本文關(guān)鍵詞：電針對(duì)便秘及腹瀉型腸易激綜合征模型大鼠的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是臨床上最常見(jiàn)的慢性功能性疾病之一，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，嚴(yán)重危害著患者的心身健康。目前對(duì)IBS的治療主要是以對(duì)癥治療為主,但效果并不理想，針灸治療臨床報(bào)道很多，，其療效為廣大患者認(rèn)可。但是其作用的機(jī)制目前尚未闡明，故探討針刺治療IBS的作用機(jī)制對(duì)IBS的治療和預(yù)防具有十分重要的意義。 目的：觀察電針對(duì)C-IBS和D-IBS大鼠模型內(nèi)臟高敏感性的影響和電針對(duì)C-IBS和D-IBS大鼠血漿CGRP和SP含量的影響，探討CGRP和SP參與電針治療IBS的作用和機(jī)制；檢測(cè)TRPV1、PAR4、CGRP、SP蛋白和mRNA在結(jié)腸組織的表達(dá)，從基因水平和蛋白水平上探討電針對(duì)TRPV1、PAR4、CGRP、SP表達(dá)的影響。以探討電針對(duì)IBS的作用機(jī)制。 方法：(1)采用冰水灌胃法制備C-IBS模型，乙酸灌腸加束縛應(yīng)激法復(fù)制D-IBS大鼠模型。(2)用糞便性狀分級(jí)和糞便含水量評(píng)價(jià)便秘和腹瀉的癥狀，以結(jié)直腸擴(kuò)張的疼痛閾值代表內(nèi)臟高敏感性，評(píng)價(jià)IBS模型的建立。(3)以大鼠結(jié)直腸擴(kuò)張時(shí)大鼠腹部回縮反射的壓力閾值為疼痛閾值，以疼痛閾值評(píng)估電針治療對(duì)大鼠內(nèi)臟敏感性的影響。(4)采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定大鼠血漿CGRP和SP水平。(5)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)大鼠結(jié)腸TRPV1、PAR4、CGRP、SP mRNA基因表達(dá)水平。(6)采用western blot和免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)大鼠結(jié)腸TRPV1、PAR4、CGRP、SP蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：(1)造模結(jié)束后，C-IBS和D-IBS模型大鼠糞便性狀分級(jí)和糞便含水量的改變符合IBS的糞便改變特征，與正常對(duì)照組有顯著性差異。C-IBS和D-IBS大鼠疼痛閾值明顯降低；各組大鼠結(jié)腸病理組織HE染色均未見(jiàn)明顯異常改變。(2)電針治療7天后，C-IBS和D-IBS大鼠便秘或腹瀉癥狀得到明顯改善。電針治療后各組大鼠直腸擴(kuò)張時(shí)的疼痛閾值存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與正常組大鼠相比，C-IBS和D-IBS模型組大鼠疼痛閾值明顯降低；與模型組相比，電針上巨虛組和電針大腸俞組大鼠疼痛閾值明顯升高。(3)電針結(jié)束后各組大鼠血漿CGRP和SP水平存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與C-N組大鼠相比C-M組大鼠血漿CGRP和SP水平升高(P0.01，P 0.01)。與C-M組相比C-DD組和C-DS組大鼠CGRP和SP水平水平顯著下降(P0.05，P0.01)。與D-N組大鼠相比D-M組大鼠血漿CGRP和SP水平升高(P0.01，P0.01)。與D-M組相比D-DD組和D-DS組大鼠CGRP和SP水平水平顯著下降(P0.05，P0.01)。(4)電針結(jié)束后各組大鼠組織中TRPV1、PAR4、CGRP、SP mRNA水平存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。C-IBS和D-IBS模型組各基因表達(dá)水平存在上升的趨勢(shì)，電針治療后各基因表達(dá)水平表現(xiàn)出不同程度的下降。(5)電針結(jié)束后各組大鼠結(jié)腸組織中TRPV1、PAR4、CGRP、SP蛋白含量存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。C-IBS和D-IBS模型組結(jié)腸組織中各蛋白含量存在上升的趨勢(shì)，電針治療后各蛋白含量表現(xiàn)出不同程度的下降。 結(jié)論：(1)冰水灌胃法和乙酸灌腸加束縛應(yīng)激法制備的模型，能很好的模擬臨床C-IBS和D-IBS的特征。(2)電針可以有效提高IBS內(nèi)臟高敏感大鼠對(duì)直結(jié)腸擴(kuò)張的感覺(jué)閾值，可改善C-IBS和D-IBS的腹痛或腹部不適癥狀。(3)電針治療可下調(diào)血漿CGRP和SP水平，電針可能通過(guò)降低血漿中CGRP和SP含量，降低內(nèi)臟敏感性，改善胃腸功能。(4)TRPV1、PAR4、CGRP、SP和IBS內(nèi)臟高敏感性密切相關(guān)，電針治療可下調(diào)結(jié)腸組織中TRPV1、PAR4、CGRP、SP蛋白和mRNA的表達(dá)。電針可以有效調(diào)節(jié)胃腸功能，降低內(nèi)臟敏感性，并具有良好的鎮(zhèn)痛作用，從而改善便秘型和腹瀉型IBS的臨床癥狀。TRPV1、PAR4、CGRP、SP變化可能是電針治療IBS作用的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：電針 腸易激綜合征 TRPV1 PAR4
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R-332;R245
【目錄】：

• 提要3-5
• Abstract5-13
• 引言13-15
• 一 便秘及腹瀉型腸易激綜合征大鼠模型的制備與評(píng)價(jià)15-24
• 1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器15
• 1.3 主要試劑15
• 1.4 主要溶液配制15-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 2.1 動(dòng)物分組16
• 2.2 模型的制備16
• 2.3 大鼠糞便觀察及性狀評(píng)分16-17
• 2.4 糞便含水量17
• 2.5 非傷害性結(jié)直腸球囊擴(kuò)張反射(CRD)容量閾值測(cè)定17-18
• 2.6 小腸推進(jìn)率測(cè)定18
• 2.7 結(jié)腸組織 HE 染色18-19
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-23
• 3.1 大鼠糞便觀察及性狀評(píng)分19
• 3.2 糞便含水量19-20
• 3.3 腹部回縮反射的最小容量閾值20-21
• 3.4 小腸推進(jìn)率21-22
• 3.5 結(jié)腸組織 HE 染色22-23
• 4 小結(jié)23-24
• 二 電針對(duì)便秘及腹瀉型腸易激綜合征大鼠胃腸功能的調(diào)節(jié)作用24-29
• 1 實(shí)驗(yàn)材料24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物24
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器24
• 1.3 主要試劑24
• 2 實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 2.1 動(dòng)物分組24
• 2.2 模型的制備24
• 2.3 取穴及針刺方法24-25
• 2.4 糞便性狀觀察及糞便含水量檢測(cè)25
• 2.5 非傷害性結(jié)直腸球囊擴(kuò)張反射(CRD)閾值測(cè)定25
• 2.6 統(tǒng)計(jì)處理25
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-28
• 3.1 電針對(duì) IBS 大鼠糞便性狀和糞便含水量的影響25-27
• 3.2 電針對(duì) IBS 大鼠腹部回縮反射容量閾值的影響27-28
• 4 小結(jié)28-29
• 三 電針對(duì)便秘及腹瀉型腸易激綜合征大鼠血漿 CGRP 和 SP 含量的影響29-34
• 1 材料與方法29
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物29
• 1.2 主要儀器和器材29
• 1.3 主要試劑29
• 1.4 主要溶液配制29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• 2.1 動(dòng)物分組29
• 2.2 模型制備29
• 2.3 取穴及針刺方法29-30
• 2.4 ELISA 檢測(cè)血漿 SP、CGRP 的表達(dá)30
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理30-31
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-33
• 3.1 電針對(duì) C-IBS 大鼠血漿 CGRP、SP 含量的影響31-32
• 3.2 電針對(duì) D-IBS 模型大鼠血漿 CGRP、SP 的含量的影響32-33
• 4 小結(jié)33-34
• 四 電針對(duì)便秘及腹瀉型腸易激綜合征大鼠結(jié)腸粘膜 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 表達(dá)的影響34-45
• 1 實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物34
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器34
• 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑34-35
• 2 實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)分組35
• 2.2 模型制備35
• 2.3 取穴及針刺方法35
• 2.4 免疫組化檢測(cè)35-36
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理36
• 3 結(jié)果36-44
• 3.1 電針對(duì) C-IBS 結(jié)腸粘膜 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 表達(dá)的影響36-40
• 3.2 電針對(duì) D-IBS 結(jié)腸粘膜 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 表達(dá)的影響40-44
• 4 小結(jié)44-45
• 五 電針對(duì)便秘及腹瀉型腸易激綜合征大鼠結(jié)腸組織 TRPV1、PAR4、CGRP、SP mRNA 表達(dá)的影響45-58
• 1 實(shí)驗(yàn)材料45-46
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物45
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器45
• 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑45-46
• 1.4 主要溶液配制46
• 2 實(shí)驗(yàn)方法46-49
• 2.1 實(shí)驗(yàn)分組46
• 2.2 模型制備46
• 2.3 取穴及針刺方法46
• 2.4 標(biāo)本采集46
• 2.5 實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR 檢測(cè) TRPV1、PAR4、CGRP、SP mRNA 表達(dá)46-49
• 2.6 實(shí)時(shí)定量熒光 PCR 數(shù)據(jù)處理49
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理49
• 3 結(jié)果49-57
• 3.1 基因擴(kuò)增曲線49-51
• 3.2 基因熔解曲線51-52
• 3.3 數(shù)據(jù)分析結(jié)果52-57
• 4 小結(jié)57-58
• 六 電針對(duì)便秘及腹瀉型腸易激綜合征結(jié)腸組織 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 蛋白表達(dá)的影響58-68
• 1 材料與方法58-60
• 1.1 動(dòng)物58
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器58
• 1.3 主要試劑58-59
• 1.4 主要溶液配制59-60
• 2 實(shí)驗(yàn)方法60-63
• 2.1 動(dòng)物分組60
• 2.2 模型制備60
• 2.3 取穴及針刺方法60
• 2.4 標(biāo)本采集60
• 2.5 Western 印跡法檢測(cè)蛋白質(zhì)60-63
• 2.6 數(shù)據(jù)處理63
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果63-67
• 3.1 電針對(duì) C-IBS 結(jié)腸組織 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 蛋白表達(dá)的影響63-65
• 3.2 電針對(duì) D-IBS 結(jié)腸組織 TRPV1、PAR4、CGRP、SP 蛋白表達(dá)的影響65-67
• 4 小結(jié)67-68
• 討論68-90
• 1.腸易激綜合征的研究現(xiàn)狀68-71
• 1.1 腸易激綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)與臨床分型68
• 1.2 腸易激綜合征的病因和發(fā)病機(jī)制68-70
• 1.3 腸易激綜合征的治療方法70-71
• 2.針灸治療與 IBS71-72
• 3. IBS 動(dòng)物模型研究進(jìn)展72-75
• 3.1 現(xiàn)有的 IBS 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型73-74
• 3.2 IBS 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的選擇74-75
• 4.內(nèi)臟敏感性與 IBS75-77
• 5. TRPV1 與 IBS77-80
• 5.1 TRPV1 的分子學(xué)特征和分布77-78
• 5.2 TRPV1 的生理學(xué)作用78
• 5.3 TRPV1 在消化系統(tǒng)中的作用78-79
• 5.4 TRPV1 在 IBS 中的作用79-80
• 6. 蛋白酶激活受體 4 與 IBS80-82
• 6.1 蛋白酶激活受體家族80
• 6.2 PAR4 的結(jié)構(gòu)和分布80-81
• 6.3 PAR4 的功能81-82
• 7. CGRP 與 IBS82-85
• 7.1 CGRP 的分子生物學(xué)特征和分布82-83
• 7.2 CGRP 在消化系統(tǒng)中的作用83-84
• 7.3 CGRP 在 IBS 中的作用84-85
• 8. SP 與 IBS85-87
• 8.1 SP 的分子生物學(xué)特征和分布85
• 8.2 SP 在消化系統(tǒng)中的作用85-86
• 8.3 SP 在 IBS 中的作用86-87
• 9. 針刺通過(guò) TRPV1、PAR4、CGRP、SP 調(diào)節(jié) IBS 的機(jī)制87-90
• 結(jié)語(yǔ)90-91
• 參考文獻(xiàn)91-104
• 附錄104-105
• 查新報(bào)告105-114
• 詳細(xì)摘要114-119

【參考文獻(xiàn)】

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