本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用重組腺病毒35型纖毛突蛋白增強(qiáng)單克隆抗體抗腫瘤的相關(guān)研究

  更多相關(guān)文章： CDC效應(yīng) 西妥昔單抗 卵巢癌 Ad35K++ CD46分子

【摘要】：研究背景與研究目的：腺病毒(Adeno virus, Ad)是一種雙鏈DNA病毒。迄今為止,人們認(rèn)識(shí)的腺病毒多達(dá)57種血清型。根據(jù)不同腺病毒的血凝特性,致癌性,基因分型以及系統(tǒng)發(fā)生分析結(jié)果,腺病毒總共可以分為從A到G七個(gè)亞型。其中B亞型又可以根據(jù)其生物學(xué)特性以及遺傳性狀分為B1和B2亞群,人腺病毒35型(Ad35)屬于其中的B2亞群。Ad35可以通過其C-末端三聚體纖毛突領(lǐng)域的殘端與人細(xì)胞膜表面膜輔助蛋白(membane cofactor protein, MCP, CD46)分子結(jié)合從而感染人體細(xì)胞。單克隆抗體(monoclonal antibodies, mAbs)作為一種新興的腫瘤治療藥物,近年來取得了快速的發(fā)展,引起了人們的廣泛關(guān)注和興趣。西妥昔單抗(Cetuximab)結(jié)構(gòu)為人鼠嵌合型,其主要作用于人上皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)。通過與EGFR分子結(jié)合,Cetuximab能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)(antibody-dependent, cell-mediated cytotoxicity, ADCC)以及補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒效應(yīng)(complement-mediated cytotoxicity, CDC)來殺傷腫瘤細(xì)胞。CD46分子廣泛表達(dá)在人體除紅細(xì)胞以外的所有組織細(xì)胞的表面。CD46分子主要作用是在Ⅰ因子誘導(dǎo)的C3b、C4b補(bǔ)體成分的降解過程當(dāng)中作為一種輔助因子。有研究指出,多種腫瘤細(xì)胞能通過上調(diào)細(xì)胞表面的CD46分子水平逃避機(jī)體補(bǔ)體系統(tǒng)的攻擊,從而限制單克隆抗體的作用效果。其中,卵巢癌組織以及細(xì)胞系均能通過上調(diào)CD46分子降低Cetuximab誘導(dǎo)的CDC效應(yīng)對其產(chǎn)生的殺傷作用。Ad35K++是一種突變的Ad35型纖毛突蛋白,與野生型的Ad35型纖毛突蛋白相比對CD46分子具有更強(qiáng)的親和力。體外實(shí)驗(yàn)證明,應(yīng)用Ad35K++與多種腫瘤細(xì)胞共同孵育可以引起CD46分子的降解以及胞內(nèi)轉(zhuǎn)移。綜上所述,我們希望能通過體外實(shí)驗(yàn),探討Ad35K十+對卵巢癌細(xì)胞系表面CD46分子的作用。進(jìn)而研究抑制卵巢癌表面CD46分子對Cetuximab誘導(dǎo)的CDC效應(yīng)的增強(qiáng)效果。探索Ad35K++增強(qiáng)Cetuximab誘導(dǎo)的CDC效應(yīng)其作用于卵巢癌細(xì)胞系的具體作用機(jī)制。研究方法：1.卵巢癌腫瘤細(xì)胞系體外正常傳代培養(yǎng)。2.通過流式細(xì)胞術(shù)檢測卵巢癌細(xì)胞系SK-OV-3以及A2780表面EGFR分子的表達(dá)水平。3.運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測SK-OV-3細(xì)胞與Ad35K++共同孵育在15min、1、8、24、48h后細(xì)胞表面CD46分子表達(dá)水平。4.通過MTT比色法測定卵巢癌細(xì)胞體外增殖抑制率。5.通過流式細(xì)胞術(shù)檢測卵巢癌細(xì)胞凋亡率。6. Western blotting法檢測卵巢癌凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、c-caspase3 、c-PARP的表達(dá)情況。研究結(jié)果：1.流式結(jié)果顯示,SK-OV-3細(xì)胞表面EGFR平均表達(dá)水平明顯高于A2780細(xì)胞。2.Ad35K++與SK-OV-3細(xì)胞共同孵育后,CD46分子表達(dá)水平明顯降低,在孵育8h后CD46水平降到最低。3.Ad35K++通過增強(qiáng)Cetuximab誘導(dǎo)的CDC效應(yīng)顯著抑制SK-OV-3細(xì)胞增殖。4.Ad35K++增強(qiáng)Cetuximab誘導(dǎo)的CDC效應(yīng),從而引起更多細(xì)胞發(fā)生凋亡細(xì)胞凋亡比例明顯上升。5.Ad35K++聯(lián)合Cetuximab與NHS組相較于其他組Bax, c-caspase3以及c-PARP表達(dá)水平明顯上調(diào),Bcl-2表達(dá)水平明顯下調(diào)。研究結(jié)論：Ad35K++能顯著抑制卵巢癌細(xì)胞系SK-OV-3細(xì)胞表面的CD46分子水平,進(jìn)而增強(qiáng)Cetuximab對SK-OV-3的抗腫瘤效應(yīng)。體外與Ad35K++共同孵育8h后,能明顯增加Cetuximab介導(dǎo)的CDC效應(yīng)對卵巢癌細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)。同時(shí),單獨(dú)將Ad35K++與卵巢癌細(xì)胞進(jìn)行孵育并沒有產(chǎn)生明顯的增殖抑制效應(yīng),提示Ad35K++有較好的安全性。聯(lián)合應(yīng)用Ad35K++與Cetuximab相對于單用Cetuximab顯著增加SK-OV-3細(xì)胞的凋亡比例,說明聯(lián)合應(yīng)用Ad35K++能使得Cetuximab誘發(fā)的CDC效應(yīng)增強(qiáng),誘導(dǎo)更多的細(xì)胞發(fā)生凋亡。聯(lián)合應(yīng)用Ad35K++和Cetuximab相較于單獨(dú)應(yīng)用Cetuximab,促凋亡蛋白Bax, c-caspase3以及c-PARP表達(dá)水平明顯上升,Bcl-2表達(dá)水平明顯下調(diào)。Bcl-2/Bax比例明顯下降,說明聯(lián)合應(yīng)用Ad35K++能使得Cetuximab誘發(fā)的CDC效應(yīng)增強(qiáng),細(xì)胞主要通過線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑發(fā)生凋亡。綜上所述,Ad35K++能在體外狀態(tài)下安全有效地增強(qiáng)Cetuximab對卵巢癌細(xì)胞的抑制作用。我們的實(shí)驗(yàn)為探索卵巢癌免疫治療方法提供新思路。
【關(guān)鍵詞】：CDC效應(yīng) 西妥昔單抗 卵巢癌 Ad35K++ CD46分子
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-16
• 材料和方法16-28
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-31
• 討論31-35
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)論35-36
• 附圖36-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 綜述46-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文56-57
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表57

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1 劉爽;林靜嫻;劉琦;石群立;王建東;吳元赭;;維A酸干預(yù)前后卵巢癌細(xì)胞中維A酸受體的表達(dá)變化及意義[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2007年11期

2 ;發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];生命世界;2009年02期

3 ;美發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2009年04期

4 向君彥;夏新蜀;王昕娜;徐靜;王萍;江園;余和平;白定群;許川山;;低強(qiáng)度中頻超聲殺傷卵巢癌細(xì)胞的初步研究[J];激光雜志;2011年01期

5 陳韻仙;;下泌尿道切除作為卵巢癌細(xì)胞減少術(shù)的一部分[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊;1983年03期

6 仲任,黃瑞濱,宋善俊;組織因子途徑抑制物2對卵巢癌細(xì)胞遷徙和浸潤能力的影響[J];癌癥;2003年10期

7 ;精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[J];發(fā)明與創(chuàng)新;2003年12期

8 高琨,李力,陳心秋,張瑋;雌孕激素對卵巢癌細(xì)胞體外生長的影響[J];腫瘤防治研究;2004年04期

9 王威廉,陳心秋,恩帝安,馬加薩,周德南,唐凱,黃薇;抗卵巢癌細(xì)胞膜抗體對卵巢癌細(xì)胞體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)及荷瘤小鼠的體內(nèi)聚集性的實(shí)驗(yàn)研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

10 仲任,黃瑞濱,宋善俊;組織因子途徑抑制物2表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞浸潤能力的實(shí)驗(yàn)研究[J];腫瘤;2004年05期

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1 王文霞;孔北華;李鵬;曲迅;;蛋白酶體抑制劑對卵巢癌細(xì)胞的作用機(jī)制[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

2 劉娟娟;林蓓;趙越;李飛飛;郝瑩瑩;張帆;朱連成;張淑蘭;;巖藻糖基化抗原對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];東北三省第四屆婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

3 陳心秋;王威廉;趙芳芳;周德南;唐凱;;~(131)Ⅰ—抗卵巢癌抗體聯(lián)合外放射對卵巢癌細(xì)胞的體外殺傷實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆廣西腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2003年

4 王威廉;陳心秋;恩帝安.馬加薩;周德南;唐凱;;抗卵巢癌抗體對卵巢癌細(xì)胞體外細(xì)胞毒及載瘤裸鼠體內(nèi)聚集性實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆廣西腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2003年

5 許沈華;牟瀚舟;顧琳慧;朱赤紅;劉祥麟;;高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞差異表達(dá)基因在染色體定位及其功能[A];浙江省生理科學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

6 唐東平;陳心秋;唐凱;張潔清;賀海平;;11種化療藥物對卵巢癌細(xì)胞的抑制作用及其有核細(xì)胞細(xì)胞毒性研究[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

7 李曉峰;王欣;馬開東;劉寶林;;卵巢癌細(xì)胞的低溫保存及致死特性研究[A];上海市制冷學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

8 梁念慈;何太平;覃燕梅;吳科鋒;;抗癌草藥半邊旗有效成分對卵巢癌細(xì)胞基因表達(dá)的影響[A];第十屆全國生化與分子藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2007年

9 郝瑩瑩;林蓓;趙越;歐陽玲;張淑蘭;;α1,2巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)染對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 李長東;張為遠(yuǎn);苑春莉;韓麗英;;卵巢癌細(xì)胞對人樹突狀細(xì)胞成熟及功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第一屆全球華人婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會(huì)暨第三次全國婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

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1 記者 任海軍;卵巢癌為何常常復(fù)活？生死命懸一基因[N];新華每日電訊;2009年

2 靖九江;4-HPR有望用于治療卵巢癌[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

3 邰 舉;韓國醫(yī)學(xué)專家發(fā)現(xiàn)精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

4 邰舉;精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[N];科技日報(bào);2003年

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1 王萍;丙泊酚對卵巢癌細(xì)胞侵襲和紫杉醇誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞凋亡的作用中轉(zhuǎn)錄因子Slug的影響[D];山東大學(xué);2015年

2 魏星;CGI-58基因調(diào)控脂代謝介導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李曉;卵巢癌細(xì)胞影響外周血T淋巴細(xì)胞功能和分化的研究[D];浙江大學(xué);2006年

4 彭萍;白細(xì)胞介素12基因轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞后和卵巢癌細(xì)胞融合作為卵巢癌腫瘤疫苗的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

5 張晶晶;卵巢癌細(xì)胞與腹膜間皮細(xì)胞相互作用對侵襲轉(zhuǎn)移微環(huán)境的影響[D];山東大學(xué);2006年

6 李慧慧;雌激素及其代謝物和抗壞血酸對卵巢癌細(xì)胞的作用及相互影響[D];山東大學(xué);2013年

7 李留霞;基因調(diào)控溶血磷脂酸作用通路抑制卵巢癌細(xì)胞生長的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2008年

8 黃妍;卵泡刺激素對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 劉穎濤;Rab25對卵巢癌的促進(jìn)作用及其分子調(diào)節(jié)機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 李琴華;制瘤素對卵巢癌細(xì)胞的影響及其機(jī)制的體外研究[D];吉林大學(xué);2011年

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1 余丹丹;miRNA-497通過調(diào)控FASN的表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖的初步研究[D];東南大學(xué);2015年

2 趙靜;CD147-Sp1關(guān)系環(huán)對卵巢癌細(xì)胞侵襲性影響的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 薛寶瑤;SDF-1-CXCR4與HIF-1在卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中相互作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 萬曉蕾;賴氨酸特異性去甲基化酶1參與卵巢癌細(xì)胞對順鉑敏感性的研究[D];江蘇大學(xué);2016年

5 李袁霞;LSD1介導(dǎo)的表觀遺傳學(xué)修飾促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移及侵襲[D];江蘇大學(xué);2016年

6 賴文升;曲古抑菌素A對卵巢癌細(xì)胞分化、增殖的影響[D];江蘇大學(xué);2016年

7 肖俊超;應(yīng)用重組腺病毒35型纖毛突蛋白增強(qiáng)單克隆抗體抗腫瘤的相關(guān)研究[D];山東大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1018081