基生成的影響53
• 3.4.3 檢測苯甲醛和苯甲酸對羥自由基生成的影響53-55
• 第4章 討論55-58
• 第5章 結論58-59
• 參考文獻59-64
• 個人簡介64-65
• 致謝65

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李龍秀;韓春梅;;苯甲酸對蘿卜種子萌發(fā)及抗氧化酶活性的影響[J];園藝與種苗;2011年02期

2 董捷;尹策;張紅城;李春陽;陳翠麗;;杏花花粉中苦杏仁苷的抗氧化性研究[J];食品科學;2007年08期

本文編號：1058471