本文關(guān)鍵詞：沉默F(xiàn)EN1增強(qiáng)CDDP對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞化療的敏感性

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【摘要】：背景：瓣?duì)詈怂醿?nèi)切酶1(FEN1)在DNA復(fù)制和修復(fù)中起關(guān)鍵作用,許多研究證實(shí)其表達(dá)水平與癌癥的發(fā)展和預(yù)后相關(guān)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)FEN1的表達(dá)水平與胃癌患者的預(yù)后及發(fā)展相關(guān)；同時(shí)發(fā)現(xiàn)下調(diào)FEN1,可抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞的生長和促進(jìn)細(xì)胞凋亡,意味著FEN1可能會(huì)成為治療胃癌的潛在靶點(diǎn)。而且,已有研究表明FEN1的抑制劑可增強(qiáng)DNA烷化劑化療的敏感性。這些結(jié)果提示了FEN1可能會(huì)成為增強(qiáng)DNA烷化劑等化療藥臨床治療的一個(gè)有效靶點(diǎn)。然而,關(guān)于FEN1與CDDP之間的具體關(guān)系,還缺乏更深層次的研究。本課題擬在前期工作基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究FEN1是否可作為增強(qiáng)CDDP對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞化療敏感性的靶點(diǎn),為FEN1作為胃癌個(gè)性化、靶向性治療的新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支持。目的：探討利用RNA干擾技術(shù)特異性沉默胃癌SGC-7901細(xì)胞的FEN1對(duì)CDDP化療敏感性的影響。方法：1.以CDDP作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)FEN1的表達(dá),通過Western-blot驗(yàn)證FEN1的表達(dá)水平,探討CDDP是否可誘導(dǎo)FEN1的表達(dá)上調(diào)。2.使用實(shí)驗(yàn)前期成功構(gòu)建的特異性FEN1-siRNA靶向序列：NC-siRNA及未轉(zhuǎn)染組(Untransfected組)作為對(duì)照組,Western-blot方法檢測轉(zhuǎn)染胃癌SGC-7901細(xì)胞后的FEN1蛋白表達(dá)以期檢測抑制率。3.MTT法分別檢測FEN1-siRNA+CDDP實(shí)驗(yàn)組、NC-siRNA+CDDP及Untransfected+CDDP組對(duì)照組胃癌SGC-7901細(xì)胞的生長增殖活性。即在不同的實(shí)驗(yàn)分組中分別予以不同濃度CDDP和10μM CDDP予以不同時(shí)間間隔處理。4.利用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組、NC-siRNA+CDDP處理組及Untransfected+CDDP處理組的胃癌SGC-7901細(xì)胞株的細(xì)胞凋亡率變化；同時(shí)利用Western Blot方法檢測各組Bcl-2、 Bcl-xl和Bax的蛋白表達(dá)水平變化。結(jié)果：1. Western Blot結(jié)果顯示FEN1的蛋白表達(dá)水平隨著CDDP的濃度增加(0,10,20,30,40,50 μMCDDP處理48 h)及時(shí)間延長(30μ M CDDP處理時(shí)間為24 h,48 h和72 h)而呈依賴性增加(P0.05)。2. Western-blot方法檢測結(jié)果顯示,試驗(yàn)組FEN1-siRNA組細(xì)胞中的FEN1的蛋白表達(dá)明顯低于NC-siRNA及Untransfected兩個(gè)對(duì)照組(P0.05)。3.MTT法結(jié)果顯示FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組的胃癌SGC-7901細(xì)胞株在不同的CDDP濃度(0,2.5,5,10,20,30,40和50μM)和10μMCDDP予以不同時(shí)間(24 h,48和72 h)處理的條件下,其細(xì)胞生存率均明顯低于NC-siRNA+CDDP及Untransfected+CDDP兩個(gè)對(duì)照組(P0.05)。4.流式檢測結(jié)果顯示,FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組的胃癌SGC-7901細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率顯著高于NC-siRNA+CDDP及Untransfected+CDDP兩個(gè)對(duì)照組(P0.05)。同時(shí),Western-blot方法結(jié)果顯示,在FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組中,其Bcl-2及Bcl-xl的蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組；相反,Bax蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論：在CDDP的誘導(dǎo)條件下,FENl的蛋白表達(dá)水平顯著地被上調(diào),即FEN1上調(diào)蛋白表達(dá)水平與CDDP呈明顯的劑量-時(shí)間依賴關(guān)系。在CDDP的處理下,沉默F(xiàn)EN1可明顯降低胃癌SGC-7901細(xì)胞生存率及增加細(xì)胞凋亡率。同時(shí),在FEN1-siRNA+CDDP試驗(yàn)組中,其Bcl-2及Bcl-xl的蛋白表達(dá)水平明顯降低；而Bax的蛋白表達(dá)水平明顯升高。因此,本研究提供了一種潛在的可能的抗胃癌化療靶點(diǎn)的機(jī)制：沉默F(xiàn)EN1可能增強(qiáng)CDDP對(duì)SGC-7901細(xì)胞治療的敏感性。
【關(guān)鍵詞】：FEN1 胃癌 siRNA CDDP 敏感性
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 1. 材料與方法14-22
• 3. 結(jié)果22-28
• 4. 討論28-32
• 全文總結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 文獻(xiàn)綜述38-49
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文50

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