本文關鍵詞：NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對三陰性乳腺癌干細胞作用研究

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【摘要】：目的:1.探究特異性靶向PI3K的抑制劑NVP-BKM120對三陰性乳腺癌細胞系中普通細胞及相應干細胞的殺傷作用,觀察NVP-BKM120對三陰性乳腺癌細胞系中干細胞生長、增殖等生物學特性的影響。2.探究NVP-BKM120聯(lián)合特異性靶向mTOR的抑制劑NVP-RAD001對三陰性乳腺癌系中普通細胞及相應干細胞的殺傷作用,觀察NVP-BKM120與NVP-RAD001雙靶向聯(lián)合對三陰性乳腺癌細胞系中干細胞生長、增殖等生物學特性的影響。3.探究NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對裸鼠干細胞移植瘤生長增殖的影響,為臨床雙靶向聯(lián)合治療三陰性乳腺癌提供依據(jù)。方法:1.體外細胞學實驗部分:通過采用無血清干細胞培養(yǎng)液懸浮培養(yǎng)、富集三陰性乳腺癌細胞系MDA-MB-231、CAL51中的干細胞,并通過流式細胞儀檢測其中ESA+CD44+CD24-/low亞群比例。通過MTT分析法檢測常規(guī)培養(yǎng)條件以及懸浮培養(yǎng)條件下,NVP-BKM120單藥、NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對三陰性乳腺癌細胞系中普通細胞及其干細胞的生長增殖抑制作用;通過計算藥物作用聯(lián)合指數(shù)分析研究NVP-BKM120與NVP-RAD001是否具有協(xié)同增效作用;通過耐藥細胞平板克隆實驗檢測NVP-BKM120單藥、NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對三陰性乳腺癌細胞克隆形成能力的影響;通過球囊形成抑制實驗檢測懸浮培養(yǎng)條件下,NVP-BKM120單藥或NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對三陰性乳腺癌干細胞球囊形成能力的影響;通過免疫蛋白印跡法檢測NVP-BKM120單藥或聯(lián)合NVP-RAD001對三陰性乳腺癌細胞中PI3K/AKT/mTOR信號通路中關鍵節(jié)點的蛋白活化水平的影響。2.裸鼠干細胞移植瘤實驗:通過無血清懸浮培養(yǎng)富集三陰性乳腺癌干細胞,建立裸鼠三陰性乳腺癌干細胞移植瘤模型并隨即分為4個實驗組,分別予以安慰劑、NVP-BKM120、NVP-RAD001或聯(lián)合用藥,記錄給藥期間干細胞移植瘤體積變化以及裸鼠體重變化情況,觀察體內實驗條件下,藥物對三陰性乳腺癌干細胞的作用。結果:1.體外實驗條件下,NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對三陰性乳腺癌普通細胞及干細胞作用效果:通過對照組、NVP-BKM120組、NVP-RAD001組以及聯(lián)合用藥組之間的比較,在一定程度上,單藥NVP-BKM120或NVP-RAD001均能夠抑制三陰性乳腺癌普通細胞及其干細胞生長增殖,并且隨藥物濃度的增大,其抑制作用增強。相比于普通細胞,干細胞對任一單藥具有耐藥性。通過與對照組、單藥組之間的比較,NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001能夠明顯抑制三陰性乳腺癌普通細胞及其干細胞的生長、增殖,減少普通細胞耐藥克隆形成與干細胞球囊形成,同時能夠明顯抑制PI3K/AKT/mTOR信號通路相關蛋白pAKT、pS6表達水平進而抑制信號傳導。藥物聯(lián)合指數(shù)計算顯示NVP-BKM120與NVP-RAD001之間具有協(xié)同增效作用。2.體內實驗條件下,NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對三陰性乳腺癌干細胞移植瘤的作用效果:通過對照組、NVP-BKM120組、NVP-RAD001組以及聯(lián)合用藥組之間的比較,在未明顯降低裸鼠體重的前提下,NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001能夠明顯減緩三陰性乳腺癌干細胞移植瘤的生長速度。結論:1.PI3K的抑制劑NVP-BKM120聯(lián)合靶向mTOR的抑制劑NVP-RAD001能夠協(xié)同抑制三陰性乳腺癌普通細胞及干細胞的生長、增殖,減少普通細胞耐藥克隆形成與干細胞球囊形成,阻斷PI3K/AKT/mTOR信號通路關鍵蛋白分子AKT、S6的磷酸化,從而抑制該通路信號傳導。2.PI3K的抑制劑NVP-BKM120聯(lián)合靶向mTOR的抑制劑NVP-RAD001能夠有效抑制裸鼠三陰性乳腺癌干細胞移植瘤的生長。
【關鍵詞】：三陰性乳腺癌 干細胞 NVP-BKM120 NVP-RAD001 分子靶向治療
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-16
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-16
• 對象和方法16-27
• 1.1 實驗材料16-18
• 1.1.1 實驗對象16
• 1.1.2 實驗試劑16-17
• 1.1.3 實驗儀器17-18
• 1.2 實驗方法18-26
• 1.2.1 MDA-MB-231，Cal51乳腺癌細胞系培養(yǎng)18
• 1.2.2 MDA-MB-231，Cal51乳腺癌細胞系干細胞培養(yǎng)18-19
• 1.2.3 MTT分析法19-20
• 1.2.4 耐藥細胞平板克隆實驗20
• 1.2.5 球囊形成實驗20-21
• 1.2.6 干細胞比例檢測21
• 1.2.7 蛋白免疫印跡實驗(Western blotting)21-25
• 1.2.8 干細胞移植瘤模型建立及藥物干預25-26
• 1.3 統(tǒng)計學方法26-27
• 實驗結果27-34
• 2.1 NVP-BKM120、NVP-RAD001對三陰性乳腺癌普通細胞以及干細胞的生長抑制作用27-28
• 2.2 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001具有協(xié)同增效作用28-29
• 2.3 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001抑制三陰性乳腺癌細胞耐藥克隆的形成29-30
• 2.4 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001進一步抑制三陰性乳腺癌細胞球囊形成30-31
• 2.5 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001抑制PI3K/AKT/mTOR信號通路31-32
• 2.6 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001抑制干細胞移植瘤的生長32-34
• 討論34-37
• 結論37-38
• 參考文獻38-43
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明43-44
• 綜述 NVP-BKM120在乳腺癌治療中的研究進展44-53
• 綜述參考文獻50-53
• 致謝53-54
• 個人簡歷54

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本文編號：1045055