本文關(guān)鍵詞：靶向沉默甲胎蛋白表達(dá)對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞功能學(xué)的研究

  更多相關(guān)文章： AFP RNA干擾 HepG2細(xì)胞 慢病毒 侵襲 遷移

【摘要】：目的:構(gòu)建靶向沉默甲胎蛋白的慢病毒載體并評(píng)價(jià)沉默效果。探討沉默甲胎蛋白表達(dá)對(duì)人肝癌細(xì)胞系Hep G2細(xì)胞功能學(xué)方面的影響,為后續(xù)對(duì)肝癌侵襲及轉(zhuǎn)移方面實(shí)驗(yàn)研究建立細(xì)胞模型。方法:采用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建靶向沉默AFP基因的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,在熒光倒置顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染后綠色熒光細(xì)胞的數(shù)量,再用嘌呤霉素篩選純化以獲得穩(wěn)定沉默甲胎蛋白的細(xì)胞系。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染組及對(duì)照組肝癌細(xì)胞中AFP的mRNA表達(dá)水平;Western blotting檢測(cè)沉默后AFP的蛋白表達(dá)水平變化;MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染組及對(duì)照組肝癌細(xì)胞的增殖情況;運(yùn)用Tranwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的侵襲能力;Wound Healing實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力。結(jié)果:沉默組AFP在mRNA水平較空白組下降約90%(P0.05),在蛋白表達(dá)水平下降(62.53±6.17)%(P0.05);MTT法結(jié)果顯示沉默組細(xì)胞培養(yǎng)6天后,細(xì)胞增值率下降(31.17±1.16)%(P0.05);Transwell實(shí)驗(yàn)沉默組細(xì)胞侵襲個(gè)數(shù)較空白組和陰性組降低明顯,依次為(174.80±16.20)個(gè)、(315.25±19.70)個(gè)、(304.60±20.30)個(gè),(P0.05);Wound Healing實(shí)驗(yàn)48h后,沉默組遷移率較空白組和陰性組明顯下降,分別為(29.96±6.79)%、(54.77±9.24)%、(49.04±8.31)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:靶向沉默AFP的慢病毒載體感染HepG2細(xì)胞能夠有效抑制AFP基因的表達(dá);AFP表達(dá)水平下降使Hep G2細(xì)胞增殖,侵襲轉(zhuǎn)移能力明顯受到抑制。
【關(guān)鍵詞】：AFP RNA干擾 HepG2細(xì)胞 慢病毒 侵襲 遷移
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 研究背景8-18
• 一、肝癌的概述8-14
• 1.1 肝癌的流行病學(xué)概況8-9
• 1.2 肝癌的發(fā)生發(fā)展9-11
• 1.3 肝癌的早期診斷11-12
• 1.4 肝癌的治療12-14
• 二、甲胎蛋白與肝癌的關(guān)系14-17
• 2.1 AFP概述14
• 2.2 AFP與HCC增殖的關(guān)系14-15
• 2.3 AFP與HCC侵襲與轉(zhuǎn)移的關(guān)系15-17
• 三、實(shí)驗(yàn)研究目的及意義17-18
• 第二章 材料方法18-32
• 1、實(shí)驗(yàn)材料18-21
• 1.1 肝癌細(xì)胞株18
• 1.2 試劑18-19
• 1.3 儀器19-20
• 1.4 耗材20
• 1.5 溶液配制20-21
• 2、實(shí)驗(yàn)方法21-31
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染22-24
• 2.3 qRT-PCR檢測(cè)24-26
• 2.4 Western Blot檢測(cè)26-29
• 2.5 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖能力29-30
• 2.6 Transwell檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力30
• 2.7 Wound Healing檢測(cè)細(xì)胞遷移能力30-31
• 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理31-32
• 第三章 結(jié)果32-35
• 第四章 討論35-37
• 第五章 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-45
• 附錄1 英文縮略詞表45-46
• 在學(xué)期間的研究成果46-47
• 致謝47

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