本文關(guān)鍵詞：中西醫(yī)結(jié)合防治重型顱腦損傷后腦缺血作用機理的臨床與實驗研究

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【摘要】： 1研究目的 急性顱腦損傷已成為一種嚴重危害人類健康的疾病。顱腦繼發(fā)性損傷是導(dǎo)致顱腦損傷病人死亡或殘廢的重要原因。繼發(fā)性顱腦損傷發(fā)生機制十分復(fù)雜,其中創(chuàng)傷性腦缺血是目前研究的一個難點和熱點。在防治顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血方面許多學(xué)者做出了很大的努力,逐漸形成了一套治療方案,有控制血壓、保持呼吸通暢、適時手術(shù)、高壓氧治療、亞低溫治療、使用促進腦細胞代謝藥物等,這些措施都能在一定程度上改善創(chuàng)傷性腦缺血狀態(tài)以及預(yù)后,但各自有其不足之處,許多方面還存在爭議,有待進一步深入驗證。 文獻調(diào)研和臨床實踐證實,中西醫(yī)結(jié)合在防治重型顱腦損傷方面能發(fā)揮顯著療效,然而其具體的作用機理,特別是對創(chuàng)傷性腦缺血的防治作用機理研究報道甚少,阻礙了臨床拓展運用。我科在此領(lǐng)域經(jīng)過多年臨床應(yīng)用和經(jīng)驗積累,認為在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上,結(jié)合運用活血化瘀、豁痰開竅及通腑瀉熱中藥,治療重型顱腦損傷能祛瘀血、豁痰濕、瀉內(nèi)熱、起到開竅醒腦,改善缺血缺氧狀態(tài),有效解決顱腦外傷后出現(xiàn)的神昏、高熱、呼吸困難、肢體功能障礙、大便閉結(jié)、痰多粘稠等癥狀,較好地改善了預(yù)后。因此,理論上講,在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上,結(jié)合運用活血化瘀、豁痰開竅及通腑瀉熱中藥對于防治重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血應(yīng)該有確切的作用機制和明確的臨床療效,值得我們研究證實。 本研究擬從臨床研究和實驗研究兩方面著手,就中西醫(yī)結(jié)合對重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的防治作用機理進行深入研究,為拓展其臨床運用提供有價值的依據(jù)。 2研究方法與結(jié)果 2.1中西醫(yī)結(jié)合對重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治作用機理的臨床研究 方法:我們選擇自2007年1月至2009年3月在廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院顱腦科病房確診的急性重型顱腦損傷住院病人80例,嚴格執(zhí)行納入標準和排除標準,隨機分組為對照組和治療組,從入院第1天開始,采用不同治療處理方案,對照組采用單純西醫(yī)常規(guī)治療,治療組則在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用活血化瘀湯藥鼻飼、豁痰開竅中藥針劑靜滴、配合通腑瀉熱中藥灌腸治療,從腦血管痙攣發(fā)生率、顱內(nèi)血流速度變化、GCS計分變化、顱腦CT檢查外傷性腦梗塞的發(fā)生率、相關(guān)安全性指標檢測等方面進行連續(xù)動態(tài)觀察,持續(xù)18天。數(shù)據(jù)處理,采用SPSS10.0軟件包分析,計量資料用t檢驗,計數(shù)資料用X~2檢驗,顯著性水平取α=0.05。 結(jié)果:(1)入院后第3天兩組患者MCA、ACA血流速度的均數(shù)有顯著性差異(p＜0.05);第6天兩組患者MCA、ACA、PCA、VA血流速度的均數(shù)有顯著性差異(P＜0.05),其中以MCA流速的均數(shù)相差最大:第12天兩組患者MCA、ACA、BA、VA血流速度的均數(shù)有顯著性差異(P＜0.05);第18天兩組患者MCA、PCA的血流速度的均數(shù)有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05),但差異均較小。(2)入院后第3天、第6天、第12天兩組患者腦血管痙攣發(fā)生率均存在顯著性差異(P＜0.05),兩組血管痙攣情況隨著時間延長均逐漸緩解;(3)兩組患者GCS計分在入院第1天無顯著性差異(P＞0.05),第3天、第6天、第12天、第18天兩組患者的GCS計分均存在顯著性差異(P＜0.05);(4)兩組患者創(chuàng)傷性腦梗塞發(fā)生率分別為30.0%和10.0%,存在顯著性差異(P＜0.05);(5)在治療第6天、第12天復(fù)查血分析、肝腎功能,結(jié)果提示在用藥過程中無明顯毒副作用。 2.2補陽還五湯促進血管內(nèi)皮細胞增殖及血管新生的實驗研究 2.2.1補陽還五湯含藥血清的制備 方法:成年新西蘭兔,雌雄各半,分高、中、低劑量中藥組和生理鹽水對照組,每天灌胃一次,連續(xù)3天采血。麻醉后無菌操作下右頸動脈采血,離心、收集血清、滅活、過濾,分組包裝,低溫保存。 結(jié)果:本法采血前飼養(yǎng)動物情況良好,右頸動脈處采血每只兔可收集50ml左右新鮮血液,操作容易,采血量較多。 2.2.2兔血管內(nèi)皮細胞的體外原代培養(yǎng)與傳代 方法:取新西蘭兔胸主動脈,外翻置于0.1%Ⅱ型膠原酶中消化收集消化液,離心收集細胞分瓶培養(yǎng),72小時后換液培養(yǎng);原代細胞8天左右鋪滿瓶底,用0.25%的胰蛋白酶消化,吹打分散,計數(shù),分瓶傳代培養(yǎng)。 結(jié)果:原代內(nèi)皮細胞48小時大部分貼壁,細胞呈小圓形、多角形,有橢圓形核,72小時偽足伸出;4-8天內(nèi)細胞迅速生長,8-9天長成單層,鋪滿瓶底。傳代細胞4—8小時內(nèi)貼壁伸出偽足,7天內(nèi)長成單層;10天以上呈鵝卵石樣緊密排列,可見旋渦狀;內(nèi)皮細胞傳10代以上其特征不變。 2.2.3兔血管內(nèi)皮細胞的鑒定試驗 方法:倒置相差顯微鏡下觀察細胞分裂形成單層時的形態(tài)進行鑒定;免疫熒光法鑒定:將細胞培養(yǎng)在載玻片上形成單層貼片,經(jīng)酒精、ⅧR—Ag、羊抗鼠IgG及熒光標記的SABC作用,放于熒光顯微鏡下觀察,并作陰性對照。 結(jié)果:內(nèi)皮細胞呈小圓形、多角形,有橢圓形核。免疫熒光法可見大量的綠色細胞,細胞漿、膜上有明顯染色,細胞核無染色。 2.2.4兔血管內(nèi)皮細胞的增殖及藥物血清的作用 方法:用MTT法測細胞增殖,繪制細胞生長曲線;將不同劑量不同濃度藥物血清作用促進細胞增殖,比較不同劑量不同濃度藥物血清的作用效果。 結(jié)果:5—8天為快速增長期,10天左右達到增殖的高峰,11—14天后增殖呈平坦趨勢。相同劑量不同濃度中10%含藥血清組、20%含藥血清組較5%的含藥血清組有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);相同濃度不同劑量中劑量組與低劑量組,高劑量組與低劑量組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。 2.2.5兔血管內(nèi)皮細胞分裂指數(shù)的測定 方法:采用Giemsa染色法,先于低倍光鏡下選擇分散較好、細胞核著色清楚而胞質(zhì)無色的細胞,再轉(zhuǎn)到高倍鏡下觀察細胞是否處于分裂期;每個樣本計數(shù)1000個以上的細胞,記錄分裂期細胞數(shù)和間期細胞數(shù),再計算細胞分裂指數(shù)。 結(jié)果:細胞在培養(yǎng)階段中80%以上的細胞處于細胞間期,20%以下的細胞處于分裂期。不同含藥血清培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞均較空白組細胞的分裂指數(shù)增加,增加幅度組間有差異;各組6-8天達到分裂高峰,以后分裂指數(shù)逐步下降,11-12天降至1%左右。 2.2.6兔血管內(nèi)皮細胞的透射電鏡觀察 方法:用不同劑量含藥血清培養(yǎng)干預(yù)細胞后,準備細胞樣品,用JEM-200CX透射電鏡觀察內(nèi)皮細胞形態(tài),包括細胞核、細胞器、細胞漿、細胞內(nèi)脂滴大小分布等。 結(jié)果:含藥血清細胞較空白組細胞排列明顯緊密,細胞核較大,染色質(zhì)清晰;胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生擴張;線粒體相對發(fā)達,嵴結(jié)構(gòu)及嵴上顆粒清晰;亦有大量吞飲小泡,細胞間有內(nèi)皮細胞間連接或橋粒,可見細胞內(nèi)有大糖原顆粒和細胞特殊顆粒等。 2.2.7補陽還五湯含藥血清促進雞胚絨毛尿囊膜血管生成的試驗 方法:將高、中、低劑量中藥含藥血清及空白對照血清作為被測物置于雞胚絨毛尿囊膜表面的載體上,作用充分后后制備CAM標本,解剖顯微鏡下觀察、計算機圖像分析儀圖像分析,得到相關(guān)定量數(shù)據(jù),進一步統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果:含藥血清具有明顯的促進雞胚絨毛尿囊膜血管生成的作用,用藥組較空白組有顯著性差異。 3結(jié)論 3.1重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的中醫(yī)病機可概括為氣滯血瘀,痰瘀熱交結(jié),閉阻清竅。 3.2在西醫(yī)治療基礎(chǔ)上結(jié)合活血化瘀湯藥鼻飼、豁痰開竅針劑靜滴及通腑瀉熱中藥灌腸,能降低腦外傷后顱內(nèi)血流速度,防治腦血管痙攣,減少腦梗塞發(fā)生率,改善腦缺血狀態(tài),提高GCS評分,改善預(yù)后,且對患者無明顯肝腎功能損害,安全有效。 3.3補陽還五湯可能通過改善血管內(nèi)皮細胞能量合成,促進細胞新陳代謝及功能活動,誘導(dǎo)產(chǎn)生促進內(nèi)皮細胞增殖的生長因子來促進血管內(nèi)皮細胞增殖;可能激活血管內(nèi)皮及外膜細胞,促進其分裂、出芽和遷移,啟動血管新生程序,促進內(nèi)皮細胞分化及細胞連接,形成原始血管腔,并進一步促進新生血管穩(wěn)定和成熟來促進血管新生。 3.4綜合臨床和實驗研究:中西醫(yī)結(jié)合對重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血有顯著的防治效果,其作用機理之一,可能是通過保護受損腦微血管內(nèi)皮細胞,促進內(nèi)皮細胞增殖和遷移,修復(fù)受損微血管,并在缺血區(qū)域促進生成新血管,提高局部腦血流,改善腦微循環(huán),從而保護腦組織和神經(jīng)功能。 4.本課題的特點和創(chuàng)新性 4.1在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上運用活血化瘀、豁痰開竅及通腑瀉熱中藥聯(lián)合用藥防治重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血是一個治療理念的創(chuàng)新。 4.2對重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的病機認識,我們第一次完整概括為氣滯血瘀,痰瘀熱交結(jié),閉阻清竅。 4.3將中藥血清藥理學(xué)、血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)及雞胚絨毛尿囊膜血管生成實驗等相結(jié)合,應(yīng)用到中醫(yī)藥防治創(chuàng)傷性腦缺血機理的研究,是一個全新的嘗試。
【關(guān)鍵詞】：中西醫(yī)結(jié)合 重型顱腦損傷 腦缺血 血管內(nèi)皮細胞 血管生成
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R651.1
【目錄】：

• 中文摘要3-7
• Abstract7-17
• 引言17-19
• 第一章 研究背景19-37
• 第一節(jié) 祖國醫(yī)學(xué)對顱腦損傷的認識19-20
• 1.概念研究19
• 2.顱腦損傷病機研究19
• 3.顱腦損傷治療研究19-20
• 第二節(jié) 重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究20-30
• 1.重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血病因?qū)W研究20-22
• 2.重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血病理生理學(xué)研究22-26
• 3.重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血診斷方法研究26-28
• 4.重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治研究28-30
• 第三節(jié) 中西醫(yī)結(jié)合對重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治作用的理論依據(jù)30-33
• 1.關(guān)于單用“活血化癖”治法30-31
• 2.關(guān)于單用“清熱解毒、豁痰開竅”治法31-32
• 3.關(guān)于單用“通腑瀉熱”治法32
• 4.關(guān)于"活血化瘀、豁痰開竅與通腑瀉熱"治法聯(lián)合應(yīng)用的體會32
• 5.中西醫(yī)結(jié)合對重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治作用的臨床研究設(shè)想32-33
• 第四節(jié) 血管內(nèi)皮細胞在創(chuàng)傷性腦缺血病變過程中的作用地位研究33-35
• 1.血管內(nèi)皮細胞在創(chuàng)傷后腦微血管病變中的作用33-34
• 2.血管內(nèi)皮細胞在腦缺血再灌注中的作用34
• 3.血管內(nèi)皮細胞在腦缺血后血管新生的作用34
• 4.腦缺血后神經(jīng)發(fā)生和血管發(fā)生的關(guān)系的研究34-35
• 第五節(jié) 補陽還五湯治療缺血性腦病的研究基礎(chǔ)35-37
• 1.改善血流動力學(xué)和血液流變性,抗血栓形成35
• 2.對Ca~(2+)、Na~+離子通道及其相關(guān)基因的影響35
• 3.清除體內(nèi)自由基和抗過氧化作用35-36
• 4.對腦組織興奮性氨基酸(EAA)的影響36
• 5.對細胞凋亡及其相關(guān)基因表達的影響36-37
• 第二章 臨床研究部分 中西醫(yī)結(jié)合對重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治作用的臨床研究37-49
• 1 研究設(shè)計方案37-39
• 1.1 病例37-39
• 2 治療方法39-42
• 2.1 對照組(單純西醫(yī)常規(guī)治療)39-40
• 2.2 治療組中西醫(yī)結(jié)合治療措施40-41
• 2.3 治療時間41
• 2.4 研究觀察指標41
• 2.5 數(shù)據(jù)處理41
• 2.6 不良事件或不良反應(yīng)觀察與處理41-42
• 2.7 終止研究標準42
• 2.8 研究質(zhì)量控制42
• 3 結(jié)果42-44
• 3.1 治療前后兩組患者顱內(nèi)血流速度變化情況42-43
• 3.2 第1、3、6、12、18天兩組患者發(fā)生腦血管痙攣情況43-44
• 3.3 入院第1、3、6、12、18天兩組患者GCS計分對比44
• 3.4 觀察期內(nèi)兩組患者發(fā)生腦梗塞情況比較44
• 3.5 兩組患者治療后不良事件或不良反應(yīng)觀察情況44
• 4 討論44-48
• 4.1 重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的病機探索44
• 4.2 三種中藥聯(lián)合應(yīng)用的意義44-46
• 4.3 中西醫(yī)結(jié)合治療在防治創(chuàng)傷性腦缺血的療效分析46-47
• 4.4 中西醫(yī)結(jié)合防治創(chuàng)傷性腦缺血的機理探討47-48
• 5 結(jié)論48-49
• 第三章 實驗研究部分 補陽還五湯促進血管內(nèi)皮細胞增殖及血管新生的實驗研究49-70
• 第一節(jié) 補陽還五湯含藥血清制作49-50
• 1 材料與方法49
• 2 操作步驟49-50
• 3 結(jié)果50
• 第二節(jié) 兔血管內(nèi)皮細胞的原代培養(yǎng)及傳代50-52
• 1 材料與方法50-51
• 2 操作步驟51
• 3 結(jié)果51-52
• 第三節(jié) 兔血管內(nèi)皮細胞的鑒定52-53
• 1 材料與方法52
• 2 操作步驟52-53
• 3 結(jié)果53
• 第四節(jié) 兔血管內(nèi)皮細胞的增殖及藥物血清的作用53-55
• 1 材料與方法53
• 2 操作步驟53-54
• 3 結(jié)果54-55
• 第五節(jié) 兔血管內(nèi)皮細胞分裂指數(shù)的測定55-57
• 1 材料和方法55
• 2 操作步驟55-56
• 3 結(jié)果56-57
• 第六節(jié) 兔血管內(nèi)皮細胞的透射電鏡觀察57-58
• 1 材料和方法57
• 2 操作步驟57
• 3 結(jié)果57-58
• 第七節(jié) 補陽還五湯含藥血清促進雞胚絨毛尿囊膜血管生成的實驗研究58-62
• 1 材料與方法58
• 2 操作步驟58-60
• 3 結(jié)果60-62
• 第八節(jié) 實驗部分討論62-70
• 1 體外細胞培養(yǎng)及中藥血清藥理學(xué)方法在中藥藥理現(xiàn)代化研究的應(yīng)用探討62-63
• 2 血管內(nèi)皮細胞在血管生成中的作用地位分析63-65
• 3 血管內(nèi)皮細胞的體外分離培養(yǎng)65
• 4 血管內(nèi)皮細胞的鑒定65-66
• 5 血管內(nèi)皮細胞的增殖66-67
• 6 補陽還五湯含藥血清促進血管內(nèi)皮細胞增殖的可能作用機制67-68
• 7 補陽還五湯含藥血清促進雞胚絨毛尿囊膜血管生成的可能機制68-69
• 8 結(jié)論69-70
• 第四章 結(jié)語70-72
• 參考文獻72-80
• 附錄80-89
• 博士學(xué)習(xí)期間發(fā)表的相關(guān)文章與課題89-90
• 致謝90

【引證文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李洪朋;;祛瘀通竅湯治療重型顱腦損傷臨床研究[J];醫(yī)藥與保健;2014年02期

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本文編號：853147