本文關(guān)鍵詞：沉默hARD1基因?qū)?-Fu抑制大腸癌SW620細(xì)胞株增殖的影響

  更多相關(guān)文章： hARD1 RNA干擾 5-Fu 大腸癌 細(xì)胞增殖

【摘要】：研究目的：本研究探討在人大腸癌細(xì)胞系SW620中,抑制hARD1的表達(dá)后,5-Fu抑制細(xì)胞增殖的效果是否受到影響,從而為基因治療配合化療的大腸癌治療方法提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法：1. SW620、siRNA-SW620和siCON-SW620三株細(xì)胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)。2.應(yīng)用Q-PCR法檢測(cè)siRNA干擾效率及用5-Fu刺激后的ARD 1表達(dá)情況。3.采用MTT法檢測(cè)使用5-Fu刺激后細(xì)胞的增殖情況。4.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)三株細(xì)胞使用5-Fu刺激后細(xì)胞周期變化情況。5.進(jìn)行細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)來觀察三組細(xì)胞用5-Fu刺激后遷移能力的變化。6.進(jìn)行Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)來觀察三組細(xì)胞用5-Fu刺激后侵襲能力的變化。7.應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示；兩組均數(shù)的比較用t檢驗(yàn)；多組均數(shù)的比較用單因素方差分析；方差不齊時(shí)先進(jìn)行變量轉(zhuǎn)換,再行分析。顯著性水準(zhǔn)α=0.05。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1. SW620、siRNA-SW620和siCON-SW620三株細(xì)胞培養(yǎng)成功且生長(zhǎng)狀態(tài)良好；2. Q-PCR法檢測(cè)細(xì)胞ARD1表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)干擾穩(wěn)定的siRNA-SW620細(xì)胞的mRNA水平降低,與原始細(xì)胞比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用不同濃度5-Fu刺激后并不影響siRNA對(duì)SW620細(xì)胞ARD1的沉默效果。3.采用MTT法檢測(cè)5-Fu作用后細(xì)胞增殖的情況,發(fā)現(xiàn)沉默hARDl使5-Fu抑制SW620細(xì)胞增殖的效果增強(qiáng)。4.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)三株細(xì)胞應(yīng)用5-Fu刺激后細(xì)胞周期變化情況,發(fā)現(xiàn)當(dāng)5-Fu低濃度時(shí)可使G0/G1細(xì)胞比例升高,高濃度時(shí)誘導(dǎo)凋亡。5.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,RNA干擾后細(xì)胞遷移能力降低,用5-Fu刺激三株細(xì)胞后細(xì)胞的遷移能力較未用5-Fu刺激明顯下降,抑制ARD1的表達(dá)可和5-Fu協(xié)同降低細(xì)胞的遷移能力。6. Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,RNA干擾SW620 ARD1表達(dá)后細(xì)胞的侵襲能力下降,5-Fu作用SW620細(xì)胞后細(xì)胞侵襲能力下降,5-Fu作用ARD1被沉默的SW620細(xì)胞后細(xì)胞的侵襲能力下降更明顯。結(jié)論：1.5-Fu降低了大腸癌細(xì)胞ARD1 mRNA的表達(dá)量。2. shRNA沉默ARD1后可提高5-Fu抑制大腸癌SW620細(xì)胞增殖的效果,增加了大腸癌對(duì)化療藥物5-Fu的敏感性。3. shRNA沉默ARD1基因后,聯(lián)合5-Fu低濃度作用可以阻滯大腸癌細(xì)胞的細(xì)胞周期于G0/G1期,而聯(lián)合5-Fu高濃度則誘導(dǎo)了大腸癌細(xì)胞的凋亡。4. shRNA干擾ARD1后可以與5-Fu協(xié)同降低SW620細(xì)胞的遷移能力。5. shRNA干擾ARD1后可以與5-Fu協(xié)同降低SW620細(xì)胞的侵襲能力。
【關(guān)鍵詞】：hARD1 RNA干擾 5-Fu 大腸癌 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞9-11
• 引言11-14
• 實(shí)驗(yàn)材料及方法14-26
• 結(jié)果26-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 文獻(xiàn)綜述46-53
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章情況53-54
• 致謝54

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