本文關(guān)鍵詞：Eps8在乳腺癌細胞增殖與遷移中的作用

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【摘要】：表皮生長因子受體通路底物8(Eps8)參與多種類型腫瘤的發(fā)生發(fā)展,我們的免疫組化結(jié)果表明與癌旁正常組織相比,60%以上的人乳腺癌組織中Eps8高表達。而且,Eps8在高侵襲的乳腺癌細胞株MDA-MB-231中高表達;而低侵襲的細胞系MCF7和MDA-MB-468中表達水平較低。然后我們通過G418篩選出穩(wěn)定過表達Eps8的MCF-7細胞系,利用MTT法、細胞存活率和液體克隆形成等實驗方法發(fā)現(xiàn)Eps8的過表達能促進乳腺癌細胞MCF7的生長,提高細胞存活率。反之,用Eps8 shRNA慢病毒感染MDA-MB-231細胞后細胞生長和增殖受到明顯抑制:流式凋亡檢測結(jié)果表明活細胞比例下降,早期凋亡和晚期凋亡細胞比例上升;周期分析顯示細胞被阻滯在G1/S期;裸鼠成瘤實驗證明細胞在體內(nèi)的增殖也受到明顯抑制。同時通過傷口愈合分析法、免疫熒光定位及MTT分析發(fā)現(xiàn),敲低Eps8的表達使得乳腺癌細胞的遷移能力下降,EGF誘導的絲狀偽足的數(shù)目和大小減少,同時對順鉑的敏感程度增加。而且,敲低Eps8的表達能減少磷酸化的胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶(p ERK)和MMP9的表達量,但能增加腫瘤抑制因子p53的表達水平。此外,敲低Eps8的表達抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,E-cadherin表達量明顯上升,而N-cadherin和vimentin的表達受到抑制。這些結(jié)果表明,在乳腺癌中過表達Eps8可調(diào)節(jié)ERK信號通路、MMP9、p53和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)導影響乳腺癌細胞的生長、遷移和侵襲。因此,Eps8是一個潛在的新的乳腺癌治療靶點。
【關(guān)鍵詞】：EGF受體底物8 乳腺癌 細胞增殖和遷移 胞外信號通路調(diào)節(jié)蛋白激酶 F-actin 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)導
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮寫表8-11
• 前言11-20
• 1.乳腺癌簡介11-15
• 1.1 乳腺癌的分類及生物學特征11-12
• 1.2 乳腺癌的發(fā)生機制12-15
• 1.2.1 人表皮生長因子受體 2（HER-2/neu）12-13
• 1.2.2 腫瘤抑制因子TP5313-14
• 1.2.3 nm2314-15
• 1.2.4 Cyclin D115
• 2. Eps8基因簡介15-20
• 2.1 Eps8蛋白的結(jié)構(gòu)15-16
• 2.2 Eps8的生理功能16-20
• 第一部分 材料和方法20-28
• 1.材料20
• 2.主要儀器20-21
• 3. 實驗方法21-28
• 3.1 免疫組化21-22
• 3.2 細胞培養(yǎng)22-24
• 3.2.1 細胞解凍22-23
• 3.2.2 細胞傳代23
• 3.2.3 細胞凍存23-24
• 3.3 建立穩(wěn)定過表達GFP和GFP-Eps8的MCF7細胞系24
• 3.3.1 細胞轉(zhuǎn)染24
• 3.3.2 抗生素篩選24
• 3.4 Eps8 siRNA慢病毒的制備與細胞感染24-25
• 3.5 細胞增殖測定25-26
• 3.5.1 細胞活力分析25
• 3.5.2 細胞計數(shù)法25
• 3.5.3 液體克隆實驗25-26
• 3.6 細胞周期檢測26
• 3.7 細胞凋亡檢測26
• 3.8 裸鼠成瘤實驗26
• 3.9 細胞劃痕實驗26-27
• 3.10 免疫熒光實驗27
• 3.11 Western blot實驗27
• 3.12 統(tǒng)計學分析27-28
• 第二部分 結(jié)果與分析28-38
• 1.Eps8在乳腺癌組織和高侵襲性細胞株中高表達28-30
• 2.Eps8的過量表達促進乳腺癌細胞MCF7的增殖30-32
• 3. Eps8的敲低抑制MDA-MB-231細胞在體內(nèi)、體外的增殖和存活32-34
• 4. Eps8的敲低抑制乳腺癌細胞的侵襲能力，減少EGF誘導的絲狀偽足大小和數(shù)量，，并增強乳腺癌細胞對順鉑的敏感性34-36
• 5. Eps8影響ERK信號通路以及MMP9、p53和EMT蛋白的表達36-38
• 討論38-41
• 參考文獻41-47
• 附錄47-48
• 致謝48-49

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本文編號：1014793