本文關(guān)鍵詞：二氫楊梅素對人白血病Jurkat細(xì)胞增殖與凋亡的影響及機制

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【摘要】：目的:探討二氫楊梅素(dihydromyricetin,DMY)對人急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞增殖及凋亡的影響,并從mTOR/自噬途徑的角度探討其可能的作用機制。方法:體外培養(yǎng)人急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞,用含不同濃度(20、40、60、80和100 mg/L)的DMY和5%胎牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液培養(yǎng)Jurkat細(xì)胞12、24和48小時。用60 mg/L的DMY和10 mmol/L細(xì)胞自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)共同處理Jurkat細(xì)24小時。四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法用來檢測細(xì)胞活力并計算細(xì)胞增殖抑制率,流式細(xì)胞術(shù)用來檢測細(xì)胞凋亡并計算細(xì)胞凋亡率,采用透射電鏡觀察Jurkat細(xì)胞自噬體形成等超微結(jié)構(gòu)。采用Western Blot檢測Jurkat細(xì)胞中自噬相關(guān)基因Beclin 1、LC3和p62的表達。采用實時定量PCR和Western Blot檢測Jurkat細(xì)胞中哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)mRNA的表達。結(jié)果:1.DMY顯著抑制了Jurkat細(xì)胞的增殖(P㩳0.05),呈現(xiàn)劑量和時間依賴性,在12、24和48小時時間點的藥物半數(shù)抑制濃度(50%inhibition concentration,IC50)逐漸降低,IC50分別為217、155和92 mg/L,最佳作用濃度和時間是60mg/L處理24小時。2.DMY能以劑量和時間依賴的方式誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞的凋亡(P㩳0.05),最佳作用濃度和時間是60 mg/L處理24小時。3.對照組Jurkat細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)正常,呈不規(guī)則形,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形,核膜和核仁清晰可見,核染色質(zhì)均勻分布,細(xì)胞質(zhì)中可發(fā)現(xiàn)大量的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體等細(xì)胞器,可見少量自噬泡或自噬體。DMY(60 mg/L)處理24小時組Jurkat細(xì)胞多呈不規(guī)則形,細(xì)胞核稀疏成網(wǎng)狀,細(xì)胞核內(nèi)可發(fā)現(xiàn)部分染色質(zhì)固縮,部分線粒體出現(xiàn)空泡化,其他細(xì)胞器部分腫脹,少部分細(xì)胞膜出現(xiàn)破裂,細(xì)胞腫脹明顯,細(xì)胞質(zhì)中可發(fā)現(xiàn)雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小體和單層膜的自噬溶酶體,其中包含有處在不同降解階段的胞漿成分或細(xì)胞器;與對照組比較,DMY(60 mg/L)處理24小時組細(xì)胞中雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小體和單層膜的自噬溶酶體的數(shù)量及自噬泡占胞質(zhì)總面積的百分率顯著性增加(P㩳0.05)。4.與對照組比較,DMY(60 mg/L)處理24小時組Jurkat細(xì)胞中自噬相關(guān)基因Beclin 1和LC3-Ⅱ的表達顯著上調(diào),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值顯著增加,而p62的表達顯著降低(P㩳0.05)。5.與對照組比較,DMY(60 mg/L)處理24小時組Jurkat細(xì)胞中mTOR mRNA和蛋白的表達均顯著降低(P㩳0.05)。6.自噬抑制劑3-MA部分取消了DMY抑制Jurkat細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡的作用(P㩳0.05)。結(jié)論:二氫楊梅素可抑制Jurkat細(xì)胞的增殖,并誘導(dǎo)其凋亡,其機制可能與DMY下調(diào)mTOR的表達,誘導(dǎo)細(xì)胞自噬有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：二氫楊梅素 急性T細(xì)胞白血病 增殖 凋亡 自噬 自噬相關(guān)蛋白 哺乳動物雷帕霉素靶蛋白
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 中英文縮略詞12-14
• 第1章 緒論14-18
• 第2章 材料與方法18-26
• 2.1 試劑和儀器18-19
• 2.1.1 主要藥品及試劑18-19
• 2.1.2 主要儀器19
• 2.2 實驗中主要溶液的配制19-20
• 2.2.1 磷酸鹽緩沖液的配制19
• 2.2.2 上樣緩沖液(6×)的配制19
• 2.2.3 TBST緩沖液的配制19-20
• 2.2.4 MBST細(xì)胞裂解液的配制20
• 2.2.5 TBE緩沖液(10×)的配制20
• 2.3 實驗方法20-26
• 2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇和培養(yǎng)20
• 2.3.2 實驗分組20-21
• 2.3.3 MTT比色法檢測細(xì)胞增殖21
• 2.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡21
• 2.3.5 透射電鏡檢測21-22
• 2.3.6 Real-time PCR分析22-23
• 2.3.7 BCA法測定蛋白濃度23
• 2.3.8 Western Blot分析23-25
• 2.3.9 統(tǒng)計學(xué)方法25-26
• 第3章 結(jié)果26-34
• 3.1 二氫楊梅素抑制急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞的增殖26-27
• 3.2 二氫楊梅素對急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞凋亡的影響27-28
• 3.3 二氫楊梅素對急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響28-29
• 3.4 二氫楊梅素對急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞Beclin 1 表達的影響29-30
• 3.5 二氫楊梅素對急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞LC3表達的影響30-31
• 3.6 二氫楊梅素對急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞p62表達的影響31
• 3.7 二氫楊梅素對急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞中mTOR表達的影響31-32
• 3.8 自噬抑制劑 3-MA對二氫楊梅素抑制Jurkat細(xì)胞增殖的影響32
• 3.9 自噬抑制劑 3-MA對二氫楊梅素誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞調(diào)亡的影響32-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結(jié)論38-40
• 參考文獻40-46
• 綜述46-56
• 參考文獻50-56
• 碩士期間發(fā)表的論文56-58
• 致謝58

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