本文關(guān)鍵詞：新城疫病毒D90毒株抑制人胃癌BGC-823細(xì)胞的體內(nèi)外研究

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【摘要】：胃癌是發(fā)展中國家主要的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，也是世界范圍內(nèi)最常見的因癌癥導(dǎo)致死亡的腫瘤之一。通常，，對于合并有散播或者轉(zhuǎn)移病變的患者，外科手術(shù)或系統(tǒng)化療帶來的生存優(yōu)勢是有限的。目前研究認(rèn)為，利用病毒進(jìn)行溶瘤治療是一種很有前途的腫瘤治療方式。許多病毒被發(fā)現(xiàn)具有溶瘤作用。例如腺病毒、狂犬病病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、單純皰疹病毒、甲型流感病毒、麻疹病毒和新城疫病毒。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）是一種重要的溶瘤病毒。NDV是一種家禽病毒，屬副粘液病毒，對禽類具有高度的致病性，可以引起禽類的新城疫，被認(rèn)為是重要的溶瘤病毒之一。NDV可有選擇性地在腫瘤細(xì)胞中增殖并起到特異殺傷作用，不能在人正常細(xì)胞中復(fù)制，只能在特定腫瘤細(xì)胞中增殖。除了輕微的流感樣癥狀和結(jié)膜炎，對人基本無致病性，具有較好的安全性。某些臨床試驗(yàn)證明雞新城疫病毒是一種高效、安全的治療腫瘤的試劑。目前研究可用于治療人類腫瘤的NDV包括MTH68/H、PV-701、73-T和HUJ。NDV-D90毒株是新分離得到的新城疫病毒，對癌細(xì)胞具有快速、高效殺傷的能力。 本研究通過檢測NDV-D90病毒在BGC-823細(xì)胞上清中的效價(jià)，分析NDV-D90在胃癌BGC-823細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)增能力。檢測不同MOI值的NDV-D90對人胃癌BGC-823細(xì)胞株的細(xì)胞毒性分析NDV-D90毒株對胃癌BGC-823細(xì)胞生長的影響和MOI的變化對BGC-823細(xì)胞殺傷能力的變化。利用流式細(xì)胞術(shù)，分析NDV-D90對胃癌BGC-823細(xì)胞凋亡的作用影響。腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)分析NDV-D90抑制胃癌BGC-823細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力。用慢病毒載體GV260構(gòu)建一株帶有熒光素酶標(biāo)記的BGC-823細(xì)胞，命名為BGC-823-luci。用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)比較分析NDV-D90對BGC-823和BGC-823-luci的殺傷能力的差異。用BGC-823-luci細(xì)胞構(gòu)建裸鼠胃癌移植瘤模型。實(shí)驗(yàn)組移植瘤注射NDV-D90，對照組移植瘤注射PBS，利用發(fā)光分子成像技術(shù)評(píng)價(jià)分析實(shí)驗(yàn)組和對照組熒光信號(hào)。取實(shí)驗(yàn)組和對照腫瘤組織，用HE染色分析裸鼠體內(nèi)的腫瘤壞死情況。結(jié)果顯示NDV-D90在人胃癌BGC-823細(xì)胞的增殖能力很強(qiáng)，在感染后為60h時(shí)最大值達(dá)到1010TCID50/0.1ml。NDV-D90對人胃癌BGC-823細(xì)胞具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用，最大殺傷率達(dá)到80%以上且MOI越高，細(xì)胞的死亡率越高，細(xì)胞死亡出現(xiàn)的也越快。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示NDV-D90在MOI為1感染時(shí)間為72h時(shí)，細(xì)胞的死亡率最大，達(dá)到79%，細(xì)胞凋亡隨著感染時(shí)間的增長和MOI值的增大而加快。胃癌移植瘤體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射NDV移植瘤的體積明顯小于對照組。小動(dòng)物活體成像也顯示注射病毒腫瘤組織的體積和熒光信號(hào)明顯小于注射PBS腫瘤體積。 HE染色結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組腫瘤組織出現(xiàn)大面積壞死，對照組生長狀態(tài)良好。NDV-DN90對胃癌BGC-823細(xì)胞在體內(nèi)外都有很好的抑制作用，可能成為一種溶瘤制劑。
【關(guān)鍵詞】：新城疫病毒D90毒株 胃癌BGC-823細(xì)胞系 凋亡 壞死
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 符號(hào)說明8-12
• 第一章 引言12-22
• 1.1 胃癌的治療現(xiàn)狀12-13
• 1.2 溶瘤病毒的種類13-15
• 1.3 新城疫病毒及新城疫病毒的結(jié)構(gòu)15-16
• 1.4 新城疫病毒治療腫瘤的研究進(jìn)展16-17
• 1.5 新城疫病毒抑制腫瘤的種類17-18
• 1.6 新城疫病毒溶瘤作用的機(jī)制18-19
• 1.7 可見光活體成像技術(shù)19-20
• 1.8 研究的目的及意義20-22
• 第二章 NDV-D90 對 BGC-823 細(xì)胞抑制作用的體外實(shí)驗(yàn)22-38
• 2.1 材料22-23
• 2.1.1 病毒、細(xì)胞22
• 2.1.2 主要試劑22
• 2.1.3 主要的試劑和藥品22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 2.2.1 雞胚擴(kuò)繁 NDV-D90 病毒23
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)23
• 2.2.3 NDV-D90 致 BGC-823 細(xì)胞病變23
• 2.2.4 病毒含量的測定23-24
• 2.2.5 病毒在 BGC-823 細(xì)胞中的增殖能力分析24
• 2.2.6 NDV-D90 對 BGC-823 細(xì)胞的毒性檢測24
• 2.2.7 腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)25-26
• 2.2.9 構(gòu)建帶有熒光素酶標(biāo)記的 BGC-823 穩(wěn)定細(xì)胞株26-27
• 2.2.10 體外細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)27-28
• 2.2.11 NDV-D90 對 BGC-823 細(xì)胞和 BGC-823-luci 細(xì)胞的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)28
• 2.3 結(jié)果28-35
• 2.3.1 BGC-823 細(xì)胞病變28-29
• 2.3.2 病毒含量測定29
• 2.3.3 細(xì)胞毒性檢測29-30
• 2.3.4 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)30-31
• 2.3.5 流式細(xì)胞術(shù)31-33
• 2.3.6 構(gòu)建熒光素酶標(biāo)記的 BGC-823 細(xì)胞系33
• 2.3.7 體外細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.3.8 比較 NDV-D90 對 BGC-823 細(xì)胞系和 BGC-823-luci 細(xì)胞系的細(xì)胞毒性34-35
• 2.4 討論35-38
• 第三章 NDV-D90 對 BGC-823 細(xì)胞抑制作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)38-48
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料38
• 3.1.1 病毒、細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物38
• 3.1.2 主要試劑38
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法38-41
• 3.2.1 實(shí)體瘤注射病毒及活體動(dòng)物成像38-39
• 3.2.2 細(xì)胞預(yù)感作病毒后的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)39-40
• 3.2.3 制作石蠟切片及 HE 染色40
• 3.2.4 統(tǒng)計(jì)和分析40-41
• 3.3 結(jié)果41-45
• 3.3.1 實(shí)體瘤41-42
• 3.3.2 溶解瘤42-43
• 3.3.3 實(shí)體瘤組的 HE 染色43-44
• 3.3.4 溶瘤組的 HE 染色44-45
• 3.4 討論45-46
• 3.5 結(jié)論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-58
• 致謝58-60
• 附錄60-62
• 個(gè)人簡歷62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1057860