發(fā)布時間：2017-10-11 16:23

  本文關鍵詞：靶向沉默甲胎蛋白表達對人肝癌細胞HepG2細胞功能學的研究

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【摘要】：目的:構建靶向沉默甲胎蛋白的慢病毒載體并評價沉默效果。探討沉默甲胎蛋白表達對人肝癌細胞系Hep G2細胞功能學方面的影響,為后續(xù)對肝癌侵襲及轉移方面實驗研究建立細胞模型。方法:采用RNA干擾技術構建靶向沉默AFP基因的慢病毒載體,轉染HepG2細胞,在熒光倒置顯微鏡下觀察轉染后綠色熒光細胞的數量,再用嘌呤霉素篩選純化以獲得穩(wěn)定沉默甲胎蛋白的細胞系。采用實時熒光定量PCR技術檢測轉染組及對照組肝癌細胞中AFP的mRNA表達水平;Western blotting檢測沉默后AFP的蛋白表達水平變化;MTT法檢測轉染組及對照組肝癌細胞的增殖情況;運用Tranwell實驗檢測細胞的侵襲能力;Wound Healing實驗檢測細胞的遷移能力。結果:沉默組AFP在mRNA水平較空白組下降約90%(P0.05),在蛋白表達水平下降(62.53±6.17)%(P0.05);MTT法結果顯示沉默組細胞培養(yǎng)6天后,細胞增值率下降(31.17±1.16)%(P0.05);Transwell實驗沉默組細胞侵襲個數較空白組和陰性組降低明顯,依次為(174.80±16.20)個、(315.25±19.70)個、(304.60±20.30)個,(P0.05);Wound Healing實驗48h后,沉默組遷移率較空白組和陰性組明顯下降,分別為(29.96±6.79)%、(54.77±9.24)%、(49.04±8.31)%,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:靶向沉默AFP的慢病毒載體感染HepG2細胞能夠有效抑制AFP基因的表達;AFP表達水平下降使Hep G2細胞增殖,侵襲轉移能力明顯受到抑制。
【關鍵詞】：AFP RNA干擾 HepG2細胞 慢病毒 侵襲 遷移
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 研究背景8-18
• 一、肝癌的概述8-14
• 1.1 肝癌的流行病學概況8-9
• 1.2 肝癌的發(fā)生發(fā)展9-11
• 1.3 肝癌的早期診斷11-12
• 1.4 肝癌的治療12-14
• 二、甲胎蛋白與肝癌的關系14-17
• 2.1 AFP概述14
• 2.2 AFP與HCC增殖的關系14-15
• 2.3 AFP與HCC侵襲與轉移的關系15-17
• 三、實驗研究目的及意義17-18
• 第二章 材料方法18-32
• 1、實驗材料18-21
• 1.1 肝癌細胞株18
• 1.2 試劑18-19
• 1.3 儀器19-20
• 1.4 耗材20
• 1.5 溶液配制20-21
• 2、實驗方法21-31
• 2.1 細胞培養(yǎng)21-22
• 2.2 慢病毒轉染22-24
• 2.3 qRT-PCR檢測24-26
• 2.4 Western Blot檢測26-29
• 2.5 MTT檢測細胞增殖能力29-30
• 2.6 Transwell檢測細胞侵襲能力30
• 2.7 Wound Healing檢測細胞遷移能力30-31
• 3、統(tǒng)計學處理31-32
• 第三章 結果32-35
• 第四章 討論35-37
• 第五章 結論37-38
• 參考文獻38-45
• 附錄1 英文縮略詞表45-46
• 在學期間的研究成果46-47
• 致謝47

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8 健康時報特約記者 yび板，

本文編號：1013565