本文關鍵詞：ARNT2在人胃癌中的表達及對細胞增殖的影響

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【摘要】：胃癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一,雖然其發(fā)病率在某些發(fā)達國家有所下降,但在我國惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率中依然位于前三。胃癌的發(fā)生及發(fā)展過程中常存在轉(zhuǎn)錄因子的異常改變,而轉(zhuǎn)錄因子對基因的表達調(diào)控在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮十分重要的作用,通過對這一現(xiàn)象的深入研究可從基因水平上提高胃癌的診斷及治療。芳香烴受體核易位蛋白2(aryl hydrocarbon-receptor nuclear translocator, ARNT2)是一種細胞核內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子,屬于bHLH轉(zhuǎn)錄因子超家族中新發(fā)現(xiàn)的PAS(Per-ARNT-Sim)亞家族,主要在腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)中表達。以往對ARNT2的研究多集中于其在胚胎發(fā)育的血管形成以及神經(jīng)發(fā)育過程中的作用,而近年來的研究表明,ARNT2也參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。乳腺癌中ARNT2高表達是乳腺癌預后的保護性因素。ARNT2在非小細胞肺癌中的表達水平明顯低于癌旁正常肺粘膜組織,而其在肝細胞癌中的表達情況卻與之相反,由此可見,ARNT2在腫瘤中的表達存在組織特異性,因此有必要研究其在胃癌中的具體表達情況及在胃癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的具體作用。目的1.檢測ARNT2在人正常胃粘膜上皮細胞及胃癌細胞中的表達,并比較兩者差異；檢測ARNT2在人胃癌組織及癌旁正常胃粘膜組織中的表達,比較兩者差異并分析ARNT2在胃癌中的表達水平與臨床病理參數(shù)及預后之間的關系,探討其在臨床中的應用價值。2.檢測ARNT2過表達后胃癌細胞增殖能力及抗凋亡分子Survivin及bcl-2的表達的變化,明確ARNT2對胃癌細胞增殖能力的影響并探討其具體作用機制。方法1.運用qRT-PCR和Western blot檢測ARNT2在正常胃粘膜細胞株及多種胃癌細胞株中mRNA及蛋白的表達水平。2.通過免疫組織化學染色法檢測89例胃癌組織及相應癌旁正常胃粘膜組織中ARNT2的表達情況。3.構(gòu)建ARNT2過表達質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染胃癌細胞株BGC-823、MGC-803,熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染效率,qRT-PCR和Western blot檢測ARNT2過表達情況。4.采用CCK-8實驗觀察ARNT2過表達對胃癌細胞增殖能力的影響。5.運用Western blot檢測ARNT2過表達后抗凋亡分子Survivin及bcl-2的表達變化。結(jié)果1. qRT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示,4種不同胃癌細胞中ARNT2的表達水平均明顯低于正常胃粘膜上皮細胞,且差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05)2.免疫組織化學染色法檢測結(jié)果顯示,ARNT2在胃癌組織及相應癌旁正常胃粘膜組織中的陽性表達率分別為44.94%、79.78%,差異顯著且有統(tǒng)計學意義(P0.05)。ARNT2在胃癌中的表達水平與患者的性別、腫瘤的類型、分化程度及浸潤深度相關(P0.05),與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期無關(P0.05),并且ARNT2高表達患者的總生存期遠高于低表達患者,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)3.熒光顯微鏡檢測結(jié)果顯示,胃癌細胞株BGC-823、MGC-803的ARNT2的空載及過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率均達70%以上；qRT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示ARNT2過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兩株胃癌細胞后可明顯提高ARNT2的表達水平(P0.05)4.CCK-8實驗結(jié)果顯示,ARNT2過表達的胃癌細胞增殖能力低于轉(zhuǎn)染空載體組(P0.05),表明ARNT2可抑制胃癌細胞的增殖。5. Western blot檢測結(jié)果顯示,ARNT2過表達的胃癌細胞其抗凋亡分子Survivin及bcl-2的表達水平均下降。結(jié)論不同胃癌細胞株中ARNT2 mRNA及蛋白的表達水平均低于正常胃粘膜上皮細胞株,并且ARNT2在胃癌組織中的表達水平也顯著低于癌旁正常胃粘膜組織,兩者結(jié)果一致;腫瘤分化程度越高,浸潤深度越淺,生存期越長,ARNT2表達水平越高；ARNT2過表達的胃癌細胞增殖能力明顯減弱,且抗凋亡分子Survivin及bcl-2的表達水平均明顯下降,以上實驗結(jié)果均提示ARNT2可能作為抑癌基因影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
【關鍵詞】：芳香烴受體核易位蛋白2 胃癌 轉(zhuǎn)錄因子 細胞增殖
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-14
• 前言14-16
• 第一部分 ARNT2在人胃癌中的表達及臨床意義16-28
• 材料與方法16-25
• 實驗結(jié)果25-26
• 討論26-28
• 第二部分 ARNT2過表達對胃癌細胞增殖的影響28-42
• 材料與方法28-38
• 實驗結(jié)果38-40
• 討論40-42
• 結(jié)論42-43
• 附：圖表43-51
• 參考文獻51-55
• 致謝55-56
• 攻讀學位期間發(fā)表的文章及參與的課題56-57
• 學位論文評閱及答辯情況表57

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本文編號：1030228