發(fā)布時間：2017-10-15 01:40

  本文關(guān)鍵詞：C1QBP在腎癌發(fā)展進(jìn)程中的作用

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【摘要】：目的:腎癌在泌尿系統(tǒng)腫瘤中很常見,在我國有很高的發(fā)病率,是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病。而腫瘤的發(fā)展與腫瘤細(xì)胞的增殖、趨化、侵襲以及黏附能力均有重要關(guān)系。腎癌靶向治療尚有許多未知領(lǐng)域需要進(jìn)一步探索。因此,目前亟需進(jìn)一步探討腎癌的發(fā)展機(jī)制并探索新的生物靶點。以往的研究顯示C1QBP在多種惡性腫瘤中的表達(dá)增多,同時也有報道顯示C1QBP在宮頸癌中低表達(dá),說明C1QBP在腫瘤中的表達(dá)及對腫瘤生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)有組織特異性,但目前有關(guān)C1QBP在腎癌中的研究尚未見報道。因此,本研究將檢測C1QBP在腎癌中的表達(dá)情況,探討C1QBP在腎癌發(fā)展中對腎癌細(xì)胞增殖、趨化、侵襲以及黏附能力的影響,初步明確C1QBP在腎癌發(fā)展中的作用。方法:采用Western Blotting、Realtime PCR、免疫組化的方法比較C1QBP在腎癌及癌旁組織中的表達(dá)水平;統(tǒng)計學(xué)分析C1QBP表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。應(yīng)用Realtime PCR的方法檢測C1QBP在正常腎上皮細(xì)胞和腎癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平。應(yīng)用慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)構(gòu)建C1QBP穩(wěn)定降表達(dá)的人腎癌786-0細(xì)胞系,用Western Blotting和Realtime PCR的方法驗證C1QBP表達(dá)水平。通過CCK8實驗、趨化運(yùn)動實驗、Matrigel侵襲實驗和細(xì)胞黏附實驗分別檢測C1QBP降表達(dá)對人腎癌786-0細(xì)胞系的增殖能力、EGF誘導(dǎo)的趨化運(yùn)動能力、侵襲能力和EGF誘導(dǎo)的黏附能力的影響。通過基因芯片檢測,分析C1QBP降表達(dá)對人腎癌786-0細(xì)胞系基因表達(dá)的影響,Realtime PCR驗證差異基因表達(dá)。通過Western Blotting檢測分析C1QBP調(diào)控腎癌黏附功能的分子機(jī)制。SCID小鼠體內(nèi)實驗研究C1QBP降表達(dá)對人腎癌786-0細(xì)胞系生長和轉(zhuǎn)移的影響,并通過免疫組化檢測C1QBP降表達(dá)對增殖相關(guān)抗原PCNA表達(dá)水平的影響。結(jié)果:1.腎癌組織中C1QBP的RNA及蛋白表達(dá)量低于癌旁組織,且C1QBP表達(dá)與患者臨床組織學(xué)分期和術(shù)后生存率顯著相關(guān)。2.C1QBP在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)低于腎上皮細(xì)胞,且隨著腎癌細(xì)胞惡性程度的增加C1QBP表達(dá)逐漸降低。3.應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)成功建立C1QBP穩(wěn)定降表達(dá)的腎癌786-0細(xì)胞系,Western Blotting和Realtime PCR驗證C1QBP蛋白和基因表達(dá)均明顯下降。4.C1QBP降表達(dá)的腎癌786-0細(xì)胞系與對照組相比增殖能力、EGF誘導(dǎo)的趨化運(yùn)動能力、細(xì)胞侵襲能力和EGF誘導(dǎo)的黏附能力均明顯增強(qiáng)。5.通過基因芯片分析,C1QBP敲除會影響細(xì)胞黏附相關(guān)基因的表達(dá),通過Realtime PCR進(jìn)一步檢測了8個與黏附相關(guān)的基因,其中L1CAM在786-0-shC1QBP細(xì)胞中的表達(dá)顯著增加。6.C1QBP敲除后腎癌細(xì)胞中β-catenin表達(dá)增高,GSK3蛋白磷酸化水平也增高。7.C1QBP降表達(dá)促進(jìn)種植瘤生長和轉(zhuǎn)移,并且種植瘤中PCNA表達(dá)明顯高于對照組。結(jié)論:1.與癌旁組織相比,C1QBP在腎癌組織標(biāo)本中表達(dá)較低,且與腫瘤病人的組織學(xué)分期和術(shù)后生存率相關(guān),此外隨著腫瘤細(xì)胞惡性程度增高C1QBP表達(dá)水平降低。2.通過降低C1QBP的表達(dá),可以促進(jìn)腎癌細(xì)胞的增殖、趨化、侵襲能力。3.C1QBP降表達(dá)可以增強(qiáng)腎癌細(xì)胞的黏附能力,可能是通過激活Wnt通路相關(guān)蛋白,上調(diào)LICAM發(fā)揮生物學(xué)作用。4.C1QBP降表達(dá)可以促進(jìn)腎癌細(xì)胞在免疫缺陷小鼠體內(nèi)的增殖能力和轉(zhuǎn)移能力,表明C1QBP是調(diào)節(jié)腎癌發(fā)展的一個非常關(guān)鍵的因子。C1QBP不但可以成為腎癌診斷和預(yù)后的新的標(biāo)記物,更有望為腎癌的治療提供新的分子靶點。
【關(guān)鍵詞】：C1QBP 腎癌 增殖 趨化運(yùn)動 侵襲 黏附
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-18
• 研究現(xiàn)狀、成果11-16
• 研究目的、方法16-18
• 對象和方法18-41
• 結(jié)果41-52
• 討論52-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明63-64
• 綜述 C1QBP在感染炎癥和癌癥中的作用64-79
• 綜述參考文獻(xiàn)73-79
• 致謝79-80
• 個人簡歷80

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本文編號：1034361