近些年研究表明,腫瘤血管為腫瘤細胞提供所需的營養(yǎng)物質(zhì)與氧氣,同時調(diào)節(jié)了腫瘤所處的局部微環(huán)境�？寡苤委熾m然可以抑制腫瘤生長,但已經(jīng)有大量數(shù)據(jù)證明其會帶來一系列負面問題,包括惡化微環(huán)境促進腫瘤演進、增加腫瘤組織內(nèi)的壞死、不利于化療藥物的遞送或?qū)够熀桶邢蛩幬镏委熜Ч�。如若能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤微環(huán)境的惡化,弱化對腫瘤細胞的壓迫作用,則將有助于改善腫瘤惡性演進的相關(guān)行為。內(nèi)皮細胞的非物理暴露或損傷,所引起的微循環(huán)腫瘤血管滲透性增加,能夠減少血栓形成和腫瘤細胞轉(zhuǎn)移,增加腫瘤的血流供應,有效的改善腫瘤微環(huán)境,抑制腫瘤細胞的惡性演進。當內(nèi)皮細胞滲透作用增強,腫瘤組織內(nèi)氧分壓和營養(yǎng)滲透更加均勻。再通過HIF1a-VEGFa通路的反饋,降低腫瘤細胞的招募或模擬血管的生成。形態(tài)學上,會出現(xiàn)腫瘤血管網(wǎng)從多分枝、短間隔轉(zhuǎn)變?yōu)樯俜种�、間隔長的正�；⒀芫W(wǎng)。本研究中,我們篩選了具有血管調(diào)節(jié)活性的天然分子,并觀察到6-姜酚,可以通過調(diào)節(jié)腫瘤血管的正�；种颇[瘤的演進,進一步通過蛋白組學分析指向VEGFR2的激活可能是6-姜酚的直接調(diào)節(jié)靶點,生化和細胞功能研究表明6-姜酚可以調(diào)偏振性增強VEGFR2與VEGFa的結(jié)合,...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    第一節(jié) 6-姜酚簡介
        1.1.1 6-姜酚研究現(xiàn)狀
    第二節(jié) 腫瘤發(fā)生發(fā)展過程
        1.2.1 腫瘤發(fā)生的相關(guān)研究
        1.2.2 腫瘤惡性演進之路-轉(zhuǎn)移
        1.2.3 腫瘤與血管生成
        1.2.4 抗腫瘤血管生成機制及耐藥體系
        1.2.5 腫瘤微環(huán)境
    第三節(jié) 本課題設(shè)計背景
    第四節(jié) 實驗設(shè)計方案
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 主要研究內(nèi)容
第二章 實驗材料與方法
    第一節(jié) 實驗儀器與試劑匯總
        2.1.1 實驗儀器
        2.1.2 實驗試劑登記表一
        2.1.3 實驗試劑登記表二
    第二節(jié) 6-姜酚在動物水平對血管滲透性的影響
        2.2.1 實驗材料
            2.2.1.1 實驗對象
            2.2.1.2 溶劑配置
        2.2.2 實驗方法
            2.2.2.1 6-姜酚于BALB/c鼠上的藥效學研究
            2.2.2.2 6-姜酚于Tg斑馬魚上的藥效學研究
    第三節(jié) 6-姜酚在細胞水平的藥效學影響
        2.3.1 實驗材料
            2.3.1.1 實驗對象
            2.3.1.2 溶液配置
        2.3.2 實驗方法
            2.3.2.1 細胞復蘇、培養(yǎng)及凍存
            2.3.2.2 6-姜酚的IC50實驗
            2.3.2.3 6-姜酚對HUVEC細胞的管道形成能力影響的實驗
            2.3.2.4 6-姜酚對單層HUVEC細胞滲透性影響的實驗
    第四節(jié) 6-姜酚作用機制探索
        2.4.1 實驗材料
            2.4.1.1 實驗對象
            2.4.1.2 VEGFR2蛋白提取
        2.4.2 實驗方法
            2.4.2.1 蛋白組學評估 6-姜酚作用引起的組間蛋白差異的分析
            2.4.2.2 微量熱泳動測定 6-姜酚與VEGFR2的相互作用
            2.4.2.3 Pull-Down實驗測定 6-姜酚與VEGFR2的相互作用
            2.4.2.4 Biacore測定 6-姜酚與VEGFR2的相互作用
    第五節(jié) 6-姜酚作用機制驗證
        2.5.1 實驗材料
            2.5.1.1 實驗對象
            2.5.1.2 溶液配置
        2.5.2 實驗方法
            2.5.2.1 分子對接模擬 6-姜酚與VEGFR2的相互作用
            2.5.2.2 熒光染料評估 6-姜酚對細胞骨架的影響
            2.5.2.3 掃描電鏡下 6-姜酚對細胞形態(tài)及滲透性影響
            2.5.2.4 Western blot
    第六節(jié) 6-姜酚作用病理學實驗檢測
        2.6.1 實驗材料
            2.6.1.1 實驗對象
            2.6.1.2 溶液配置
        2.6.2 實驗方法
            2.6.2.1 組織處理
            2.6.2.2 HE染色方法
            2.6.2.3 PH探針檢測腫瘤微環(huán)境方法
            2.6.2.4 免疫組織化學染色方法
第三章 實驗結(jié)果與討論
    第一節(jié) 6-姜酚通過增加微血管滲透性促進血管正�；�
        3.1.1 鼠耳、鼠足及腹膜血管滲透性受不同濃度 6-姜酚影響
        3.1.2 不同濃度 6-姜酚促進單層內(nèi)皮細胞滲透性
        3.1.3 不同濃度 6-姜酚促進低氧誘導的斑馬魚血管正�；�
        3.1.4 不同濃度 6-姜酚促進內(nèi)皮細胞管腔形成正�；�
    第二節(jié) 6-姜酚可增強VEGFA與VEGFR2的激動作用
        3.2.1 蛋白質(zhì)組學分析
        3.2.2 微量熱泳動和Biacore實驗
        3.2.3 Pull-down試驗
        3.2.4 分子對接模擬 6-姜酚對VEGFa / VEGFR2作用
        3.2.5 Western Blot信號驗證
        3.2.6 通過骨架形態(tài)及掃描電鏡進行細胞形態(tài)評估
    第三節(jié) 6-姜酚調(diào)節(jié)VEGFR1/R2平衡改善腫瘤微環(huán)境抑制腫瘤演進
        3.3.1 6-姜酚能夠有效抑制腫瘤
        3.3.2 病理切片的血管正�；u估
        3.3.3 壞死區(qū)域評價
        3.3.4 腫瘤組織微環(huán)境PH檢測
        3.3.5 免疫組化染色評估 6-姜酚對相關(guān)蛋白的影響
        3.3.6 6-姜酚激動內(nèi)皮細胞改善腫瘤微環(huán)境
    第四節(jié) 腫瘤微環(huán)境的改善有助于順鉑的化療作用
    第五節(jié) 討論
第四章 結(jié)論與展望
參考文獻
致謝
個人簡歷及在學期間發(fā)表的學術(shù)論文與研究成果



本文編號：4037574