本文關鍵詞：雙硫侖增強垂體瘤細胞替莫唑胺化療敏感性的研究

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【摘要】：背景與目的:侵襲性垂體腺瘤的治療是目前神經(jīng)外科領域的一個難題,其高復發(fā)率和低治愈率一直是影響臨床療效的重要原因。替莫唑胺作為目前治療后放療和常規(guī)藥物治療(溴隱亭等)不敏感的垂體瘤的最后一線藥物,提高腫瘤對替莫唑胺的敏感性具有重要的意義。最近研究表明雙硫侖(DSF)能提高膠質瘤對替莫唑胺(TMZ)的敏感性,雙硫侖(DSF)能否也在垂體瘤中提高腫瘤組織對替莫唑胺的敏感性目前尚未見報道。本課題針對雙硫侖(DSF)聯(lián)合替莫唑胺(TMZ)能否增強垂體瘤細胞對替莫唑胺化療敏感性進行相關研究。方法:收集對術后放療和常規(guī)藥物治療(溴隱亭等)不敏感的垂體瘤組織6例,其中對替莫唑胺敏感的3例,對替莫唑胺不敏感的3例。應用Western blot的方法檢測MGMT在垂體腺瘤組織內的蛋白表達水平的變化。體外實驗分別應用TMZ,DSF和TMZ聯(lián)合DSF刺激垂體瘤細胞MMQ,CCK8法檢測細胞增殖。Western blot的方法檢測在垂體腺瘤細胞內MGMT蛋白表達水平的變化。將MMQ垂體細胞皮下注射裸鼠,形成垂體瘤細胞裸鼠皮下移植瘤,應用TMZ,DSF和TMZ聯(lián)合DSF刺激裸鼠,Brud和TUNEL染色法檢測細胞增殖和細胞凋亡。結果:Western blot結果顯示在術后放療和常規(guī)藥物治療(溴隱亭等)不敏感的垂體瘤組織中,對替莫唑胺敏感的腫瘤組織MGMT蛋白水平低,對替莫唑胺不敏感的腫瘤組織MGMT蛋白水平高。相對于單獨應用TMZ或DSF,TMZ聯(lián)合DSF對垂體瘤MMQ細胞的細胞增殖均有抑制作用;Western blot結果表明TMZ聯(lián)合DSF使用明顯抑制MGMT蛋白的表達;相對于單純TMZ,DSF組,TMZ聯(lián)合DSF能更加明顯的抑制移植瘤的生長;Brud和TUNEL染色法顯示TMZ聯(lián)合DSF能促進細胞凋亡,抑制細胞增殖。結論:雙硫侖DSF聯(lián)合替莫唑胺TMZ使用可能抑制垂體瘤細胞增殖,并能夠抑制MGMT蛋白的表達;雙硫侖DSF聯(lián)合替莫唑胺TMZ使用能夠通過促進細胞凋亡,抑制細胞增殖途徑抑制體內移植瘤的生長。
【關鍵詞】：侵襲性垂體瘤 雙硫侖 替莫唑胺 MGMT
【學位授予單位】：河南科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R736.4
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-6
• 符號表6-10
• 第1章 緒論10-22
• 1.1 研究背景10-20
• 1.1.1 替莫唑胺的臨床應用12-20
• 1.2 研究目的20-21
• 1.3 研究意義21-22
• 第2章 材料與方法22-36
• 2.1 實驗分組22-23
• 2.2 主要試劑材料23
• 2.3 主要試驗設備23-24
• 2.4 主要試劑配制方法24-27
• 2.5 免疫組化方法27-28
• 2.5.1 實驗步驟27-28
• 2.5.2 免疫組化結果判讀方法28
• 2.6 Western blot分析28-31
• 2.6.1 樣品的制備28-29
• 2.6.2 蛋白定量29
• 2.6.3 Western blot制膠29
• 2.6.4 蛋白上樣29-30
• 2.6.5 蛋白電泳30
• 2.6.6 轉膜30
• 2.6.7 封閉非特異性抗原30
• 2.6.8 加一抗30
• 2.6.9 加二抗30-31
• 2.6.10增強化學發(fā)光法（ECL)顯色31
• 2.7 TUNEL染色檢測細胞凋亡31-33
• 2.7.1 試劑配制31
• 2.7.2 實驗步驟31-33
• 2.8 細胞培養(yǎng)33
• 2.9 CCK8方法33-34
• 2.9.1 細胞增值檢測34
• 2.9.2 細胞毒性檢測34
• 2.10 裸鼠皮下MMQ垂體瘤細胞移植瘤模型的建立34-35
• 2.10.1 裸鼠培養(yǎng)34-35
• 2.10.2 細胞準備35
• 2.10.3 裸鼠移植瘤注射35
• 2.10.4 腫瘤大小測量35
• 2.10.5 移植瘤處理35
• 2.11 統(tǒng)計分析35-36
• 第3章 結果36-40
• 3.1 Western blot分析MGMT在替莫唑胺敏感垂體腺瘤組織和替莫唑胺耐藥垂體瘤組織中的表達36
• 3.2 CCK-8 檢測和Western blot檢測TMZ，DSF及TMZ與DSF聯(lián)合使用對MMQ垂體腺瘤細胞的增殖抑制作用和MGMT水平的變化36-37
• 3.3 TUNEL及BRDU檢測顯示TMZ，，DSF及TMZ與DSF聯(lián)合使用對MMQ垂體腺瘤細胞的促凋亡及抑制增殖作用37-40
• 第4章 討論40-46
• 第5章 結論46-47
• 參考文獻47-55
• 縮略語詞匯表55-56
• 致謝56-57
• 攻讀學位期間的研究成果57

【共引文獻】

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本文編號：1009714