本文關(guān)鍵詞：電針刺激對BMSCs移植治療腦出血大鼠Wnt信號通路的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：觀察電針刺激對BMSCs移植治療腦出血大鼠Wnt信號通路中Wnt3a、β-catenin、CyclinD1在出血灶周圍腦組織表達的影響,探討電針刺激能否增強Wnt信號通路的激活,進而促進植入BMSCs的增殖、分化,明顯改善神經(jīng)功能缺失癥狀,提高BMSCs移植治療腦出血的療效。方法：將冷凍保存的BMSCs復(fù)蘇、傳代,待細胞生長至80%左右融合時換成預(yù)誘導(dǎo)液,24h后再換成無血清誘導(dǎo)液誘導(dǎo)6h,收集細胞,調(diào)整細胞濃度為2.5×107個/ml備用。通過腦立體定位儀向SD大鼠腦尾殼核注射膠原酶2μl和肝素1μl建立腦出血模型,術(shù)后2h,24h,48h分別進行神經(jīng)功能缺損評分(NSS評分),大于9分者入選實驗組。實驗動物分為3組：1.生理鹽水組(Control組)：術(shù)后第3天注入生理鹽水20μl；2.細胞移植組(BMSCs組)：術(shù)后第3天移植BMSCs20μl;3.細胞移植加電針刺激組(Ea BMSCs組)：術(shù)后第3天移植BMSCs20μl,2h后電針刺激百會穴和大椎穴,之后每天電針刺激1次。根據(jù)治療時間不同各組再分為1d、3d、5d、7d、14d 5個亞組,在相應(yīng)時間點進行NSS評分,然后處死大鼠取材。采用免疫組化SABC法觀察Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1在腦組織的表達情況；RT-PCR半定量檢測Wnt3a、β-cateni、Cyclin D1mRNA, Western-blotting檢測β-catenin、Cyclin D1蛋白在不同組別各個時間點的表達情況。結(jié)果：1.各組NSS評分隨著時間延長逐漸降低,Ea BMSCs組在3d、5d、7d、14d低于Control組,p＜0.05；BMSCs組5d低于Control組,p0.05。2.免疫組化顯示陽性Wnt3a表達位于神經(jīng)細胞核、胞漿和神經(jīng)纖維；RT-PCR半定量檢測Wnt3amRNA表達情況：Ea BMSCs組3d、5d、7d、14d高于Control組,p＜0.05；Ea BMSCs組5d、7d高于BMSCs,p＜0.05；Ea BMSCs組Wnt3a mRNA1d組開始表達逐漸增加,至第3d達高峰,隨后下降,在第7d表達再次出現(xiàn)峰值。3.免疫組化顯示陽性β-catenin表達位于神經(jīng)細胞漿、胞核。RT-PCR半定量檢測β-catenin mRNA表達情況：Ea BMSCs組1d、3d、7d、14d高于Control組,p＜0.05；Ea BMSCs組1d、3d、7d高于BMSCs組,p＜0.05；BMSCs組5d高于Control組,p0.05;Ea BMSCs組β-catenin mRNA表達先逐漸降低,在5d后表達開始增加,第7d時達到峰值后下降；BMSCs組在第5d出現(xiàn)表達高峰。β-catenin蛋白表達：Ea BMSCs組在各個時間點的表達均高于BMSCs組和Control組,p0.05; BMSCs組在第1d、7d高于Control組,p＜0.05；Ea BMSCs組β-catenin蛋白表達在第3d出現(xiàn)首個表達高峰后逐漸降低,5d后開始增加,第7d再次出現(xiàn)峰值,隨后表達降低；BMSCs組在第7d出現(xiàn)峰值。4.免疫組化顯示陽性Cyclin D1表達位于神經(jīng)細胞胞漿、胞核。RT-PCR半定量檢測Cyclin D1 mRNA表達情況：Ea BMSCs組1d、5d、7d、14d高于Control組,p＜0.05；Ea BMSCs組1d高于BMSCs組,p＜0.05；BMSCs組7d組高于Control組,p＜0.05,Ea BMSCs組Cyclin D1 mRNA表達先逐漸降低,在3d后表達開始增加,7d達到峰值后下降；BMSCs組在第7d出現(xiàn)表達高峰。Cyclin D1蛋白表達：Ea BMSCs組3d、5d、7d、14d高于Control組比較,p＜0.05；Ea BMSCs組3d、5d、7d高于BMSCs組,p0.05;BMSCs組7d、14d高于Control組,p＜0.05；Control組1d高于Ea BMSCs組和BMSCs組,p＜0.05；Ea BMSCs組和BMSCs組Cyclin D1蛋白表達在第3d達高峰后降低,5d后逐漸增加,第14d維持在一個較高的表達水平。結(jié)論：1.單純BMSCs移植治療,可上調(diào)ICH大鼠出血灶周圍腦組織β-catenin、CyclinDl mRNA和蛋白表達,激活Wnt信號通路,促進植入BMSCs增殖分化,改善神經(jīng)功能缺失癥狀。2.BMSCs移植結(jié)合電針刺激治療,ICH大鼠出血灶周圍腦組織Wnt3a、β-catenin、CyclinDl mRNA和β-catenin、CyclinD 1蛋白表達高于單純BMSCs移植,更有效激活Wnt信號通路；促進植入BMSCs增殖分化；同時電針刺激可有效防止偏癱側(cè)肢體廢用性萎縮,明顯改善ICH大鼠神經(jīng)功能缺失癥狀。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 腦出血 電針 Wnt3a β-catenin Cyclin D1
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R245
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-28
• 結(jié)果28-34
• 討論34-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-53
• 英漢縮略詞對照表53-55
• 致謝55-56
• 綜述56-67
• 參考文獻62-67
• 附圖67-72

【參考文獻】

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本文編號：304438