本文關(guān)鍵詞：PIAS3過表達(dá)對肺腺癌A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響

  更多相關(guān)文章： 肺腺癌 靶向治療 活化型STAT3的抑制蛋白 增殖 遷移 侵襲

【摘要】：肺癌是威脅人類健康的重要疾病,它的病理類型可分為小細(xì)胞肺癌(Small Cell Lung Cancer,SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC),其中非小細(xì)胞肺癌又包括鱗癌、腺癌、腺鱗癌等類型。分子靶向藥物治療是一種新的治療方法,與傳統(tǒng)的抗腫瘤化療藥物相比具有選擇性高、毒副作用相對較小的特點(diǎn)。針對不同的分子靶點(diǎn),有不同的藥物。對NSCLC的而言,分子靶向治療藥物應(yīng)用最多的是以表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)為靶點(diǎn)的藥物。盡管與西方國家相比我國EGFR突變率高達(dá)50%,但是仍有大量突變陰性的患者。另外,許多腫瘤患者對分子靶向藥物存在一定程度的耐藥性。諸多原因使得目前臨床應(yīng)用中的分子靶向治療藥物受到限制。因此,探索腫瘤信號傳導(dǎo)通路中新的靶分子,對提高肺癌的治療效果具有重大意義。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3(signal transducers and activators of transcription3,STAT3)是STAT蛋白的一種,存在于機(jī)體的絕大多數(shù)組織細(xì)胞里。STAT3在多種細(xì)胞因子、生長因子等生物活性物質(zhì)介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路中扮演重要角色,是眾多靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。STAT3的含量及活性與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、增殖、遷移以及侵襲等生物特性密切相關(guān)�；罨蚐TAT3的抑制蛋白(Protein inhibitor of activated STAT3,PIAS3)是STAT3的內(nèi)源性抑制劑,可抑制STAT3的表達(dá)活性。研究發(fā)現(xiàn)人體許多正常組織細(xì)胞內(nèi)PIAS3的表達(dá)較高,而在腫瘤組織和細(xì)胞里表達(dá)很低甚至缺失。當(dāng)PIAS3的表達(dá)下降或缺失時(shí),STAT3的活性即表現(xiàn)為持續(xù)增高,腫瘤細(xì)胞的生長、增殖和侵襲等能力也明顯提高。在本研究中,我們用PIAS3過表達(dá)載體pCMV-Sport6-PIAS3轉(zhuǎn)染肺腺癌A549細(xì)胞,使其過表達(dá)PIAS3,觀察PIAS3過表達(dá)對肺腺癌A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響。通過觀察共轉(zhuǎn)染pCMV-Sport6-PIAS3和STAT3的過表達(dá)載體(PRC-STAT3)或STAT3磷酸化位點(diǎn)持續(xù)性激活載體(PRC-STAT3-CT)時(shí),STAT3活性受抑制的程度,探討PIAS3過表達(dá)對STAT3的特異性抑制作用及PIAS3作為肺腺癌治療新靶點(diǎn)的可行性。研究目的:研究PIAS3過表達(dá)對肺腺癌A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響及PIAS3對STAT3的特異性抑制作用,初步探討PIAS3作為肺腺癌治療新靶點(diǎn)的可行性。研究方法:1.對比轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM 2000和Vigo Fect對A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,選擇轉(zhuǎn)染效率較高的轉(zhuǎn)染試劑用于后續(xù)試驗(yàn)。2.利用Western Blot檢測A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染pCMV-Sport6-PIAS3后PIAS3的表達(dá)量,確定pCMV-Sport6-PIAS3過表達(dá)PIAS3的有效性。3.利用MTT比色實(shí)驗(yàn)檢測PIAS3過表達(dá)對A549細(xì)胞存活和生長的影響。4.利用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測PIAS3過表達(dá)對A549細(xì)胞增殖能力的影響。5.利用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測PIAS3過表達(dá)對A549細(xì)胞遷移能力的影響。6.利用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測PIAS3過表達(dá)對A549細(xì)胞侵襲能力的影響。7.利用間接免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)觀察PIAS3過表達(dá)對p-STAT3入核的影響。研究結(jié)果:1.轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine TM 2000和VigoFect均可對A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,但LipofectamineTM 2000的轉(zhuǎn)染效率明顯比VigoFect高。2.Western Blot結(jié)果顯示:A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染pCMV-Sport6-PIAS3后,PIAS3的表達(dá)量顯著增加。3.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:A549細(xì)胞過表達(dá)PIAS3后,存活率與Mock組和空載對照組(pCMV-Sport6)相比較均顯著降低。4.克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:肺腺癌A549細(xì)胞過表達(dá)PIAS3后的克隆形成能力顯著降低,存活分?jǐn)?shù)僅為9.78%,與Mock組及空載對照組(pCMV-Sport6)相比存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01)。5.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:A549細(xì)胞過表達(dá)PIAS3后,遷移能力顯著降低。6.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:A549細(xì)胞過表達(dá)PIAS3后,侵襲能力顯著降低。7.間接免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:單獨(dú)轉(zhuǎn)染pCMV-Sport6-PIAS3與轉(zhuǎn)染空載組(pCMV-Sport6)相比,p-STAT3在細(xì)胞核的定位明顯受到抑制;pCMV-Sport6-PIAS3與STAT3的過表達(dá)載體(PRC-STAT3)或STAT3磷酸化位點(diǎn)持續(xù)性激活載體(PRC-STAT3-CT)共轉(zhuǎn)染后,p-STAT3的入核率與轉(zhuǎn)染空載組(pCMV-Sport6)相比仍然減少。研究結(jié)論:1.LipofectamineTM 2000對A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率比Vigo Fect高。2.A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染pCMV-Sport6-PIAS3后PIAS3的表達(dá)量顯著增加。3.PIAS3過表達(dá)能顯著抑制肺腺癌A549細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。4.PIAS3過表達(dá)可特異性抑制A549細(xì)胞中STAT3的活性(即抑制p-STAT3入核),即使過表達(dá)或持續(xù)激活STAT3,也無法逆轉(zhuǎn)PIAS3對STAT3的抑制作用。5.PIAS3是肺腺癌治療的重要潛在靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：肺腺癌 靶向治療 活化型STAT3的抑制蛋白 增殖 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 第一部分 A549細(xì)胞瞬時(shí)過表達(dá)PIAS314-22
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法14-18
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-19
• 3 討論19-22
• 第二部分 PIAS3過表達(dá)對肺腺癌A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響22-34
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法22-26
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-31
• 3 討論31-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-42
• 附錄42-43
• 代表性論文43-51
• 個(gè)人簡歷51-52
• 致謝52

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊晉平,王澤,張?zhí)K;肺腺癌5-羥色胺受體的免疫組織化學(xué)定位[J];四川解剖學(xué)雜志;2003年02期

2 吳一龍,林嘉穎,楊學(xué)寧,喬貴賓,王坤,陳剛;肺腺癌患者酪氨酸激酶信號傳導(dǎo)通路的異常與臨床預(yù)后[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2004年12期

3 張利群,陳杭薇,王四海,辛慶紅,杜玉國,尤蘭華;人呼吸道合胞病毒轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)染肺腺癌細(xì)胞系的研究[J];山東醫(yī)藥;2005年12期

4 黎聯(lián);梅同華;周向東;張新高;車德亞;;細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶信號通路與基質(zhì)金屬蛋白酶-26在肺腺癌表達(dá)中的關(guān)系[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年02期

5 王亞南;顧國浩;;生物芯片在肺腺癌研究和診療中的應(yīng)用進(jìn)展[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2011年02期

6 ;我國人體肺腺癌細(xì)胞系建立[J];腫瘤;1981年06期

7 季晨陽,張義R，

本文編號：1046833