本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍對膀胱癌增殖的抑制作用及機制研究

  更多相關(guān)文章： 二甲雙胍 膀胱癌 AMP激活的蛋白激酶 細(xì)胞周期 細(xì)胞周期蛋白D1 血管內(nèi)皮生長因子

【摘要】：目的:初步探討降糖藥物二甲雙胍對膀胱腫瘤細(xì)胞的抑制作用及其相關(guān)機制。方法:1.采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑盒分析二甲雙胍對膀胱腫瘤細(xì)胞增殖的影響;2.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測二甲雙胍對細(xì)胞周期的影響。3.通過免疫印跡方法檢測相關(guān)蛋白確定可能參與其中的信號分子;4.裸鼠右側(cè)腋窩皮下接種膀胱癌T24細(xì)胞,以建立膀胱癌的裸鼠皮下移植瘤模型;藥物處理組將二甲雙胍以200mg/kg/day注射裸鼠腹腔內(nèi),觀察其對裸鼠食量、體重和膀胱癌皮下移植瘤的影響。5.應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測膀胱癌皮下移植瘤細(xì)胞內(nèi)Ki67、VEGF、CD31表達的影響。結(jié)果:1.在各時間點(24小時,48小時,72小時)二甲雙胍處理組與對照組相比膀胱腫瘤細(xì)胞的增殖受到明顯抑制(P0.01或P0.05);2.與對照組比較,二甲雙胍處理組G0/G1期細(xì)胞比例上升,S期細(xì)胞比例下降(P0.01或P0.05)。3.免疫蛋白印跡發(fā)現(xiàn),二甲雙胍處理組中的磷酸化AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)表達升高,同時細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表達下降(P0.01或P0.05)。4.二甲雙胍顯著抑制膀胱癌皮下移植瘤的生長并減輕瘤重,裸鼠體重和飲食情況并未受到影響;5.二甲雙胍處理組移植瘤內(nèi)Ki67、VEGF和CD31陽性比例較對照組下降。結(jié)論:1.體外實驗中二甲雙胍能夠明顯抑制膀胱腫瘤細(xì)胞的增殖,通過下調(diào)cyclin D1的表達誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯于G0/G1期。2.體內(nèi)實驗中,二甲雙胍抑制膀胱癌移植瘤的生長和成血管作用。這些結(jié)果表明二甲雙胍可能成為治療膀胱癌的潛在藥物。
【關(guān)鍵詞】：二甲雙胍 膀胱癌 AMP激活的蛋白激酶 細(xì)胞周期 細(xì)胞周期蛋白D1 血管內(nèi)皮生長因子
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略詞10-11
• 前言11-14
• 第一部分 二甲雙胍對膀胱癌細(xì)胞體外增殖的作用和機制研究14-32
• 1 材料和方法14-24
• 1.1 實驗材料14-16
• 1.1.1 細(xì)胞株14
• 1.1.2 實驗試劑14-15
• 1.1.3 主要實驗儀器15-16
• 1.2 實驗方法16-23
• 1.2.1 主要試劑的配制16-17
• 1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 1.2.3 CCK-8 檢測二甲雙胍對膀胱癌細(xì)胞體外增殖的影響18-19
• 1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期19
• 1.2.5 Western blot檢測相關(guān)蛋白19-23
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理23-24
• 2 結(jié)果24-27
• 2.1 二甲雙胍抑制膀胱腫瘤細(xì)胞的增殖24-25
• 2.2 二甲雙胍誘導(dǎo)膀胱腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)G0/G1周期阻滯25-26
• 2.3 二甲雙胍激活膀胱癌細(xì)胞中的AMPK并下調(diào)cyclin D1蛋白的表達26-27
• 3 討論27-31
• 4 結(jié)論31-32
• 第二部分 二甲雙胍抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤生長及血管化的研究32-49
• 1 材料和方法32-40
• 1.1 實驗材料32-34
• 1.1.1 細(xì)胞株32
• 1.1.2 實驗動物來源及飼養(yǎng)條件32
• 1.1.3 主要實驗儀器32-33
• 1.1.4 主要試劑及材料33-34
• 1.2 實驗方法34-40
• 1.2.1 膀胱癌細(xì)胞株T24的復(fù)蘇和培養(yǎng)34
• 1.2.2 膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型的構(gòu)建以及二甲雙胍的干預(yù)34-35
• 1.2.3 制作組織蠟塊35-36
• 1.2.4 HE染色操作步驟36-37
• 1.2.5 免疫組織化學(xué)染色法檢測裸鼠皮下移植瘤中相關(guān)蛋白的表達37-40
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)分析40
• 2 結(jié)果40-46
• 2.1 裸鼠皮下膀胱癌移植瘤模型的建立40-41
• 2.2 二甲雙胍對荷瘤裸鼠一般狀況的影響41-42
• 2.3 二甲雙胍對膀胱癌裸鼠皮下移植瘤體積及重量的影響42-43
• 2.4 膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的組織形態(tài)學(xué)特征43-44
• 2.5 二甲雙胍抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤Ki67、VEGF和CD31的表達44-46
• 3 討論46-48
• 4 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-59
• 附錄 二甲雙胍在腫瘤治療中的研究進展59-70
• 致謝70-72
• 在讀期間發(fā)表論文72

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