本文關(guān)鍵詞：中西醫(yī)結(jié)合防治重型顱腦損傷后腦缺血作用機(jī)理的臨床與實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】： 1研究目的 急性顱腦損傷已成為一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病。顱腦繼發(fā)性損傷是導(dǎo)致顱腦損傷病人死亡或殘廢的重要原因。繼發(fā)性顱腦損傷發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜,其中創(chuàng)傷性腦缺血是目前研究的一個(gè)難點(diǎn)和熱點(diǎn)。在防治顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血方面許多學(xué)者做出了很大的努力,逐漸形成了一套治療方案,有控制血壓、保持呼吸通暢、適時(shí)手術(shù)、高壓氧治療、亞低溫治療、使用促進(jìn)腦細(xì)胞代謝藥物等,這些措施都能在一定程度上改善創(chuàng)傷性腦缺血狀態(tài)以及預(yù)后,但各自有其不足之處,許多方面還存在爭議,有待進(jìn)一步深入驗(yàn)證。 文獻(xiàn)調(diào)研和臨床實(shí)踐證實(shí),中西醫(yī)結(jié)合在防治重型顱腦損傷方面能發(fā)揮顯著療效,然而其具體的作用機(jī)理,特別是對(duì)創(chuàng)傷性腦缺血的防治作用機(jī)理研究報(bào)道甚少,阻礙了臨床拓展運(yùn)用。我科在此領(lǐng)域經(jīng)過多年臨床應(yīng)用和經(jīng)驗(yàn)積累,認(rèn)為在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上,結(jié)合運(yùn)用活血化瘀、豁痰開竅及通腑瀉熱中藥,治療重型顱腦損傷能祛瘀血、豁痰濕、瀉內(nèi)熱、起到開竅醒腦,改善缺血缺氧狀態(tài),有效解決顱腦外傷后出現(xiàn)的神昏、高熱、呼吸困難、肢體功能障礙、大便閉結(jié)、痰多粘稠等癥狀,較好地改善了預(yù)后。因此,理論上講,在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上,結(jié)合運(yùn)用活血化瘀、豁痰開竅及通腑瀉熱中藥對(duì)于防治重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血應(yīng)該有確切的作用機(jī)制和明確的臨床療效,值得我們研究證實(shí)。 本研究擬從臨床研究和實(shí)驗(yàn)研究兩方面著手,就中西醫(yī)結(jié)合對(duì)重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的防治作用機(jī)理進(jìn)行深入研究,為拓展其臨床運(yùn)用提供有價(jià)值的依據(jù)。 2研究方法與結(jié)果 2.1中西醫(yī)結(jié)合對(duì)重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治作用機(jī)理的臨床研究 方法:我們選擇自2007年1月至2009年3月在廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院顱腦科病房確診的急性重型顱腦損傷住院病人80例,嚴(yán)格執(zhí)行納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn),隨機(jī)分組為對(duì)照組和治療組,從入院第1天開始,采用不同治療處理方案,對(duì)照組采用單純西醫(yī)常規(guī)治療,治療組則在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用活血化瘀湯藥鼻飼、豁痰開竅中藥針劑靜滴、配合通腑瀉熱中藥灌腸治療,從腦血管痙攣發(fā)生率、顱內(nèi)血流速度變化、GCS計(jì)分變化、顱腦CT檢查外傷性腦梗塞的發(fā)生率、相關(guān)安全性指標(biāo)檢測(cè)等方面進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察,持續(xù)18天。數(shù)據(jù)處理,采用SPSS10.0軟件包分析,計(jì)量資料用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料用X~2檢驗(yàn),顯著性水平取α=0.05。 結(jié)果:(1)入院后第3天兩組患者M(jìn)CA、ACA血流速度的均數(shù)有顯著性差異(p＜0.05);第6天兩組患者M(jìn)CA、ACA、PCA、VA血流速度的均數(shù)有顯著性差異(P＜0.05),其中以MCA流速的均數(shù)相差最大:第12天兩組患者M(jìn)CA、ACA、BA、VA血流速度的均數(shù)有顯著性差異(P＜0.05);第18天兩組患者M(jìn)CA、PCA的血流速度的均數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05),但差異均較小。(2)入院后第3天、第6天、第12天兩組患者腦血管痙攣發(fā)生率均存在顯著性差異(P＜0.05),兩組血管痙攣情況隨著時(shí)間延長均逐漸緩解;(3)兩組患者GCS計(jì)分在入院第1天無顯著性差異(P＞0.05),第3天、第6天、第12天、第18天兩組患者的GCS計(jì)分均存在顯著性差異(P＜0.05);(4)兩組患者創(chuàng)傷性腦梗塞發(fā)生率分別為30.0%和10.0%,存在顯著性差異(P＜0.05);(5)在治療第6天、第12天復(fù)查血分析、肝腎功能,結(jié)果提示在用藥過程中無明顯毒副作用。 2.2補(bǔ)陽還五湯促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及血管新生的實(shí)驗(yàn)研究 2.2.1補(bǔ)陽還五湯含藥血清的制備 方法:成年新西蘭兔,雌雄各半,分高、中、低劑量中藥組和生理鹽水對(duì)照組,每天灌胃一次,連續(xù)3天采血。麻醉后無菌操作下右頸動(dòng)脈采血,離心、收集血清、滅活、過濾,分組包裝,低溫保存。 結(jié)果:本法采血前飼養(yǎng)動(dòng)物情況良好,右頸動(dòng)脈處采血每只兔可收集50ml左右新鮮血液,操作容易,采血量較多。 2.2.2兔血管內(nèi)皮細(xì)胞的體外原代培養(yǎng)與傳代 方法:取新西蘭兔胸主動(dòng)脈,外翻置于0.1%Ⅱ型膠原酶中消化收集消化液,離心收集細(xì)胞分瓶培養(yǎng),72小時(shí)后換液培養(yǎng);原代細(xì)胞8天左右鋪滿瓶底,用0.25%的胰蛋白酶消化,吹打分散,計(jì)數(shù),分瓶傳代培養(yǎng)。 結(jié)果:原代內(nèi)皮細(xì)胞48小時(shí)大部分貼壁,細(xì)胞呈小圓形、多角形,有橢圓形核,72小時(shí)偽足伸出;4-8天內(nèi)細(xì)胞迅速生長,8-9天長成單層,鋪滿瓶底。傳代細(xì)胞4—8小時(shí)內(nèi)貼壁伸出偽足,7天內(nèi)長成單層;10天以上呈鵝卵石樣緊密排列,可見旋渦狀;內(nèi)皮細(xì)胞傳10代以上其特征不變。 2.2.3兔血管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定試驗(yàn) 方法:倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞分裂形成單層時(shí)的形態(tài)進(jìn)行鑒定;免疫熒光法鑒定:將細(xì)胞培養(yǎng)在載玻片上形成單層貼片,經(jīng)酒精、ⅧR—Ag、羊抗鼠IgG及熒光標(biāo)記的SABC作用,放于熒光顯微鏡下觀察,并作陰性對(duì)照。 結(jié)果:內(nèi)皮細(xì)胞呈小圓形、多角形,有橢圓形核。免疫熒光法可見大量的綠色細(xì)胞,細(xì)胞漿、膜上有明顯染色,細(xì)胞核無染色。 2.2.4兔血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及藥物血清的作用 方法:用MTT法測(cè)細(xì)胞增殖,繪制細(xì)胞生長曲線;將不同劑量不同濃度藥物血清作用促進(jìn)細(xì)胞增殖,比較不同劑量不同濃度藥物血清的作用效果。 結(jié)果:5—8天為快速增長期,10天左右達(dá)到增殖的高峰,11—14天后增殖呈平坦趨勢(shì)。相同劑量不同濃度中10%含藥血清組、20%含藥血清組較5%的含藥血清組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);相同濃度不同劑量中劑量組與低劑量組,高劑量組與低劑量組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。 2.2.5兔血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂指數(shù)的測(cè)定 方法:采用Giemsa染色法,先于低倍光鏡下選擇分散較好、細(xì)胞核著色清楚而胞質(zhì)無色的細(xì)胞,再轉(zhuǎn)到高倍鏡下觀察細(xì)胞是否處于分裂期;每個(gè)樣本計(jì)數(shù)1000個(gè)以上的細(xì)胞,記錄分裂期細(xì)胞數(shù)和間期細(xì)胞數(shù),再計(jì)算細(xì)胞分裂指數(shù)。 結(jié)果:細(xì)胞在培養(yǎng)階段中80%以上的細(xì)胞處于細(xì)胞間期,20%以下的細(xì)胞處于分裂期。不同含藥血清培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞均較空白組細(xì)胞的分裂指數(shù)增加,增加幅度組間有差異;各組6-8天達(dá)到分裂高峰,以后分裂指數(shù)逐步下降,11-12天降至1%左右。 2.2.6兔血管內(nèi)皮細(xì)胞的透射電鏡觀察 方法:用不同劑量含藥血清培養(yǎng)干預(yù)細(xì)胞后,準(zhǔn)備細(xì)胞樣品,用JEM-200CX透射電鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài),包括細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞漿、細(xì)胞內(nèi)脂滴大小分布等。 結(jié)果:含藥血清細(xì)胞較空白組細(xì)胞排列明顯緊密,細(xì)胞核較大,染色質(zhì)清晰;胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生擴(kuò)張;線粒體相對(duì)發(fā)達(dá),嵴結(jié)構(gòu)及嵴上顆粒清晰;亦有大量吞飲小泡,細(xì)胞間有內(nèi)皮細(xì)胞間連接或橋粒,可見細(xì)胞內(nèi)有大糖原顆粒和細(xì)胞特殊顆粒等。 2.2.7補(bǔ)陽還五湯含藥血清促進(jìn)雞胚絨毛尿囊膜血管生成的試驗(yàn) 方法:將高、中、低劑量中藥含藥血清及空白對(duì)照血清作為被測(cè)物置于雞胚絨毛尿囊膜表面的載體上,作用充分后后制備CAM標(biāo)本,解剖顯微鏡下觀察、計(jì)算機(jī)圖像分析儀圖像分析,得到相關(guān)定量數(shù)據(jù),進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果:含藥血清具有明顯的促進(jìn)雞胚絨毛尿囊膜血管生成的作用,用藥組較空白組有顯著性差異。 3結(jié)論 3.1重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的中醫(yī)病機(jī)可概括為氣滯血瘀,痰瘀熱交結(jié),閉阻清竅。 3.2在西醫(yī)治療基礎(chǔ)上結(jié)合活血化瘀湯藥鼻飼、豁痰開竅針劑靜滴及通腑瀉熱中藥灌腸,能降低腦外傷后顱內(nèi)血流速度,防治腦血管痙攣,減少腦梗塞發(fā)生率,改善腦缺血狀態(tài),提高GCS評(píng)分,改善預(yù)后,且對(duì)患者無明顯肝腎功能損害,安全有效。 3.3補(bǔ)陽還五湯可能通過改善血管內(nèi)皮細(xì)胞能量合成,促進(jìn)細(xì)胞新陳代謝及功能活動(dòng),誘導(dǎo)產(chǎn)生促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的生長因子來促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖;可能激活血管內(nèi)皮及外膜細(xì)胞,促進(jìn)其分裂、出芽和遷移,啟動(dòng)血管新生程序,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分化及細(xì)胞連接,形成原始血管腔,并進(jìn)一步促進(jìn)新生血管穩(wěn)定和成熟來促進(jìn)血管新生。 3.4綜合臨床和實(shí)驗(yàn)研究:中西醫(yī)結(jié)合對(duì)重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血有顯著的防治效果,其作用機(jī)理之一,可能是通過保護(hù)受損腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移,修復(fù)受損微血管,并在缺血區(qū)域促進(jìn)生成新血管,提高局部腦血流,改善腦微循環(huán),從而保護(hù)腦組織和神經(jīng)功能。 4.本課題的特點(diǎn)和創(chuàng)新性 4.1在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上運(yùn)用活血化瘀、豁痰開竅及通腑瀉熱中藥聯(lián)合用藥防治重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血是一個(gè)治療理念的創(chuàng)新。 4.2對(duì)重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的病機(jī)認(rèn)識(shí),我們第一次完整概括為氣滯血瘀,痰瘀熱交結(jié),閉阻清竅。 4.3將中藥血清藥理學(xué)、血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)及雞胚絨毛尿囊膜血管生成實(shí)驗(yàn)等相結(jié)合,應(yīng)用到中醫(yī)藥防治創(chuàng)傷性腦缺血機(jī)理的研究,是一個(gè)全新的嘗試。
【關(guān)鍵詞】：中西醫(yī)結(jié)合 重型顱腦損傷 腦缺血 血管內(nèi)皮細(xì)胞 血管生成
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R651.1
【目錄】：

• 中文摘要3-7
• Abstract7-17
• 引言17-19
• 第一章 研究背景19-37
• 第一節(jié) 祖國醫(yī)學(xué)對(duì)顱腦損傷的認(rèn)識(shí)19-20
• 1.概念研究19
• 2.顱腦損傷病機(jī)研究19
• 3.顱腦損傷治療研究19-20
• 第二節(jié) 重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究20-30
• 1.重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血病因?qū)W研究20-22
• 2.重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血病理生理學(xué)研究22-26
• 3.重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血診斷方法研究26-28
• 4.重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治研究28-30
• 第三節(jié) 中西醫(yī)結(jié)合對(duì)重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治作用的理論依據(jù)30-33
• 1.關(guān)于單用“活血化癖”治法30-31
• 2.關(guān)于單用“清熱解毒、豁痰開竅”治法31-32
• 3.關(guān)于單用“通腑瀉熱”治法32
• 4.關(guān)于"活血化瘀、豁痰開竅與通腑瀉熱"治法聯(lián)合應(yīng)用的體會(huì)32
• 5.中西醫(yī)結(jié)合對(duì)重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治作用的臨床研究設(shè)想32-33
• 第四節(jié) 血管內(nèi)皮細(xì)胞在創(chuàng)傷性腦缺血病變過程中的作用地位研究33-35
• 1.血管內(nèi)皮細(xì)胞在創(chuàng)傷后腦微血管病變中的作用33-34
• 2.血管內(nèi)皮細(xì)胞在腦缺血再灌注中的作用34
• 3.血管內(nèi)皮細(xì)胞在腦缺血后血管新生的作用34
• 4.腦缺血后神經(jīng)發(fā)生和血管發(fā)生的關(guān)系的研究34-35
• 第五節(jié) 補(bǔ)陽還五湯治療缺血性腦病的研究基礎(chǔ)35-37
• 1.改善血流動(dòng)力學(xué)和血液流變性,抗血栓形成35
• 2.對(duì)Ca~(2+)、Na~+離子通道及其相關(guān)基因的影響35
• 3.清除體內(nèi)自由基和抗過氧化作用35-36
• 4.對(duì)腦組織興奮性氨基酸(EAA)的影響36
• 5.對(duì)細(xì)胞凋亡及其相關(guān)基因表達(dá)的影響36-37
• 第二章 臨床研究部分 中西醫(yī)結(jié)合對(duì)重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血防治作用的臨床研究37-49
• 1 研究設(shè)計(jì)方案37-39
• 1.1 病例37-39
• 2 治療方法39-42
• 2.1 對(duì)照組(單純西醫(yī)常規(guī)治療)39-40
• 2.2 治療組中西醫(yī)結(jié)合治療措施40-41
• 2.3 治療時(shí)間41
• 2.4 研究觀察指標(biāo)41
• 2.5 數(shù)據(jù)處理41
• 2.6 不良事件或不良反應(yīng)觀察與處理41-42
• 2.7 終止研究標(biāo)準(zhǔn)42
• 2.8 研究質(zhì)量控制42
• 3 結(jié)果42-44
• 3.1 治療前后兩組患者顱內(nèi)血流速度變化情況42-43
• 3.2 第1、3、6、12、18天兩組患者發(fā)生腦血管痙攣情況43-44
• 3.3 入院第1、3、6、12、18天兩組患者GCS計(jì)分對(duì)比44
• 3.4 觀察期內(nèi)兩組患者發(fā)生腦梗塞情況比較44
• 3.5 兩組患者治療后不良事件或不良反應(yīng)觀察情況44
• 4 討論44-48
• 4.1 重型顱腦損傷后創(chuàng)傷性腦缺血的病機(jī)探索44
• 4.2 三種中藥聯(lián)合應(yīng)用的意義44-46
• 4.3 中西醫(yī)結(jié)合治療在防治創(chuàng)傷性腦缺血的療效分析46-47
• 4.4 中西醫(yī)結(jié)合防治創(chuàng)傷性腦缺血的機(jī)理探討47-48
• 5 結(jié)論48-49
• 第三章 實(shí)驗(yàn)研究部分 補(bǔ)陽還五湯促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及血管新生的實(shí)驗(yàn)研究49-70
• 第一節(jié) 補(bǔ)陽還五湯含藥血清制作49-50
• 1 材料與方法49
• 2 操作步驟49-50
• 3 結(jié)果50
• 第二節(jié) 兔血管內(nèi)皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)及傳代50-52
• 1 材料與方法50-51
• 2 操作步驟51
• 3 結(jié)果51-52
• 第三節(jié) 兔血管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定52-53
• 1 材料與方法52
• 2 操作步驟52-53
• 3 結(jié)果53
• 第四節(jié) 兔血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及藥物血清的作用53-55
• 1 材料與方法53
• 2 操作步驟53-54
• 3 結(jié)果54-55
• 第五節(jié) 兔血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂指數(shù)的測(cè)定55-57
• 1 材料和方法55
• 2 操作步驟55-56
• 3 結(jié)果56-57
• 第六節(jié) 兔血管內(nèi)皮細(xì)胞的透射電鏡觀察57-58
• 1 材料和方法57
• 2 操作步驟57
• 3 結(jié)果57-58
• 第七節(jié) 補(bǔ)陽還五湯含藥血清促進(jìn)雞胚絨毛尿囊膜血管生成的實(shí)驗(yàn)研究58-62
• 1 材料與方法58
• 2 操作步驟58-60
• 3 結(jié)果60-62
• 第八節(jié) 實(shí)驗(yàn)部分討論62-70
• 1 體外細(xì)胞培養(yǎng)及中藥血清藥理學(xué)方法在中藥藥理現(xiàn)代化研究的應(yīng)用探討62-63
• 2 血管內(nèi)皮細(xì)胞在血管生成中的作用地位分析63-65
• 3 血管內(nèi)皮細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)65
• 4 血管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定65-66
• 5 血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖66-67
• 6 補(bǔ)陽還五湯含藥血清促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的可能作用機(jī)制67-68
• 7 補(bǔ)陽還五湯含藥血清促進(jìn)雞胚絨毛尿囊膜血管生成的可能機(jī)制68-69
• 8 結(jié)論69-70
• 第四章 結(jié)語70-72
• 參考文獻(xiàn)72-80
• 附錄80-89
• 博士學(xué)習(xí)期間發(fā)表的相關(guān)文章與課題89-90
• 致謝90

【引證文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李洪朋;;祛瘀通竅湯治療重型顱腦損傷臨床研究[J];醫(yī)藥與保健;2014年02期

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本文編號(hào)：853147