目的:通過莪黃灌腸液對(duì)SW480細(xì)胞HIF-1α通路uPA、uPAR基因表達(dá)的影響,探討莪黃灌腸液對(duì)SW480細(xì)胞侵襲與遷移的影響。方法:根據(jù)隨機(jī)數(shù)學(xué)分組的原則,將50只健康SD雄性大鼠分成隨機(jī)5組并逐個(gè)編號(hào),體重控制在(200±20)g。通過預(yù)實(shí)驗(yàn)得出的藥物分組量分別灌胃給藥:莪黃灌腸液(莪黃湯)每毫升藥液中含生藥2 g,莪黃灌腸液(莪黃湯)組由低、中、高(6.075 g/kg,12.15 g/kg,24.3 g/kg)劑量組(灌胃劑量2 ml)組成,空白組為生理鹽水組(灌胃劑量2 ml,pH 7.2),陽(yáng)性對(duì)照組由腹腔注射氟尿嘧啶0.025 g/(kg·d),調(diào)整注射劑量1 ml構(gòu)成。標(biāo)準(zhǔn)化灌胃1周,無菌條件下提取各組含藥血清。在體外使用含藥血清體培養(yǎng)SW480細(xì)胞,劃痕實(shí)驗(yàn)觀察莪黃灌腸液含藥血清在體外對(duì)SW480細(xì)胞遷移能力的影響;Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞侵襲能力;Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞中HIF-1α、uPA、uPAR蛋白表達(dá)。結(jié)果:預(yù)實(shí)驗(yàn)提示莪黃灌腸液對(duì)大鼠無明顯副作用。SW480細(xì)胞具有明顯的遷移及侵襲能力。各組莪黃灌腸液含藥血清能抑制SW480細(xì)...

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圖1 細(xì)胞劃痕后鏡下觀察(×100)

腫瘤細(xì)胞的侵襲性也是惡性腫瘤的特性之一,通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)莪黃灌腸液對(duì)SW480細(xì)胞侵襲能力的影響。結(jié)果如表2、圖3所示:高中低中藥組及氟尿嘧啶組含藥血清對(duì)SW480細(xì)胞均有抑制其侵襲效果,在中藥高濃度組作用最強(qiáng)(莪黃灌腸液各組及氟尿嘧啶組與生理鹽水組對(duì)比,抑制腫瘤....

圖2 24 h各組細(xì)胞遷移率直方圖對(duì)比

表1劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)24h各組細(xì)胞遷移率Tab.1Cellmobilitywasmeasuredbyscratchtestfor24hoursineachgroupGroupCellmobility(%,xˉ±s,n=10)Blankg....

圖4 各組中HIF-1α、uPA、uPAR含量灰度值比值直方圖

表3各組目的蛋白表達(dá)灰度值比值表(xˉ±s,n=10)Tab.3Grayscaleratiotableofexpressionoftargetproteinineachgroup(xˉ±s,n=10)GroupHIF-1αuPA....

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