本文關(guān)鍵詞：三陰性乳腺癌中EZH2及DNMT1的表達(dá)及其與抑癌基因甲基化的關(guān)系

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【摘要】：研究背景三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancers TNBC)是指一種不表達(dá)雌激素受體(estrogen receptor ER)、孕激素受體(progestrone receptor PR)和人類表皮生長因子受體2亞型(human epithelial growth factor receptor 2 Her-2)的乳腺癌亞型。TNBC具有發(fā)病年齡較小、侵襲性強(qiáng)、惡性程度高、預(yù)后差等特點(diǎn)。由于其不表達(dá)ER, PR和Her-2往往較早發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移而且對內(nèi)分泌治療和抗Her-2的靶向治療效果差,其治療手段相對于其他乳腺癌亦相應(yīng)受到限制。抑癌基因啟動子區(qū)CpG異常甲基化在多種腫瘤的發(fā)生過程中是一個(gè)頻發(fā)的早期事件,也是腫瘤發(fā)生的一個(gè)早期敏感指標(biāo)。在基因甲基化過程中,EZH2(Enhancer of zeste homolog 2)能夠通過募集DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNA methyltransferasel, DNMT1)催化抑癌基因發(fā)生異常甲基化,從而沉默抑癌基因的表達(dá),并能促進(jìn)多種惡性腫瘤轉(zhuǎn)移。本課題旨在探索TNBC中EZH2、DNMT1表達(dá)之間的聯(lián)系及與三陰性乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,并探究EZH2及DNMT1表達(dá)與抑癌基因甲基化間的相互關(guān)系。對TNBC發(fā)病機(jī)制提供進(jìn)一步的認(rèn)識,為其預(yù)防治療以及預(yù)后的判斷提供更可靠的依據(jù)。目的通過檢測131例三陰性乳腺癌、78例非三陰性乳腺癌及65例癌旁組織中EZH2及DNMT1蛋白的表達(dá)情況,探討EZH2及DNMT1蛋白的表達(dá)特點(diǎn)及與三陰性乳腺癌主要臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法收集、篩選廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心2008年1月至2013年5月乳腺癌病理資料較齊全的石蠟包埋標(biāo)本209例(131例三陰性乳腺癌、78例非三陰性乳腺癌),癌旁乳腺組織65例(距離腫瘤邊緣4cm以上)。采集患者年齡、是否絕經(jīng)、腫瘤病理類型、組織學(xué)級別、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無脈管神經(jīng)浸潤等資料。采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(streptavidin-perosidase SP)法,檢測131例三陰性乳腺癌、78例非三陰性乳腺癌及65例癌旁組織中EZH2及DNMT1的蛋白表達(dá)情況。運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用χ2檢驗(yàn)對計(jì)數(shù)資料進(jìn)行分析比較,采用多因素Logistic回歸分析EZH2及DNMT1陽性表達(dá)有關(guān)的因素,Spearman等級相關(guān)分析三陰性乳腺癌中EZH2及DNMT1表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果EZH2蛋白在三陰性、非三陰性乳腺癌組織和癌旁組織的陽性表達(dá)率分別為86.3%、89.7%和40.0%；DNMT1蛋白在三種組織中的陽性表達(dá)率分別為63.4%、66.6%和44.6%；兩種蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)均高于癌旁組織差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；三陰性乳腺癌中,EZH2陽性表達(dá)與組織學(xué)分級、腫瘤直徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P0.05),DNMT1的表達(dá)與腫瘤分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P0.05)；多因素logistic回歸分析結(jié)果顯示：EZH2及DNMT1表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分級有關(guān)(p0.01),隨著組織分級升高,EZH2及DNMT1表達(dá)也升高。結(jié)論EZH2及DNMT1蛋白均參與了TNBC的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移,聯(lián)合檢測二者的表達(dá)可能對TNBC的預(yù)后判斷具有潛在的價(jià)值。目的檢測TNBC組織中抑癌基因14-3-3sigma、RASSF1A、CDH1、P16、 ERa啟動子甲基化狀態(tài)。分析它們與三陰性乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系,從而探討抑癌基因甲基化在TNBC中的臨床意義。方法運(yùn)用甲基化特異性PCR (methylation-specific polymerase chain reaction, MSP)分別對119例TNBC組織和58例癌旁組織P16、CDH11、RASSF1A、 14-3-3 sigma、ER3、ER4、ER5啟動子區(qū)甲基化狀況進(jìn)行檢測。結(jié)果14-3-3sigma基因在TNBC和癌旁組織中的甲基化發(fā)生率分別為71.4%、29.3%(P0.05);RASSFIA基因在TNBC和癌旁組織中的甲基化發(fā)生率分別為42.1%、19.1%(P0.05)；CDH1基因在TNBC和癌旁組織中的甲基化發(fā)生率分別為37.8%、16.1%(P0.05)；P16基因在TNBC和癌旁組織中的甲基化發(fā)生率分別為40.3%、23.5%(P0.05); ERa基因在TNBC和癌旁組織中的甲基化發(fā)生率分別為78.2%、41.4%(P0.05)。14-3-3 sigma基因甲基化與組織學(xué)分級、腫瘤類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),浸潤性導(dǎo)管癌中14-3-3 sigma基因甲基化率明顯高于其他組織類型,G3組14-3-3sigma基因甲基化率高于G1、G2組,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組14-3-3sigma基因甲基化率高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；RASSF1A基因甲基化與腫瘤組織學(xué)分級相關(guān),G3組RASSF1A基因甲基化率高于G1、G2組,(P0.05); CDH1基因甲基化與腫瘤類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),浸潤性導(dǎo)管癌中CDH1基因甲基率高于其他腫瘤類型,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CDH1基因甲基化率高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P0.05)；P16基因甲基化僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組P16基因甲基化率高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); ERa基因甲基化與腫瘤直徑和腫瘤類型相關(guān),腫瘤直徑2cm組ERa基因甲基化率高于直徑_2Cmm組,浸潤性導(dǎo)管癌中ERa基因甲基化率高于其他腫瘤類型組,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論14-3-3sigma、RASSF1A、CDH1、P16、ERa 5種抑癌基因甲基化發(fā)生率均顯著高于癌旁正常組織,提示5種抑癌基因甲基化與三陰性乳腺癌關(guān)系密切；其中14-3-3sigma、CDH1、P16基因高甲基化與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；且RASSFIA基因甲基化與組織學(xué)分級密切相關(guān)。ERα分別于組織學(xué)分級和腫瘤類型相關(guān)。抑癌基因甲基化是TNBC高頻事件,可能也是TNBC發(fā)生的原因之一,因此聯(lián)合檢測TNBC中多抑癌基因甲基化可能,有助于為TNBC的診斷篩選新方法。目的分析EZH2及DNMT1的表達(dá)與抑癌基因14-3-3sigma、RASSF1A、 CDH1、P16、ERα、啟動子甲基化狀態(tài)間的相關(guān)關(guān)系,進(jìn)一步揭示影響抑癌基因甲基化的因素,為三陰性乳腺癌的診斷及治療提供理論基礎(chǔ)。方法具體實(shí)驗(yàn)材料及操作方法見第一章、第二章資料與方法部分。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。χ2檢驗(yàn)分析三陰性乳腺癌中EZH2及DNMT1的表達(dá)與抑癌基因甲基化狀態(tài)之間的關(guān)系,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果三陰性乳腺癌病例中14-3-3sigma、P16、ERα三個(gè)基因的甲基化率在EZH2陽性表達(dá)組中均高于陰性表達(dá)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P0.05)。14-3-3sigma基因甲基化率在DNMT1陽性表達(dá)組中高于陰性表達(dá)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P=0.036)。結(jié)論三陰性乳腺癌中EZH2及DNMT1的表達(dá)均與14-3-3sigma基因甲基化相關(guān)；其中EZH2的表達(dá)還可影響P16、ERα發(fā)生甲基化。EZH2和DNMT1協(xié)同表達(dá)可能是影響三陰性乳腺癌中抑癌基因甲基化的早期事件之一。
【關(guān)鍵詞】：三陰性乳腺癌 非三陰性乳腺癌 EZH2 DNMT1 免疫組織化學(xué) 三陰性乳腺癌 甲基化 抑癌基因 甲基化特異性PCR 三陰性乳腺癌 甲基化 抑癌基因 EZH2 DNMT1
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9;R730.43
【目錄】：

• 摘要3-7
• ABSTRACT7-15
• 第一章 EZH2及DNMT1在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及意義15-29
• 1. 前言15-17
• 2. 資料與方法17-21
• 3. 結(jié)果21-26
• 4. 討論26-29
• 第二章 三陰性乳腺癌中多基因甲基化的檢測及意義29-48
• 1. 前言29-32
• 2. 材料與方法32-40
• 3. 結(jié)果40-44
• 4. 討論44-48
• 第三章 三陰性乳腺癌中EZH2及DMMT1的表達(dá)與抑癌基因甲基化的關(guān)系48-52
• 1. 前言48
• 2. 材料與方法48
• 3. 結(jié)果48-49
• 4. 討論49-52
• 全文總結(jié)52
• 本論文的創(chuàng)新點(diǎn)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 文獻(xiàn)綜述61-71
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 縮略語用表71-72
• 攻讀碩士期間研究成果72-73
• 論文致謝73-75

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄭昕;楊映紅;楊發(fā)端;;中老年三陰性乳腺癌臨床病理特征分析[J];福建醫(yī)藥雜志;2014年03期

2 張麗;趙曉輝;佟仲生;李淑芬;史業(yè)輝;王忱;何麗宏;;356例三陰性乳腺癌的臨床特征及預(yù)后多因素分析[J];中國腫瘤臨床;2010年18期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 關(guān)文月;細(xì)胞特異性的DNMT1甲基化修飾對其穩(wěn)定性的調(diào)控[D];華東師范大學(xué);2012年

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本文編號：1053959