本文關(guān)鍵詞：Eps8在乳腺癌細(xì)胞增殖與遷移中的作用

  更多相關(guān)文章： EGF受體底物8 乳腺癌 細(xì)胞增殖和遷移 胞外信號(hào)通路調(diào)節(jié)蛋白激酶 F-actin 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)

【摘要】：表皮生長(zhǎng)因子受體通路底物8(Eps8)參與多種類型腫瘤的發(fā)生發(fā)展,我們的免疫組化結(jié)果表明與癌旁正常組織相比,60%以上的人乳腺癌組織中Eps8高表達(dá)。而且,Eps8在高侵襲的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231中高表達(dá);而低侵襲的細(xì)胞系MCF7和MDA-MB-468中表達(dá)水平較低。然后我們通過G418篩選出穩(wěn)定過表達(dá)Eps8的MCF-7細(xì)胞系,利用MTT法、細(xì)胞存活率和液體克隆形成等實(shí)驗(yàn)方法發(fā)現(xiàn)Eps8的過表達(dá)能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MCF7的生長(zhǎng),提高細(xì)胞存活率。反之,用Eps8 shRNA慢病毒感染MDA-MB-231細(xì)胞后細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖受到明顯抑制:流式凋亡檢測(cè)結(jié)果表明活細(xì)胞比例下降,早期凋亡和晚期凋亡細(xì)胞比例上升;周期分析顯示細(xì)胞被阻滯在G1/S期;裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)證明細(xì)胞在體內(nèi)的增殖也受到明顯抑制。同時(shí)通過傷口愈合分析法、免疫熒光定位及MTT分析發(fā)現(xiàn),敲低Eps8的表達(dá)使得乳腺癌細(xì)胞的遷移能力下降,EGF誘導(dǎo)的絲狀偽足的數(shù)目和大小減少,同時(shí)對(duì)順鉑的敏感程度增加。而且,敲低Eps8的表達(dá)能減少磷酸化的胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(p ERK)和MMP9的表達(dá)量,但能增加腫瘤抑制因子p53的表達(dá)水平。此外,敲低Eps8的表達(dá)抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,E-cadherin表達(dá)量明顯上升,而N-cadherin和vimentin的表達(dá)受到抑制。這些結(jié)果表明,在乳腺癌中過表達(dá)Eps8可調(diào)節(jié)ERK信號(hào)通路、MMP9、p53和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)影響乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和侵襲。因此,Eps8是一個(gè)潛在的新的乳腺癌治療靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：EGF受體底物8 乳腺癌 細(xì)胞增殖和遷移 胞外信號(hào)通路調(diào)節(jié)蛋白激酶 F-actin 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮寫表8-11
• 前言11-20
• 1.乳腺癌簡(jiǎn)介11-15
• 1.1 乳腺癌的分類及生物學(xué)特征11-12
• 1.2 乳腺癌的發(fā)生機(jī)制12-15
• 1.2.1 人表皮生長(zhǎng)因子受體 2（HER-2/neu）12-13
• 1.2.2 腫瘤抑制因子TP5313-14
• 1.2.3 nm2314-15
• 1.2.4 Cyclin D115
• 2. Eps8基因簡(jiǎn)介15-20
• 2.1 Eps8蛋白的結(jié)構(gòu)15-16
• 2.2 Eps8的生理功能16-20
• 第一部分 材料和方法20-28
• 1.材料20
• 2.主要儀器20-21
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法21-28
• 3.1 免疫組化21-22
• 3.2 細(xì)胞培養(yǎng)22-24
• 3.2.1 細(xì)胞解凍22-23
• 3.2.2 細(xì)胞傳代23
• 3.2.3 細(xì)胞凍存23-24
• 3.3 建立穩(wěn)定過表達(dá)GFP和GFP-Eps8的MCF7細(xì)胞系24
• 3.3.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染24
• 3.3.2 抗生素篩選24
• 3.4 Eps8 siRNA慢病毒的制備與細(xì)胞感染24-25
• 3.5 細(xì)胞增殖測(cè)定25-26
• 3.5.1 細(xì)胞活力分析25
• 3.5.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)法25
• 3.5.3 液體克隆實(shí)驗(yàn)25-26
• 3.6 細(xì)胞周期檢測(cè)26
• 3.7 細(xì)胞凋亡檢測(cè)26
• 3.8 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)26
• 3.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)26-27
• 3.10 免疫熒光實(shí)驗(yàn)27
• 3.11 Western blot實(shí)驗(yàn)27
• 3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27-28
• 第二部分 結(jié)果與分析28-38
• 1.Eps8在乳腺癌組織和高侵襲性細(xì)胞株中高表達(dá)28-30
• 2.Eps8的過量表達(dá)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MCF7的增殖30-32
• 3. Eps8的敲低抑制MDA-MB-231細(xì)胞在體內(nèi)、體外的增殖和存活32-34
• 4. Eps8的敲低抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲能力，減少EGF誘導(dǎo)的絲狀偽足大小和數(shù)量，，并增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性34-36
• 5. Eps8影響ERK信號(hào)通路以及MMP9、p53和EMT蛋白的表達(dá)36-38
• 討論38-41
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 附錄47-48
• 致謝48-49

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學(xué)雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運(yùn)用[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國(guó)華;乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細(xì)胞[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2005年04期

8 田富國(guó);郭向陽(yáng);張華一;;乳腺癌診治研究新進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與乳腺癌的臨床研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(外科學(xué)分冊(cè));2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2005年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會(huì)健;;乳腺癌治療靶標(biāo)的研究進(jìn)展[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會(huì)論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 劉愛國(guó);胡冰;;乳腺癌臨床治療進(jìn)展[A];安徽省抗癌協(xié)會(huì)第四次代表大會(huì)暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會(huì)成立會(huì)議、安徽省腫瘤防治進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[A];第一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進(jìn)展[A];山西省抗癌協(xié)會(huì)第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀(jì)乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽(yáng);王兆鉞;阮長(zhǎng)耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散基因被找到[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國(guó)婦女報(bào);2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補(bǔ)可消滅乳腺癌細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個(gè)時(shí)期不一樣[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

6 辛君;乳腺癌擴(kuò)散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的分子[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日?qǐng)?bào);2011年

9 王樂　沈基飛;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標(biāo)志物[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學(xué)行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測(cè)及其功能論證[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強(qiáng)表皮生長(zhǎng)因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細(xì)胞樣乳腺癌細(xì)胞機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲�(duì)乳腺癌協(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對(duì)其生物學(xué)行為的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點(diǎn)[D];鄭州大學(xué);2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標(biāo)的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號(hào)通路對(duì)乳腺癌侵襲性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 葛廣哲;樹

本文編號(hào)：1014793