本文關(guān)鍵詞：索拉菲尼聯(lián)合沙利度胺對(duì)肝癌細(xì)胞增殖及雞胚尿囊膜血管生成的影響

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【摘要】：背景:原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在我國是一種常見的惡性腫瘤疾病,由于我國乙肝、丙肝感染人數(shù)基數(shù)大,部分地區(qū)衛(wèi)生條件較差,致使我國肝癌發(fā)病率約占全球的一半以上。因其發(fā)病具有隱匿性,約有90%的病例在發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)錯(cuò)過手術(shù)時(shí)機(jī)。另外統(tǒng)計(jì)顯示,即便是肝癌患者及時(shí)行手術(shù)切除其5年復(fù)發(fā)率最高可達(dá)61.5%。因此,尋找一種針對(duì)手術(shù)無法切除和轉(zhuǎn)移的晚期肝癌患者的治療方案,是醫(yī)療工作者亟需解決的難題。惡性腫瘤生長(zhǎng)迅速,其生長(zhǎng)依賴于腫瘤新生血管血管提供的營(yíng)養(yǎng),靶向藥物抗肝癌細(xì)胞增殖及腫瘤血管形成成為當(dāng)今肝癌非手術(shù)治療的研究熱點(diǎn)。索拉菲尼(Sorafenib)是由德國拜耳公司研制的新型靶向治療藥物,已被美國FDA批準(zhǔn)用于肝癌的臨床系統(tǒng)治療。索拉菲尼具有雙重抗腫瘤作用:1、阻斷Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路,直接地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖;2、抑制與VEGF相應(yīng)的酪氨酸激酶受體(VEGFR)的活性,通過阻斷腫瘤血管生成,間接地抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。沙利度胺(Thalidomide)最初作為鎮(zhèn)靜藥控制孕婦妊娠反應(yīng),因?qū)е聡?yán)重致畸事件而被停用,但近年來研究發(fā)現(xiàn)沙利度胺具有抗血管生成、抑制腫瘤生等特點(diǎn),已有學(xué)者將其運(yùn)用于實(shí)體瘤的治療。在腫瘤的治療中,單獨(dú)用藥往往效果有限,為了達(dá)到更好的治療效果及更少的副作用,越來越多的研究集中在聯(lián)合用藥上,如索拉菲尼聯(lián)合5-FU、阿霉素,沙利度胺聯(lián)合紫杉醇對(duì)晚期肝癌的治療等。但關(guān)于索拉菲尼、沙利度胺聯(lián)合應(yīng)用于肝癌的治療研究卻鮮見于報(bào)道。目的:本實(shí)驗(yàn)通過觀察索拉菲尼、沙利度胺單獨(dú)用藥、聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌細(xì)胞組體外生長(zhǎng)及雞胚絨毛尿囊膜血管生長(zhǎng)的影響,來證實(shí)二者聯(lián)合應(yīng)用在抗腫瘤生長(zhǎng)及抗血管生成方面是否更具有優(yōu)勢(shì)。為進(jìn)一步臨床試驗(yàn)及治療提供理論依據(jù)。方法:1、聯(lián)合用藥對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響:以人肝癌細(xì)胞組BEL7402為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,將索拉菲尼試劑制作成不同濃度工作液,分別給藥后通過MTT法測(cè)得索拉菲尼抑制率,并求得其IC50值,同樣方法測(cè)得沙利度胺抑制率及其IC50值。然后取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的BEL7402人肝癌細(xì)胞調(diào)制成0.2×105個(gè)/ml,組鋪設(shè)96孔板,每孔200ml,共分為4組,在沙利度胺和索拉菲尼各自IC50值以下選取適宜濃度分別組成:空白對(duì)照組,索拉非尼組,沙利度胺組,聯(lián)合用藥組,每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔,共鋪5塊96孔板。孵化24小時(shí)后分別給藥后放入孵化箱孵育,每過12小時(shí)隨機(jī)取出1塊96孔板,并進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn),運(yùn)用酶標(biāo)儀測(cè)定每組的平均A值,進(jìn)而計(jì)算出每組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率,最后繪制出生長(zhǎng)曲線并評(píng)價(jià)聯(lián)合用藥的效果。2、聯(lián)合用藥對(duì)雞胚尿囊膜血管生成的影響:選取7日齡活胚蛋100枚,隨機(jī)分為4組(空白對(duì)照組,索拉非尼組,沙利度胺組,聯(lián)合用藥組),每組25個(gè)。制作假氣室暴露CAM膜,分組加藥。加藥后用無菌封口膜封窗,繼續(xù)孵育2天。孵育完畢后,每組選取存活的CAM模型,打開封口膜,加入固定液,室溫下固定并制作CAM標(biāo)本,陰干后顯微鏡下觀察并拍照,通過圖象處理軟件計(jì)算血管覆蓋率。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理評(píng)價(jià)聯(lián)合用藥是否具有優(yōu)越性。結(jié)果:1、索拉非尼、沙利度胺對(duì)BEL7402細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50):1.5、3、6、12、24μΜ/L的索拉非尼作用于BEL7402細(xì)胞48小時(shí)后的抑制率分別為12.5%、22.2%、34.9%、49.2%、65.1%,6.25、12.5、25、50、100μg/ml的沙利度胺作用于肝癌細(xì)胞系BEL7402 48小時(shí)后的抑制率分別為18.2%、29.1%、38.2%、58.2%、69.1%。索拉非尼、沙利度胺對(duì)BEL7402細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50值)分別為11.9μΜ/L、36.9μg/ml。2、聯(lián)合用藥對(duì)BEL7402細(xì)胞抑制作用:沙利度胺(25μg/ml)與索拉菲尼(3μΜ/L)聯(lián)合用藥作用于BEL7402細(xì)胞時(shí),其效果相對(duì)于單藥組差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),并且聯(lián)合用藥組效果大于于單藥組藥效代數(shù)和。3、聯(lián)合用藥對(duì)雞胚尿囊膜血管生成的影響:鏡下觀察顯示:空白對(duì)照組血管呈葉脈樣生長(zhǎng),粗壯密集,分支較多。加藥組血管數(shù)明顯少于對(duì)照組,并且血管較細(xì),分支少,部分血管萎縮、斷裂,其中以聯(lián)合用藥組最為明顯。經(jīng)圖像分析軟件計(jì)算:沙利度胺和索拉菲尼組相對(duì)于空白對(duì)照組血管覆蓋率有明顯差異[(30.2±2.9)vs(38.3±2.7),q=17.05,p0.05;(26.5±2.1)vs(38.3±2.7),q=24.59,p0.05],聯(lián)合用藥組與沙利度胺、索拉菲尼組對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(12.6%±1.5%)vs(30.2%±2.9%),q=36.68,p0.05;(12.6%±1.5%)vs(26.5%±2.1%),q=28.67,p0.05]。結(jié)論:1、索拉菲尼、沙利度胺對(duì)BEL7402細(xì)胞均有明顯的增殖抑制作用,并具有明顯的量效關(guān)系,而二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)BEL7402細(xì)胞的增殖抑制作用更加明顯,呈協(xié)同作用。2、索拉菲尼、沙利度胺均有良好的抗血管生成效果,而聯(lián)合用藥可使抗血管效果更加顯著。
【關(guān)鍵詞】：索拉菲尼 沙利度胺 雞胚尿囊膜 肝癌 抗血管生成
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 內(nèi)容摘要4-7
• Abstract7-14
• 第1章 緒論14-18
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料和方法18-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-22
• 2.2.1 不同用藥方式對(duì)BEL7402細(xì)胞增殖抑制作用19-21
• 2.2.2 不同用藥方式對(duì)雞胚尿囊膜血管生成的影響21
• 2.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21-22
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-26
• 第4章 討論26-29
• 第5章 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-35
• 作者簡(jiǎn)介及發(fā)表論文35-36
• 致謝36

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1011648