發(fā)布時(shí)間：2017-10-13 03:05

  本文關(guān)鍵詞：胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中Vav1表達(dá)及與腫瘤耐藥關(guān)系的研究

  更多相關(guān)文章： 進(jìn)展期胃癌 轉(zhuǎn)移淋巴結(jié) Vav1 多藥耐藥 藥敏性

【摘要】：目的:據(jù)統(tǒng)計(jì),世界范圍內(nèi)胃癌位居惡性腫瘤第4位,每年新發(fā)胃癌約90余萬人,死亡約70萬人。我國屬于胃癌的高發(fā)地區(qū),每年新發(fā)胃癌患者人數(shù)約占世界范圍內(nèi)的42%。胃癌患者早期癥狀及體征不明顯,發(fā)現(xiàn)時(shí)多數(shù)已處于進(jìn)展期,甚至晚期,手術(shù)治療輔以化療已經(jīng)成為最常見的治療方式。合理化療可以提高胃癌患者治療療效,并延長生存時(shí)間。腫瘤的多藥耐藥性(Multiple drug resistance,MDR)是影響患者治療療效的關(guān)鍵因素。MDR包括原發(fā)性耐藥和繼發(fā)性耐藥,其作用機(jī)制極度復(fù)雜,由多因素、多步驟參與,并且轉(zhuǎn)移過程中腫瘤耐藥性會(huì)發(fā)生異質(zhì)性改變。通過對(duì)多藥耐藥蛋白1(Multidrug resistance MDR1)/P-糖蛋白(P-glycoprotein P-gp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白1(Multidrug resistance protein 1 MRP1)、胸苷酸合成酶(Thymidylate synthase TS)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(Glutathione-S-transferase GST-π)等多個(gè)耐藥蛋白以及與之相關(guān)的分子機(jī)制的深入研究是逆轉(zhuǎn)化療失敗的關(guān)鍵。因此積極尋找新的胃癌耐藥相關(guān)因子有重要意義。Vav1是一種原癌基因。它具有鳥苷酸交換因子(GEF)活性,屬于Db1家族中的一員,已有研究發(fā)現(xiàn)Vav1在多種惡性腫瘤中有表達(dá),并在腫瘤局部進(jìn)展與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著非常重要的作用,是惡性腫瘤患者預(yù)后不良的標(biāo)志之一。研究發(fā)現(xiàn)[1]Vav1能夠顯著上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的轉(zhuǎn)錄活性,從而使細(xì)胞免于凋亡,Vav1的GEF活性是上調(diào)Bcl-2所必須的。而Bcl-2可通過協(xié)調(diào)P-gp增加腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的耐藥[2],由此可推測Vav1與腫瘤的MDR可能存在較密切關(guān)系。本研究以42例進(jìn)展期胃癌原發(fā)病灶組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織為研究對(duì)象,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,q PCR)檢測Vav1的m RNA在兩種不同胃癌組織中的表達(dá)差異及關(guān)系。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測Vav1、MDR1/P-gp、MRP1、TS、GST-π在胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá),并對(duì)Vav1與四種耐藥蛋白在胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行研究。采用四氮唑藍(lán)法(MTT)檢測不同機(jī)制化療藥(氟尿嘧啶5-FU、足葉乙苷VP-16、紫杉醇PTX、順鉑CDDP、氨甲喋呤MTX)對(duì)胃癌原發(fā)灶和相應(yīng)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)細(xì)胞的抑制情況,并進(jìn)行對(duì)比分析,探討Vav1與胃癌MDR的關(guān)系及意義。方法:收集42例進(jìn)展期患者胃癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)新鮮組織標(biāo)本及相應(yīng)患者的中性甲醛所固定胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織標(biāo)本,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),在m RNA水平檢測Vav1在胃癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá),另采用免疫組織化學(xué)染色法在蛋白水平檢測Vav1及相關(guān)耐藥蛋白(MDR1/P-gp、MRP1、TS、GST-π)在胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)。通過做相關(guān)分析,明確Vav1與腫瘤耐藥相關(guān)蛋白的關(guān)系及意義。采用四氮唑藍(lán)法(MTT)檢測化療藥(氟尿嘧啶5-FU、足葉乙苷VP-16、紫杉醇PTX、順鉑CDDP、氨甲喋呤MTX)對(duì)5組細(xì)胞體外化療藥敏性。所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料應(yīng)用χ~2檢驗(yàn)。相關(guān)性的分析應(yīng)用spearman相關(guān)分析。P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 Vav1蛋白與m RNA在胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)強(qiáng)度差異以及相關(guān)性:Vav1蛋白在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)明顯高于胃癌組織(χ~2=5.927,P=0.015),在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織與胃癌原發(fā)灶組織中Vav1蛋白表達(dá)具有明顯相關(guān)性(r=0.359,P=0.019)。Vav1 m RNA在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)高于胃癌組織(0.379±0.233 vs 0.123±0.081,t=7.818,P=0.000),且二者之間有明顯相關(guān)性(r=0.418,P=0.006)。2 MDR1/P-gp、TS、MRP1、GST-π蛋白在胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)以及相關(guān)關(guān)系:MDR1/P-gp、TS、MRP1、GST-π蛋白在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)明顯高于胃癌組織(χ~2=5.974;χ~2=7.683;χ~2=4.421;χ~2=4.266,P=0.015,P=0.006;P=0.035;P=0.039)。在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織與胃癌原發(fā)灶組織間MDR1/P-gp、MRP1、GST-π蛋白表達(dá)具有明顯的相關(guān)性(r=0.380;r=0.336;r=0.311,P=0.013,P=0.030;P=0.045);在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織與胃癌原發(fā)灶組織中TS蛋白無明顯相關(guān)關(guān)系(r=0.28,P=0.072)。3在胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織蛋白水平Vav1與MDR1/P-gp、TS、MRP1、GST-π間的相關(guān)關(guān)系。胃癌組織中Vav1與MDR1/P-gp、TS、MRP1、GST-π的表達(dá),在蛋白水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.378;r=0.440;r=0.437;r=0.348,P=0.014;P=0.004;P=0.004;P=0.024)。轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中Vav1與MDR1/P-gp、MRP1在蛋白水平的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.365;r=0.335,P=0.017;P=0.030);而Vav1與TS、GST-π在胃癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中蛋白表達(dá)水平無明顯相關(guān)關(guān)系(r=0.229;r=0.023,P=0.136;P=0.883)。4 5-FU、VP-16、PTX、CDDP、MTX在胃癌原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶之間體外化療藥敏性比較胃癌原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的化療藥物抑制率比較,VP-16對(duì)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)瘤細(xì)胞抑制率明顯較原發(fā)灶高(t=-2.28,P=0.025);而5-FU、PTX、CDDP、MTX,對(duì)胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的瘤細(xì)胞抑制率之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-1.23;t=-0.94;t=1.06;t=0.69,P=0.223;P=0.352;P=0.291;P=0.490)。5 Vav1、MDR1/P-gp、TS、MRP1、GST-π蛋白在胃癌原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶表達(dá)與相應(yīng)組織中瘤細(xì)胞體外化療藥敏感性關(guān)系胃癌原發(fā)灶中Vav1弱表達(dá)組對(duì)5-FU、PTX的瘤細(xì)胞抑制率明顯高于強(qiáng)表達(dá)組(t=2.34,t=2.14,P=0.024;P=0.038)。P-gp強(qiáng)表達(dá)組對(duì)5-FU的瘤細(xì)胞抑制率明顯低于弱表達(dá)組,(t=2.71,P=0.010)。TS強(qiáng)表達(dá)組對(duì)5-FU、CDDP的瘤細(xì)胞抑制率明顯低于低表達(dá)組(t=4.40;t=2.19,P=0.000;P=0.019)。MRP1強(qiáng)表達(dá)組對(duì)5-FU、PTX、CDDP的瘤細(xì)胞抑制率明顯低于弱表達(dá)組(t=2.12;t=2.09;t=4.26,P=0.040;P=0.043;P=0.000)。GST-π強(qiáng)表達(dá)組對(duì)5-FU、PTX、CDDP的瘤細(xì)胞抑制率明顯低于弱表達(dá)組(t=2.17;t=2.48;t=2.13,P=0.036;P=0.017;P=0.040)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中Vav1弱表達(dá)組對(duì)5-FU、CDDP的瘤細(xì)胞抑制率明顯高于強(qiáng)表達(dá)組(t=2.10;t=2.37,P=0.042;P=0.023)。P-gp強(qiáng)表達(dá)組對(duì)5-FU、PTX、CDDP的瘤細(xì)胞抑制率明顯低于弱表達(dá)組(t=2.34;t=2.05;t=2.11,P=0.025;P=0.047;P=0.041)。TS強(qiáng)表達(dá)組對(duì)5-FU、PTX的瘤細(xì)胞抑制率明顯低于弱表達(dá)組(t=2.13;t=2.27,P=0.039;P=0.029)。MRP1強(qiáng)表達(dá)組對(duì)5-FU的瘤細(xì)胞抑制率明顯低于弱表達(dá)組(t=3.85,P=0.000)。GST-π強(qiáng)表達(dá)組對(duì)CDDP的瘤細(xì)胞抑制率低于低表達(dá)組(t=3.16,P=0.003)。結(jié)論:1 Vav1蛋白質(zhì)和m RNA在胃癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)水平明顯高于胃癌組織,表明Vav1在胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)病灶之間存在異質(zhì)性,提示Vav1可能參與了胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程,是胃癌進(jìn)展的一個(gè)重要因素。2 MDR1/P-gp、TS、MRP1、GST-π蛋白在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯低于轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)病灶,說明耐藥蛋白在胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中存在異質(zhì)性表達(dá),提示轉(zhuǎn)移病灶耐藥性更強(qiáng)以及有更強(qiáng)的進(jìn)展趨勢。3 胃癌組織的Vav1表達(dá)水平與MDR1/P-gp、MRP1、TS、GST-π呈正相關(guān)性,轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中Vav1表達(dá)水平與MDR1/P-gp、MRP1呈正相關(guān)關(guān)系,提示胃癌組織中Vav1參與的侵襲、轉(zhuǎn)移在疾病進(jìn)展過程可能與胃癌耐藥分子網(wǎng)絡(luò)存在著交叉,或通過某種調(diào)控機(jī)制共同促進(jìn)胃癌的進(jìn)展。4 通過體外藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示胃癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)細(xì)胞對(duì)VP-16敏感性明顯高于原發(fā)灶,而對(duì)5-FU、PTX、CDDP、MTX的藥敏性不同,提示胃癌轉(zhuǎn)移過程中耐藥性發(fā)生了異質(zhì)性改變,以原發(fā)灶的耐藥結(jié)果并不能全面、準(zhǔn)確地推斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的藥敏性。5 在胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)細(xì)胞中MDR1/P-gp、MRP1、TS、GST-π的表達(dá)對(duì)5-FU、VP-16、PTX、CDDP、MTX敏感性不同,提示胃癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中化療藥敏性存在異質(zhì)性改變。只以任何一種MDR相關(guān)因子反映胃癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶的藥敏性均是不全面的。在胃癌原發(fā)灶中Vav1表達(dá)對(duì)5-FU敏感性降低,而在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中對(duì)CDDP的敏感性降低,提示Vav1可能參與了MDR過程,并在某種程度上可預(yù)測MDR,但在胃癌轉(zhuǎn)移過程中耐藥性發(fā)生了改變。對(duì)VP-16、CDDP、MTX敏感性無顯著差異,提示Vav1只是胃癌MDR調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中其中的一個(gè)因素。
【關(guān)鍵詞】：進(jìn)展期胃癌 轉(zhuǎn)移淋巴結(jié) Vav1 多藥耐藥 藥敏性
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要4-9
• ABSTRACT9-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-26
• 結(jié)果26-29
• 附圖29-35
• 附表35-40
• 討論40-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 綜述 Vav1在惡性腫瘤中的表達(dá)及其與腫瘤耐藥的關(guān)系49-64
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 致謝64-65
• 個(gè)人簡歷65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1022443