本文關鍵詞：ITGA2 C807T多態(tài)性與大腸腺瘤及大腸癌發(fā)病風險的相關性

  更多相關文章： ITGA2 基因多態(tài)性 大腸腺瘤 大腸癌

【摘要】：背景目的大腸癌是人類最常見的消化道惡性腫瘤,也是世界上導致癌癥死亡的第三大原因。隨著我國人民生活水平不斷提高和飲食習慣的改變,我國大腸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢,已躍居第3-5位。自1978年Morson提出大腸癌遵循腺瘤-腺癌的組織發(fā)生順序以來,眾多研究表明,大腸從正常粘膜到腺瘤,再發(fā)展為進展期大腸癌,為遺傳因素與環(huán)境因素交互作用導致的多步驟、多階段的復雜進展過程。環(huán)境因素主要包括不良飲食習慣(營養(yǎng)膳食結(jié)構(gòu)不合理：高脂肪、高蛋白、高熱量、低纖維素等)、吸煙、環(huán)境致癌因素等,但并非暴露于以上環(huán)境因素的所有人群均患病,這提示大腸腫瘤的發(fā)生存在一定的遺傳易感性,而其中單核苷酸多態(tài)性是決定遺傳易感性的主要遺傳因素。因此,在大腸腫瘤病因?qū)W研究中,探討與其相關的易感基因顯得尤其重要。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP)是基因組的變異源,是DNA單個堿基突變,是人類基因組遺傳多態(tài)性(占人類多態(tài)性的90%)最簡單的形式和最常見的來源。在人類基因組中平均約每1000個堿基對中就有一個SNP, SNP在群體中頻率不小于1%,在人體對疾病的易感性與抵抗力、疾病臨床表現(xiàn)多樣性以及不同個體對藥物反應差異性等方面發(fā)揮作用。其中非同義SNPs(nsSNPs),也稱為錯義變異尤為重要,因為它們可以導致翻譯的氨基酸殘基序列改變。nsSNPs可能在人群中編碼的蛋白質(zhì)的功能多樣性方面發(fā)揮了重要作用,且與多種疾病有關。nsSNPs可能通過降低蛋白質(zhì)溶解度或使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定來影響蛋白質(zhì)功能,可能通過改變轉(zhuǎn)錄和翻譯來影響基因調(diào)節(jié)。眾多流行病學研究顯示,基因多態(tài)性可能與中國人群患大腸腫瘤的風險密切相關。整聯(lián)蛋白是細胞表面的異二聚體蛋白家族里的一個成員,它調(diào)節(jié)著細胞與細胞外基質(zhì)、細胞與細胞之間的相互作用。目前已知在哺乳動物中至少有由18種α亞基(α1～α11、αD、αE、αL、αM、αV、αX、αIIb)口8種β亞基(β1～β8)非共價結(jié)合形成的25種整聯(lián)蛋白異二聚體,每一對組合形成的整聯(lián)蛋白都特異性的結(jié)合唯一的一組配體。有研究報道整聯(lián)蛋白在腫瘤形成和腫瘤轉(zhuǎn)移中起著重要的作用,尤其是α2β1,αIIβ3和αVβ3被認為是腫瘤發(fā)生和進展的關鍵因子。整聯(lián)蛋白α2β1也被稱為血小板糖蛋白Ia-IIa (GPIa-IIa),它幾乎表達于所有上皮細胞,并且其在腫瘤細胞中的表達水平和腫瘤細胞的運動能力,侵襲力和細胞分化相關。除此之外,幾項研究還發(fā)現(xiàn)整聯(lián)蛋白α2β1與大腸上皮的分化、大腸癌細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關。人類整聯(lián)蛋白α2亞單位基因(ITGA2)位于染色體5q23-31。在該基因編碼區(qū)的第7個外顯子上807位核苷酸發(fā)現(xiàn)一個C到T的同義突變。有研究證明該單核苷酸多態(tài)性TTGA2 C807T (NCBI SNP ID:rs1 126643)影響著整聯(lián)蛋白α2β1的表達量(α2亞單位只和β1亞單位結(jié)合),TT基因型者整聯(lián)蛋白α2β1表達最高,CT基因型者整聯(lián)蛋白α2β1表達次之,CC基因型者整聯(lián)蛋白α2β1表達最低。最近的研究表明,ITGA2基因C807T多態(tài)性和各種疾病都密切相關,包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、缺血性腦卒中、視網(wǎng)膜靜脈閉塞、急性冠脈綜合癥。然而,據(jù)我們所知,目前國內(nèi)尚無評估該多態(tài)性與大腸腺瘤及大腸癌發(fā)病風險的研究。而既往研究表明,整聯(lián)蛋白α2β1的表達量和功能改變參與了大腸癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移,因此我們進行了一項以醫(yī)院為基礎的基于中國江西漢族人群的病例-對照研究,以了解ITGA2 C807T基因多態(tài)性與大腸腺瘤及大腸癌患病風險的相關性。方法1.研究對象：本研究為基于醫(yī)院人群的病例-對照研究,對象為232例個體,包括95例正常對照個體、48例新近組織病理學確診為大腸腺瘤的患者和89例新近組織病理學確診為大腸癌的患者,其中大腸癌患者未合并同時和/或異時性其他惡性腫瘤,且未接受化療或放療；對照組為同時期就診的健康人或無腫瘤、無遺傳病史的患者。病例組和對照組均為無血緣關系的萍鄉(xiāng)及周邊地區(qū)的漢族人群。2.收集受試者資料和血樣：本研究需獲得萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院倫理委員會的批準和受試者的知情同意,采集外周靜脈血2ml,保存于-80℃低溫待用。通過問卷調(diào)查收集受試者的大腸癌家族史、住址(農(nóng)村或城市)、年齡、性別、體重、吸煙、飲酒、飲茶情況等信息。現(xiàn)吸煙或曾吸煙平均每天吸煙一支以上并持續(xù)2年以上者被定義為吸煙個體,現(xiàn)飲酒或曾飲酒平均每天1次以上并持續(xù)3個月以上者被定義為飲酒個體,現(xiàn)飲茶或曾飲茶平均每天2次以上并持續(xù)3個月以上者被定義為飲茶個體,家族中1名以上親屬和/或2名以上二級親屬患大腸癌者被定義為大腸癌家族史陽性。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟和美國癌癥聯(lián)合會聯(lián)合制定的第7版腫瘤TNM分期法評定腫瘤侵犯深度和局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)。分化等級依據(jù)世界衛(wèi)生組織標準(WHO)確定。3.抽提血液白細胞DNA：采用人全血基因組DNA快速提取試劑盒,操作方法嚴格按照說明書進行。4.采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性方法(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism assay, PCR-RFLP)檢測ITGA2 C807T基因型。PCR反應體系為20μl,其中包括2μl10×PCR buffer,1.75 mmol/LMgCl2, 0.15mmol/L dNTPs,0.25μmol/L上下游引物,F:5'-GTGTTTAACTTGAACACAT AT-3', R:5'-AccTTGCATATTGAATTGCTT-3',lu Taq DNA聚合酶和150 ng模板DNA。 PCR擴增程序為：95℃預變性5 min,然后經(jīng)35個循環(huán)：包括94℃變性30s、55℃退火30s、72℃延伸60 s,最后72℃延伸5 min。115 bp的擴增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶Taq I 65 ℃水浴酶切12 h后,經(jīng)3%瓊脂糖凝膠電泳,使用紫外分析儀觀察電泳結(jié)果,并用數(shù)碼相機對電泳結(jié)果進行拍照作為半定量評估方法。5.質(zhì)量控制：隨機抽取10%樣本進行重復實驗,結(jié)果要求100%一致。6.統(tǒng)計學分析：采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析,統(tǒng)計檢測均基于雙尾,P值小于0.05定義為有統(tǒng)計學意義。如果定量資料是偏態(tài)分布,則用Mann-Whitney秩和檢驗檢測兩組間的差異。采用擬合優(yōu)度χ2檢驗檢測Hardy-Weinberg平衡。采用Pearson X2檢驗比較病例組和對照組中的基因型和分類變量分布的差異。用優(yōu)勢比(odds ratio, OR)及其95%可信區(qū)間(confidence interval, CI)評估基因多態(tài)性與大腸腺瘤及大腸癌的風險。用非條件Logistic回歸法計算經(jīng)年齡、性別、吸煙飲酒飲茶狀態(tài)、高血壓史、糖尿病史和大腸癌家族史等校正的OR值。7.評價ITGA2基因多態(tài)性與大腸腺瘤及大腸癌遺傳易感性關系。1)研究對象一般特征分析；2)ITGA2基因型分布與大腸腺瘤及大腸癌風險評估；3)ITGA2多態(tài)性與大腸腺瘤及大腸癌風險分層分析：4)ITGA2多態(tài)性和大腸癌的臨床病理特征分析。結(jié)果1.野生型CC純合子基因型有92和23 bp兩個片段；突變型TT純合子僅有115 bp一個片段；CT雜合子基因型有115、92和23 bp三個片段。2.病例組和對照組在性別上無統(tǒng)計學差異,大腸腺瘤組和對照組在和年齡(5歲以內(nèi))上無統(tǒng)計學差異,大腸癌組年齡稍大,提示配對基本成功。病例組和對照組的糖尿病史、飲酒、飲茶和婚姻狀況無統(tǒng)計學差異。大腸癌組體質(zhì)量、身高和BMI較對照組低。病例組和對照組在高血壓史、大腸癌家族史、教育程度、職業(yè)、居住地上的差異具有統(tǒng)計學意義。大腸腺瘤組和對照組的吸煙狀況差異具有統(tǒng)計學意義。3.ITGA2 C807T基因型頻率和等位基因頻率在大腸腺瘤組和對照組的總體分布無顯著差異,而其在大腸癌組和對照組的分布具有顯著差異。相比于野生基因型CC,攜帶變異基因型(CT+TT)的個體患大腸腺瘤和大腸癌的風險均增高。4.在分層分析中,變異基因型并未增加患大腸腺瘤的風險,而變異基因型增加患大腸癌的風險在女性、吸煙、飲酒、高學歷、腦力勞動、城市受試者中具有統(tǒng)計學意義。沒有發(fā)現(xiàn)此多態(tài)性與大腸癌風險相關性的年齡差異。5.大腸癌病例分別按病變部位、病理類型、腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期等臨床病理特征分層后,均未見ITGA2 C807T位點基因型分布存在顯著性差異(P0.05)。結(jié)論1.攜帶T等位基因的基因型(CT與TT)可能增加患大腸腺瘤和大腸腺癌的發(fā)病風險。2.ITGA2 C807T基因多態(tài)性可能與女性、吸煙、飲酒、高學歷、腦力勞動、城市受試者患大腸癌的風險相關,即攜帶T等位基因可能增加上述個體大腸腺癌的發(fā)病風險。3.ITGA2 C807T基因多態(tài)性在大腸癌患者的臨床病理特征分層分析中未見顯著性差異。
【關鍵詞】：ITGA2 基因多態(tài)性 大腸腺瘤 大腸癌
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-15
• 第一章 前言15-19
• 第二章 材料與方法19-26
• 2.1 試劑與材料19-20
• 2.2 主要儀器與設備20-21
• 2.3 研究對象21
• 2.4 研究方法21-26
• 第三章 結(jié)果26-33
• 3.1 研究對象一般特征26-28
• 3.2 ITGA2 C807T基因型檢測結(jié)果28
• 3.3 ITGA2 C807T基因型分布和大腸腺瘤、大腸癌風險估計28-29
• 3.4 ITGA2 C807T多態(tài)性和大腸腺瘤、大腸癌風險分層分析29-32
• 3.5 ITGA2 C807T多態(tài)性和大腸癌的臨床病理特征32-33
• 第四章 討論33-37
• 第五章 全文總結(jié)37-38
• 第六章 參考文獻38-45
• 綜述45-63
• 參考文獻55-63
• 攻讀學位期間成果63-64
• 致謝64-66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 鄭樹,劉希永,曹江,Rebecca A.Nelson,董琦,方永明,William Bennett,蔡善榮,張?zhí)K展;代謝酶NAT2多態(tài)性與大腸息肉及腺瘤的復發(fā)[J];中華醫(yī)學雜志;2001年15期

，

本文編號：1056336