發(fā)布時間：2017-10-15 19:34

  本文關(guān)鍵詞：檢測膀胱癌患者尿液中microRNA-126的電化學(xué)生物傳感器的制備

  更多相關(guān)文章： MicroRNA-126 聚酰胺-金-銀 肽核酸 石墨烯 電化學(xué)傳感器

【摘要】：MicroRNA已經(jīng)成為癌癥早期篩查中的一種主要生物標(biāo)志物,因其存在于患者的唾液,尿液和其他分泌液中,便于早期,穩(wěn)定,無創(chuàng)性檢查。尿液中microRNA-126的濃度變化和膀胱癌的發(fā)生有密切關(guān)系。因此,尋找一種理想的方法檢測尿液中microRNA-126的濃度,對早期診斷膀胱癌有著非常重要的意義。microR-126在膀胱移行細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率顯著低于癌旁組織和正常膀胱組織,microR-126可能作為重要的抑癌基因參與膀胱移行細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展過程,并可能是膀胱癌轉(zhuǎn)移的潛在標(biāo)志。目前用于microRNA的方法操作繁瑣,靈敏度低,且不能進(jìn)行定量檢測。本研究利用玻碳電極表面修飾石墨烯,聚酰胺-金-銀納米材料制成的生物傳感器直接檢測尿液中的microRNA-126。并對傳感器的重復(fù)性,穩(wěn)定性和選擇性進(jìn)行分析。1.電極表面材料的修飾：殼聚糖分散的石墨烯固定在玻碳電極表面,增強(qiáng)了傳感器的導(dǎo)電性,促進(jìn)電極進(jìn)一步修飾聚酰胺-金-銀納米材料的穩(wěn)定性。2.發(fā)夾結(jié)構(gòu)的捕獲探針的固定：聚酰胺-金-銀(PAMAM-Au-Ag)納米材料提供充足的表明結(jié)合位點(diǎn)和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的捕獲探針(肽核酸PNA)結(jié)合,從而進(jìn)一步和目標(biāo)鏈雜化固定。3.酶催化底物反應(yīng)和信號放大：捕獲探針和目標(biāo)鏈結(jié)合后,打開的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的另一端和信號探針結(jié)合,信號探針末端修飾有地高辛,當(dāng)加入anti-digoxin/HRP時,HRP可以催化底物過氧化氫發(fā)生氧化還原反應(yīng),從而產(chǎn)生電子傳遞信號。4.傳感器檢測的條件優(yōu)化：捕獲探針和信號探針的濃度；酶的濃度比例；過氧化氫的濃度。5.傳感器的性能考察：標(biāo)準(zhǔn)曲線制定；重復(fù)性,選擇性和穩(wěn)定性分析。本研究得到如下結(jié)果：1.紫外可見光分析聚酰胺-金-銀納米材料的性能,并比較PAMAM-Au納米材料、PAMAM-Ag納米材料和PAMAM-Au-Ag納米材料的導(dǎo)電性質(zhì)。掃描和透射電鏡證實(shí)傳感器的修飾成功。循環(huán)伏安曲線和電化學(xué)阻抗圖譜表征傳感器的修飾過程,表明導(dǎo)電材料對玻碳電極的修飾增加了氧化還原過程中電子的傳遞效率。2.差分脈沖法用于檢測目標(biāo)物加入后,酶催化下最后產(chǎn)生的電流變化,根據(jù)電流隨濃度的變化從而制定標(biāo)準(zhǔn)曲線。此傳感器檢測的目標(biāo)物濃度是1.0 fM到10 nM范圍內(nèi)呈現(xiàn)線性相關(guān),回歸方程式為I(μA)=5.336 log[C/M]+99.102 (R2=0.985),計(jì)算得到檢測下限為0.79 fM(S/N=3)。3.該傳感器性能優(yōu)越：批間差異小于3.0%；選擇性好,最大干擾差異僅為2.8%；穩(wěn)定性好,儲存2個月后,相應(yīng)電流僅下降了8.0%。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,殼聚糖分散的石墨烯修飾在玻碳電極表面增加了電子傳遞能力,聚酰胺-金-銀納米材料可以大大增加捕獲探針的結(jié)合位點(diǎn)并提高電子傳遞效率。因此,和傳統(tǒng)的傳感器相比,本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的傳感器具有更寬的檢測范圍,低檢測限,高靈敏度。有望在臨床實(shí)際標(biāo)本中檢測尿液中的microRNA-126,從而為臨床診斷膀胱癌提供可信的輔助支撐。
【關(guān)鍵詞】：MicroRNA-126 聚酰胺-金-銀 肽核酸 石墨烯 電化學(xué)傳感器
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 符號說明5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 1 實(shí)驗(yàn)部分16-18
• 1.1 試劑與儀器16-17
• 1.2 納米復(fù)合物PAMAM-Au-Ag的合成17
• 1.3 電化學(xué)生物傳感器的制備17-18
• 1.4 生物傳感器對microRNA-126的檢測18
• 2 結(jié)果與分析18-29
• 2.1 不同納米材料的表征18-20
• 2.2 不同修飾電極的電化學(xué)表征20-22
• 2.3 生物傳感器的電化學(xué)性能22-24
• 2.4 生物傳感器對microRNA-126的電化學(xué)檢測24-25
• 2.5 生物傳感器的性能評價25-26
• 2.6 實(shí)際樣品檢測26-29
• 全文總結(jié)29-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 文獻(xiàn)綜述34-51
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士期間科研成果及發(fā)表的論文52

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本文編號：1038222