發(fā)布時(shí)間：2017-08-01 13:11

  本文關(guān)鍵詞：基于馬達(dá)蛋白及NGF探尋推拿對坐骨神經(jīng)損傷大鼠軸漿運(yùn)輸功能的影響及機(jī)理

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【摘要】：[目的] 周圍神經(jīng)損傷是臨床的常見病、多發(fā)病,多以感覺、運(yùn)動(dòng)功能的障礙為主要癥狀。運(yùn)用推拿治療相關(guān)疾病,在臨床上取得了良好的療效,但其中機(jī)理尚未闡明。由于神經(jīng)功能恢復(fù)的基礎(chǔ)是軸漿運(yùn)輸功能的正常,因此本次研究對象選為坐骨神經(jīng)夾持損傷模型大鼠,以模擬臨床中周圍神經(jīng)的壓迫損傷,在通過推拿給予定時(shí)、定性、定量的干預(yù)后,以行為學(xué)、形態(tài)學(xué)作為療效評價(jià)的指標(biāo),從馬達(dá)蛋白及神經(jīng)生長因子在脊髓中表達(dá)的變化,探索推拿促進(jìn)軸漿運(yùn)輸功能恢復(fù)的機(jī)理,為臨床應(yīng)用推拿治療周圍神經(jīng)損傷疾病,改善患者的癥狀及預(yù)后提供有力科學(xué)證據(jù)。 [方法] 采用SD大鼠,進(jìn)行坐骨神經(jīng)夾持損傷造模,選取患側(cè)“穴位-神經(jīng)-肌肉區(qū)域”中的殷門、承山、陽陵泉三穴進(jìn)行推拿治療,從行為學(xué)角度,通過對其光熱耐痛閾和斜板試驗(yàn)的檢測,評價(jià)推拿治療后神經(jīng)和肌肉的感覺、運(yùn)動(dòng)恢復(fù)情況；從形態(tài)學(xué)角度,通過對其脊髓、損傷點(diǎn)神經(jīng)、肌肉的染色觀察,探尋推拿促進(jìn)神經(jīng)元再生修復(fù)的證據(jù)；并進(jìn)而通過檢測脊髓中馬達(dá)蛋白的表達(dá),評價(jià)推拿對軸漿運(yùn)輸功能動(dòng)力支持的影響；檢測脊髓中動(dòng)力蛋白激活蛋白與神經(jīng)生長因子的表達(dá),找尋推拿促進(jìn)軸漿運(yùn)輸功能恢復(fù)的證據(jù),最終進(jìn)一步理清推拿治療坐骨神經(jīng)損傷的作用機(jī)理和起效途徑等。 [結(jié)果] 1.行為學(xué) 光熱耐痛閾結(jié)果如下：造模7d后、推拿治療10次、20次后,左側(cè)(健側(cè))光熱耐痛閾各組間均無差異；造模7d后右側(cè)(患側(cè))光熱耐痛閾,模型組與正常組相比均有明顯差異(P0.05),說明坐骨神經(jīng)損傷后,大鼠的感覺功能減退,敏感度降低。推拿治療10次、20次后,大鼠右側(cè)光熱耐痛閾推拿治療組與模型組和模型對照組相比均有降低(P0.05),痛敏分?jǐn)?shù)推拿治療組與模型組相比有顯著性降低(P0.01),說明推拿可以促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷大鼠感覺功能的恢復(fù)。 斜板試驗(yàn)結(jié)果表明,造模7d后模型組與正常組相比有明顯差異(p0.05),說明坐骨神經(jīng)損傷后,大鼠的運(yùn)動(dòng)功能減退,肌力降低,造模成功。推拿治療10次后,推拿治療組與模型組和模型對照組相比均有顯著性升高(p0.05),且已接近正常組水平。推拿治療20次后,推拿治療組已達(dá)到甚至超過正常組水平,且與模型組和模型對照組相比仍有顯著性差異(p0.05),可能與推拿幫助改善肌力的功效有關(guān)。說明推拿可以有效促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能和下肢肌力的恢復(fù)。 2.形態(tài)學(xué) 腓腸肌濕重結(jié)果如下：造模7d后、推拿治療10次、20次后,各組大鼠左側(cè)腓腸肌濕重均沒有差異。造模7d后,假手術(shù)組與模型組大鼠患側(cè)腓腸肌濕重均有一定程度的降低,且模型組更為明顯,模型組與正常組和假手術(shù)組相比,其腓腸肌濕重和腓腸肌恢復(fù)率顯著性降低(P0.05),說明假手術(shù)組單純肌肉的剝離對肌肉產(chǎn)生了一定的影響。推拿治療10次后,推拿治療組大鼠腓腸肌濕重和腓腸肌恢復(fù)率均有升高,且與模型組和模型對照組有顯著性差異(P0.05),但各組大鼠的腓腸肌濕重和恢復(fù)率與正常組相比仍存在差異(P0.05)。推拿治療20次后,推拿治療組大鼠腓腸肌濕重和恢復(fù)率仍高于模型組和模型對照組,但與正常組相比仍有一定差距(P0.05) 造模7d后,模型組右側(cè)腓腸肌肌細(xì)胞直徑明顯小于正常組和假手術(shù)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。推拿治療10次后,推拿治療組大鼠右側(cè)腓腸肌肌細(xì)胞直徑有一定程度增大,且與模型組和模型對照組比較存在顯著差異(P0.05),但與正常組相比仍然較低(P0.05)。推拿治療20次后,各組大鼠右側(cè)腓腸肌肌細(xì)胞直徑皆逐漸升高,且推拿治療組明顯優(yōu)于模型組和模型對照組(P0.05),但尚未達(dá)到正常組水平。 脊髓HE染色結(jié)果：正常情況下,脊髓腹角神經(jīng)元細(xì)胞排列整齊,細(xì)胞核位于細(xì)胞中央,核仁清晰,尼氏體均勻分布；模型組脊髓腹角神經(jīng)元排列不規(guī)則,數(shù)量減少,細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、變性等現(xiàn)象,染色較淺,胞核移向邊緣,尼氏體溶解消失；經(jīng)推拿治療后,脊髓腹角神經(jīng)元變性、損傷程度較輕,排列較規(guī)則,部分細(xì)胞核移向邊緣,可見少量細(xì)胞核再生。 坐骨神經(jīng)HE染色結(jié)果：正常情況下,神經(jīng)元軸突及雪旺細(xì)胞排列整齊；模型組部分神經(jīng)元軸突及雪旺細(xì)胞排列不規(guī)則,出現(xiàn)腫脹、破潰,甚至崩裂,而被巨噬細(xì)胞吞噬,膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)明顯增生；經(jīng)推拿治療后雪旺細(xì)胞及軸突基本正常。 腓腸肌HE染色結(jié)果：正常情況下,腓腸肌細(xì)胞大小一致,排列整齊,胞核清晰,胞漿染色均勻,肌纖維間隙適中；模型組腓腸肌肌細(xì)胞直徑明顯縮小,分布不均勻,胞核清晰,但數(shù)量明顯增多,肌纖維間隙增大,呈現(xiàn)萎縮現(xiàn)象；經(jīng)推拿治療后腓腸肌肌細(xì)胞直徑較均勻,胞核清晰,肌纖維萎縮程度較輕。 3.機(jī)理研究 正常組及假手術(shù)組大鼠馬達(dá)蛋白(動(dòng)力蛋白Dynein,驅(qū)動(dòng)蛋白Kinesin、動(dòng)力蛋白激活蛋白Dynactin)、NGF在脊髓中均有少量表達(dá),陽性神經(jīng)元的胞核呈藍(lán)色,胞漿呈棕褐色；造模7d后,模型組大鼠以上研究指標(biāo)在脊髓中的表達(dá)均較正常組和假手術(shù)組染色加深,免疫組化的平均光密度亦增高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；推拿治療10次后,模型組、模型對照組及推拿治療組大鼠脊髓中Dynein、Kinesin、Dynactin、NGF的免疫組化平均光密度均較正常組顯著增高,且推拿治療組的染色范圍和程度明顯優(yōu)于模型組,與其余四組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；推拿治療20次后,在脊髓中推拿治療組的馬達(dá)蛋白及NGF的表達(dá)與其余四組比較仍有顯著性差異,而Dynactin在推拿組中的表達(dá)亦維持在較高水平,但是模型組中的表達(dá)卻降低到與正常組無顯著性差異的水平,結(jié)合模型組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn),推斷模型組大鼠的逆向軸漿運(yùn)輸功能發(fā)生障礙,因此即使NGF能夠高表達(dá),也無法被及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)至神經(jīng)元胞體,從而導(dǎo)致周圍神經(jīng)的損傷沒有得到及時(shí)修復(fù)�？紤]到受治療時(shí)間的限制,按實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,如果繼續(xù)治療,當(dāng)受損神經(jīng)恢復(fù)到一定程度,Kinesin及Dynein的表達(dá)會(huì)逐漸降低,趨于正常。模型組中的表達(dá)情況也是如此,但推拿組的軸漿運(yùn)輸功能會(huì)得到改善。因而在最終比較時(shí),雖然Kinesin及Dynein的表達(dá)在推拿組與模型組間比較無顯著性差異,但是大鼠的行為學(xué)會(huì)出現(xiàn)較大差異,即推拿組要明顯優(yōu)于模型組。這得益于通過推拿,提高了脊髓中馬達(dá)蛋白的表達(dá),促進(jìn)了軸漿運(yùn)輸功能的恢復(fù)。 [結(jié)論] 1推拿可以提高坐骨神經(jīng)損傷大鼠腓腸肌的肌肉恢復(fù)率以及肌力,并能提升大鼠的痛覺敏感程度,從而促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷大鼠運(yùn)動(dòng)和感覺功能的恢復(fù)； 2推拿能夠提高坐骨神經(jīng)損傷大鼠脊髓中馬達(dá)蛋白的表達(dá),為軸漿運(yùn)輸功能的恢復(fù)提供了動(dòng)力基礎(chǔ),為神經(jīng)元與靶器官之間建立了營養(yǎng)傳遞通路； 3推拿能夠提高坐骨神經(jīng)損傷大鼠脊髓中動(dòng)力蛋白激活蛋白與神經(jīng)生長因子的表達(dá),為神經(jīng)元的存活與再生、受損軸突的出芽與生長提供營養(yǎng)保障。 4從馬達(dá)蛋白動(dòng)力層面促進(jìn)軸漿運(yùn)輸?shù)陌l(fā)生,并進(jìn)而從神經(jīng)營養(yǎng)物質(zhì)傳遞層面改善軸漿運(yùn)輸?shù)墓δ?應(yīng)該為推拿治療周圍神經(jīng)損傷的起效機(jī)理之一
【關(guān)鍵詞】：機(jī)理 馬達(dá)蛋白 NGF 推拿 軸漿運(yùn)輸 周圍神經(jīng)損傷
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R244.1
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 英文~.略詞12-13
• 文獻(xiàn)綜述13-39
• 綜述一、中西醫(yī)對周圍神經(jīng)損傷的認(rèn)識13-21
• 1 周圍神經(jīng)損傷的中醫(yī)學(xué)研究現(xiàn)狀13-16
• 1.1 病因概述13-14
• 1.2 病機(jī)分析14
• 1.3 治療方法14-16
• 1.4 機(jī)理初探16
• 2 周圍神經(jīng)損傷的西醫(yī)學(xué)研究現(xiàn)狀16-21
• 2.1 病因概述16-17
• 2.2 主要癥狀17
• 2.3 治療手段17-19
• 2.4 機(jī)理初探19-21
• 綜述二、推拿治療周圍神經(jīng)損傷的相關(guān)研究21-29
• 1 推拿治療周圍神經(jīng)損傷的臨床研究21-25
• 1.1 推拿治療神經(jīng)根型頸椎病21-22
• 1.2 推拿治療腰椎間盤突出癥22-23
• 1.3 推拿治療臀上皮神經(jīng)炎23-24
• 1.4 推拿治療臂叢神經(jīng)損傷24
• 1.5 推拿治療腕管綜合征24-25
• 2 推拿治療周圍神經(jīng)損傷的實(shí)驗(yàn)研究25-29
• 綜述三、軸漿運(yùn)輸功能在周圍神經(jīng)修復(fù)過程中的作用研究29-33
• 1 周圍神經(jīng)修復(fù)所依賴的微觀環(huán)境29
• 2 周圍神經(jīng)成功修復(fù)的微觀標(biāo)志29-30
• 3 軸漿運(yùn)輸?shù)南嚓P(guān)研究30-33
• 3.1 軸漿運(yùn)輸?shù)膭?dòng)力來源30-31
• 3.2 軸漿運(yùn)輸障礙的發(fā)生機(jī)制31
• 3.3 軸漿運(yùn)輸功能的重建31-33
• 綜述四、NGF促進(jìn)周圍神經(jīng)修復(fù)的機(jī)理研究33-37
• 1 NGF相關(guān)概述33-34
• 1.1 NGF的發(fā)現(xiàn)與結(jié)構(gòu)33
• 1.2 NGF的分布與表達(dá)33-34
• 1.3 NGF的生物學(xué)效應(yīng)34
• 2 周圍神經(jīng)損傷涉及NGF的相關(guān)研究34-36
• 3 NGF修復(fù)損傷神經(jīng)的機(jī)理36-37
• 綜述小結(jié)37-39
• 前言39-41
• 材料和方法41-50
• 實(shí)驗(yàn)一、推拿對坐骨神經(jīng)損傷大鼠的行為學(xué)影響41-43
• 實(shí)驗(yàn)二、推拿對坐骨神經(jīng)損傷大鼠的形態(tài)學(xué)影響43-45
• 實(shí)驗(yàn)三、從馬達(dá)蛋白表達(dá)的變化研究推拿對軸漿運(yùn)輸恢復(fù)的作用45-49
• 實(shí)驗(yàn)四、從Dynactin及NGF探尋推拿促進(jìn)軸漿運(yùn)輸恢復(fù)的機(jī)理49-50
• 整體技術(shù)路線圖50-51
• 結(jié)果51-69
• 討論69-79
• 結(jié)論79-81
• 參考文獻(xiàn)81-89
• 致謝89-91
• 個(gè)人簡歷91-93
• 附件93-99

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5 汪濤;膽堿能抗炎通路對大鼠呼吸機(jī)所致肺損傷的影響[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2010年

6 宋標(biāo);大鼠腦基底動(dòng)脈EDHF反應(yīng)及外源性EDHF對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

7 許黎忠;螺內(nèi)酯對百草枯中毒大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

8 詹增土;慢性全腦低灌注大鼠側(cè)腦室旁白質(zhì)改變及MMP-2，3和7的表達(dá)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

9 向永紅;慢性間斷性低氧大鼠氧化應(yīng)激狀態(tài)與RAS相關(guān)性研究及NAC干預(yù)作用[D];中南大學(xué);2010年

10 袁浩;紅霉素對慢性阻塞性肺疾病大鼠TGFβ_1、SLPI表達(dá)水平的影響[D];中南大學(xué);2010年

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本文編號：604393