本文關(guān)鍵詞：IL-18與IL-2協(xié)同誘導(dǎo)人外周血NK細(xì)胞殺傷功能和NKG2D表達(dá)的研究

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【摘要】：研究背景及目的自然殺傷(Natural killer, NK)細(xì)胞是機(jī)體主要的效應(yīng)淋巴細(xì)胞,可清除體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞并抵御病毒、細(xì)菌等的入侵,發(fā)揮天然免疫監(jiān)視功能。腫瘤患者體內(nèi)NK細(xì)胞數(shù)量及活性降低與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),是腫瘤免疫逃逸的關(guān)鍵因素。通過(guò)激活內(nèi)源性NK細(xì)胞或?qū)Ⅲw外活化的NK細(xì)胞進(jìn)行過(guò)繼性轉(zhuǎn)移,有望增強(qiáng)癌癥患者機(jī)體免疫能力,對(duì)改善臨床預(yù)后和提高存活率具有重要意義。NK細(xì)胞活性受大量細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。白細(xì)胞介素-18(Interleukin-18, IL-18)是一種多功能細(xì)胞因子,強(qiáng)烈誘導(dǎo)NK細(xì)胞分泌IFN-y并促進(jìn)NK細(xì)胞的活化,從而影響NK細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)。當(dāng)IL-18聯(lián)合其他細(xì)胞因子如IL-12或IL-15體外刺激NK細(xì)胞時(shí),對(duì)NK細(xì)胞的增殖、細(xì)胞毒性以及INF-γ分泌能力呈現(xiàn)更為顯著的增強(qiáng)效應(yīng)。白細(xì)胞介素-2(Interleukin-2, IL-2)曾被廣泛應(yīng)用于惡性腫瘤免疫治療,然而大劑量IL-2使用所引起的嚴(yán)重并發(fā)癥極大地限制了其在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用價(jià)值。目前,國(guó)際上研究熱點(diǎn)是將IL-2與其他細(xì)胞因子聯(lián)合應(yīng)用,以降低IL-2的不良反應(yīng)。臨床研究發(fā)現(xiàn),將重組人IL-18應(yīng)用于進(jìn)展期癌癥患者時(shí),與其他細(xì)胞因子相比,IL-18具有極少的毒副作用,且其發(fā)揮生物學(xué)活性的安全劑量范圍更廣。IL-18與IL-2聯(lián)合應(yīng)用有望成為增強(qiáng)NK細(xì)胞抗腫瘤效應(yīng)的有效策略,但目前IL-18聯(lián)合IL-2對(duì)NK細(xì)胞的具體調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察IL-18和IL-2聯(lián)合誘導(dǎo)的人外周血NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性及其表面活化性受體NKG2D表達(dá)情況,探究IL-18和IL-2對(duì)NK細(xì)胞的協(xié)同誘導(dǎo)活化作用,并初步分析其調(diào)節(jié)機(jī)制,為腫瘤免疫治療提供新的思路和理論依據(jù)。研究方法Ficoll-Hypaque密度梯度離心法從肝素抗凝的人外周靜脈全血中無(wú)菌分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)。不同濃度的重組人IL-18(0,100,200 ng/m1)和重組人IL-2(0,100,200 U/ml)體外聯(lián)合誘導(dǎo)新鮮分離的人PBMCs 48 h,實(shí)驗(yàn)分為IL-18和IL-2聯(lián)合處理組、IL-18單獨(dú)處理組、IL-2單獨(dú)處理組以及對(duì)照組(未經(jīng)細(xì)胞因子處理)。三色熒光-流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測(cè)CD107a陽(yáng)性NK細(xì)胞比率以評(píng)估NK細(xì)胞對(duì)人白血病細(xì)胞K562和人結(jié)腸癌細(xì)胞HT29的殺傷活性。同樣方法檢測(cè)活化性受體NKG2D在NK細(xì)胞表面的表達(dá)水平變化。結(jié)果1.IL-18和IL-2聯(lián)合誘導(dǎo)新鮮分離的人PBMCs48 h后,CD107a陽(yáng)性NK細(xì)胞比率顯著升高,明顯高于IL-18或IL-2單獨(dú)處理組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),提示NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞K562和HT29的殺傷活性顯著增強(qiáng)。2.不同的細(xì)胞因子刺激后,各實(shí)驗(yàn)組CD3-CD56+NK細(xì)胞占淋巴細(xì)胞群的百分比無(wú)顯著性差異(P0.05),提示IL-18與IL-2聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人NK細(xì)胞的增殖無(wú)明顯促進(jìn)作用。3.新鮮分離的人PBMCs經(jīng)IL-18(200 ng/m1)和IL-2(100 U/m1)刺激48 h后,流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示,與單一應(yīng)用IL-18或IL-2相比,IL-18和IL-2聯(lián)合處理組NK細(xì)胞表面NKG2D受體表達(dá)水平明顯提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.細(xì)胞因子刺激過(guò)的人PBMCs經(jīng)抗NKG2D中和抗體處理1h以阻斷NKG2D介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)后,IL-18聯(lián)合IL-2對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性的上調(diào)作用被大大削弱,提示IL-18和IL-2對(duì)NK細(xì)胞毒活性的協(xié)同誘導(dǎo)作用在一定程度上依賴于NKG2D受體途徑。結(jié)論IL-18聯(lián)合IL-2可顯著增強(qiáng)人外周血NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性,并促進(jìn)其表面活化性受體NKG2D的表達(dá)；IL-18與IL-2對(duì)NK細(xì)胞毒活性的協(xié)同誘導(dǎo)作用在一定程度上是通過(guò)NKG2D受體途徑實(shí)現(xiàn)的。我們的研究為腫瘤免疫治療提供了新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù),IL-18和IL-2聯(lián)合療法有望成為腫瘤免疫治療的一種新手段。
【關(guān)鍵詞】：白細(xì)胞介素-18 白細(xì)胞介素-2 自然殺傷細(xì)胞 NKG2D 細(xì)胞毒活性
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.43
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-13
• 前言13-18
• 材料與方法18-25
• 結(jié)果25-27
• 討論27-33
• 結(jié)論33-34
• 附圖34-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 致謝45-46
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文46-47
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 遠(yuǎn)麗芳;蘇文;王艷峰;宋東;田志華;韓福才;;肺癌患者外周血NKG2A和NKG2D表達(dá)及其臨床意義的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2011年24期

2 李曉紅;馬健;吳曉雄;李猛;汪菲菲;達(dá)萬(wàn)明;于力;高春記;;IL2、IL12、IL15的不同組合對(duì)人外周血源NK細(xì)胞功能的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2009年04期

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本文編號(hào)：1040038