本文關(guān)鍵詞：NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對(duì)三陰性乳腺癌干細(xì)胞作用研究

  更多相關(guān)文章： 三陰性乳腺癌 干細(xì)胞 NVP-BKM120 NVP-RAD001 分子靶向治療

【摘要】：目的:1.探究特異性靶向PI3K的抑制劑NVP-BKM120對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞系中普通細(xì)胞及相應(yīng)干細(xì)胞的殺傷作用,觀察NVP-BKM120對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞系中干細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖等生物學(xué)特性的影響。2.探究NVP-BKM120聯(lián)合特異性靶向mTOR的抑制劑NVP-RAD001對(duì)三陰性乳腺癌系中普通細(xì)胞及相應(yīng)干細(xì)胞的殺傷作用,觀察NVP-BKM120與NVP-RAD001雙靶向聯(lián)合對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞系中干細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖等生物學(xué)特性的影響。3.探究NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對(duì)裸鼠干細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)增殖的影響,為臨床雙靶向聯(lián)合治療三陰性乳腺癌提供依據(jù)。方法:1.體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)部分:通過(guò)采用無(wú)血清干細(xì)胞培養(yǎng)液懸浮培養(yǎng)、富集三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231、CAL51中的干細(xì)胞,并通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)其中ESA+CD44+CD24-/low亞群比例。通過(guò)MTT分析法檢測(cè)常規(guī)培養(yǎng)條件以及懸浮培養(yǎng)條件下,NVP-BKM120單藥、NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞系中普通細(xì)胞及其干細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖抑制作用;通過(guò)計(jì)算藥物作用聯(lián)合指數(shù)分析研究NVP-BKM120與NVP-RAD001是否具有協(xié)同增效作用;通過(guò)耐藥細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NVP-BKM120單藥、NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞克隆形成能力的影響;通過(guò)球囊形成抑制實(shí)驗(yàn)檢測(cè)懸浮培養(yǎng)條件下,NVP-BKM120單藥或NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對(duì)三陰性乳腺癌干細(xì)胞球囊形成能力的影響;通過(guò)免疫蛋白印跡法檢測(cè)NVP-BKM120單藥或聯(lián)合NVP-RAD001對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞中PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路中關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)的蛋白活化水平的影響。2.裸鼠干細(xì)胞移植瘤實(shí)驗(yàn):通過(guò)無(wú)血清懸浮培養(yǎng)富集三陰性乳腺癌干細(xì)胞,建立裸鼠三陰性乳腺癌干細(xì)胞移植瘤模型并隨即分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組,分別予以安慰劑、NVP-BKM120、NVP-RAD001或聯(lián)合用藥,記錄給藥期間干細(xì)胞移植瘤體積變化以及裸鼠體重變化情況,觀察體內(nèi)實(shí)驗(yàn)條件下,藥物對(duì)三陰性乳腺癌干細(xì)胞的作用。結(jié)果:1.體外實(shí)驗(yàn)條件下,NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對(duì)三陰性乳腺癌普通細(xì)胞及干細(xì)胞作用效果:通過(guò)對(duì)照組、NVP-BKM120組、NVP-RAD001組以及聯(lián)合用藥組之間的比較,在一定程度上,單藥NVP-BKM120或NVP-RAD001均能夠抑制三陰性乳腺癌普通細(xì)胞及其干細(xì)胞生長(zhǎng)增殖,并且隨藥物濃度的增大,其抑制作用增強(qiáng)。相比于普通細(xì)胞,干細(xì)胞對(duì)任一單藥具有耐藥性。通過(guò)與對(duì)照組、單藥組之間的比較,NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001能夠明顯抑制三陰性乳腺癌普通細(xì)胞及其干細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖,減少普通細(xì)胞耐藥克隆形成與干細(xì)胞球囊形成,同時(shí)能夠明顯抑制PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白pAKT、pS6表達(dá)水平進(jìn)而抑制信號(hào)傳導(dǎo)。藥物聯(lián)合指數(shù)計(jì)算顯示NVP-BKM120與NVP-RAD001之間具有協(xié)同增效作用。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)條件下,NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001對(duì)三陰性乳腺癌干細(xì)胞移植瘤的作用效果:通過(guò)對(duì)照組、NVP-BKM120組、NVP-RAD001組以及聯(lián)合用藥組之間的比較,在未明顯降低裸鼠體重的前提下,NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001能夠明顯減緩三陰性乳腺癌干細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)速度。結(jié)論:1.PI3K的抑制劑NVP-BKM120聯(lián)合靶向mTOR的抑制劑NVP-RAD001能夠協(xié)同抑制三陰性乳腺癌普通細(xì)胞及干細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖,減少普通細(xì)胞耐藥克隆形成與干細(xì)胞球囊形成,阻斷PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白分子AKT、S6的磷酸化,從而抑制該通路信號(hào)傳導(dǎo)。2.PI3K的抑制劑NVP-BKM120聯(lián)合靶向mTOR的抑制劑NVP-RAD001能夠有效抑制裸鼠三陰性乳腺癌干細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：三陰性乳腺癌 干細(xì)胞 NVP-BKM120 NVP-RAD001 分子靶向治療
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-16
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-16
• 對(duì)象和方法16-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-26
• 1.2.1 MDA-MB-231，Cal51乳腺癌細(xì)胞系培養(yǎng)18
• 1.2.2 MDA-MB-231，Cal51乳腺癌細(xì)胞系干細(xì)胞培養(yǎng)18-19
• 1.2.3 MTT分析法19-20
• 1.2.4 耐藥細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)20
• 1.2.5 球囊形成實(shí)驗(yàn)20-21
• 1.2.6 干細(xì)胞比例檢測(cè)21
• 1.2.7 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)21-25
• 1.2.8 干細(xì)胞移植瘤模型建立及藥物干預(yù)25-26
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法26-27
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-34
• 2.1 NVP-BKM120、NVP-RAD001對(duì)三陰性乳腺癌普通細(xì)胞以及干細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用27-28
• 2.2 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001具有協(xié)同增效作用28-29
• 2.3 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞耐藥克隆的形成29-30
• 2.4 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001進(jìn)一步抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞球囊形成30-31
• 2.5 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001抑制PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路31-32
• 2.6 NVP-BKM120聯(lián)合NVP-RAD001抑制干細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)32-34
• 討論34-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明43-44
• 綜述 NVP-BKM120在乳腺癌治療中的研究進(jìn)展44-53
• 綜述參考文獻(xiàn)50-53
• 致謝53-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷54

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本文編號(hào)：1045055